Необходимость тестирования остаточной ДНК E.coli
В таких областях, как клеточная и генная терапия, вирусные плазмиды амплифицируются и ферментируются с использованием E. coli в качестве хозяина. Амплифицированная плазмида должна пройти контроль качества остаточной ДНК E.coli, прежде чем ее можно будет использовать для заражения клеток 293 и упаковки вируса. Поэтому обнаружение остаточной ДНК E.coli имеет решающее значение.
Нормативные требования и методы тестирования
Действующие рекомендации ВОЗ и FDA США рекомендуют, чтобы содержание остаточной ДНК в готовых продуктах не превышало 10 нг/агент, а FDA США также утверждает, что остаточная ДНК в клетках-хозяевах биологических препаратов не должна превышать 100 пг/агент. Общие принципы Европейской фармакопеи предусматривают, что предел остаточной ДНК в биологических препаратах не должен превышать 10 нг/дозу, однако для некоторых конкретных вакцин предел остаточной ДНК более строгий, например, в инактивированной вакцине против гепатита А содержание остаточной ДНК не должно превышать 100 пг/дозу, а в вакцине против гепатита В не должно превышать 10 пг/дозу. Издание Китайской фармакопеи 2020 года, часть III, предусматривает, что остаток ДНК в биологических препаратах, полученных на клеточном матриксе, не должен превышать 100 пг/дозу, а остаток ДНК в вакцинах, произведенных на бактериальном или грибковом матриксе, не должен превышать 10 нг/дозу.
Кроме того, по методам определения остатков экзогенной ДНК национальные фармакопеи также дают методические рекомендации. В Общем положении 1130 Фармакопеи США 2017 г. описаны три метода определения экзогенных остатков ДНК, а именно гибридизация ДНК-зонда, пороговый метод и метод количественной ПЦР в реальном времени. Европейская фармакопея предлагает количественную ПЦР в реальном времени и иммуноферментный метод, два чувствительных аналитических метода для количественного определения остаточной ДНК клеток-хозяев. Версия трех общих правил 3407 Китайской фармакопеи 2020 также предусматривает, что методами обнаружения остатков ДНК клетки-хозяина являются гибридизация зонда ДНК, флуоресцентное окрашивание и количественная ПЦР.
Среди них метод qPCR обладает чрезвычайно высокой чувствительностью, специфичностью последовательности и точностью, что может обеспечить надежное средство обнаружения для биофармацевтической промышленности при исследованиях процессов и контроле качества готовой продукции, и теперь он стал предпочтительным методом обнаружения для каждого производителя биологических препаратов.
Информация о продуктах Bluekit
Особенности продукта
Быстрое обнаружение, высокая специфичность, надежная работа, самый низкий предел обнаружения может достигать уровня «fg».
Параметры продукта
- Диапазон обнаружения: 3,00×101 ~3,00×105 фг/мкл.
- Предел количественного определения:00×101фг/мкл
- Предел обнаружения:00 фг/мкл
- Точность: CV% ≤ 15%.
Распространенные проблемы обнаружения и меры предосторожности
1. Этот набор предназначен только для исследований in vitro, а не для клинической диагностики.
2. Комплект необходимо использовать в течение срока действия.
3. Все компоненты набора рекомендуется расплавить в условиях низкой температуры, а затем использовать.
4. Строго соблюдайте инструкции по методу работы, используйте набор вспомогательных реагентов для обеспечения наилучшего эффекта обнаружения.
5. Обратите внимание на различные этапы отбора проб, своевременно замените наконечник, чтобы избежать перекрестного загрязнения, не открывайте крышку в течение длительного времени.
6. На окончательные результаты испытаний могут существенно повлиять эффективность реагентов, методы работы оператора и условия проведения испытаний.
Консультация по продукту
Телефон: +86-18013115357
Электронная почта:info@hillgene.com
Время публикации: 2024-01-11 10:31:30
