La nécessité des tests d'ADN résiduel d'E.coli
Dans des domaines tels que la thérapie cellulaire et génique, les plasmides viraux sont amplifiés et fermentés en utilisant E. coli comme hôte. Le plasmide amplifié doit subir un contrôle de qualité de l'ADN résiduel d'E.coli avant de pouvoir être utilisé pour infecter 293 cellules et emballer le virus. Par conséquent, la détection de l’ADN résiduel d’E. coli est essentielle.
Exigences réglementaires et méthodes de test
Les directives actuelles de l'OMS et de la FDA américaine recommandent que l'ADN résiduel dans les produits finis ne dépasse pas 10 ng/agent, et la FDA américaine déclare également que l'ADN résiduel dans les cellules hôtes des produits biologiques ne doit pas dépasser 100 pg/agent. Les principes généraux de la Pharmacopée européenne stipulent que la limite d'ADN résiduel dans les produits biologiques ne doit pas être supérieure à 10 ng/dose, mais la limite d'ADN résiduel pour certains vaccins particuliers est plus stricte, par exemple, l'ADN résiduel dans le vaccin inactivé contre l'hépatite A ne doit pas être supérieur à 100 pg/dose, et celui dans le vaccin contre l'hépatite B ne doit pas être supérieur à 10 pg/dose. L'édition 2020 de la Pharmacopée chinoise, Partie III, stipule que les résidus d'ADN dans les préparations biologiques produites sur une matrice cellulaire ne doivent pas dépasser 100 pg/dose, et que les résidus d'ADN dans les vaccins produits sur une matrice bactérienne ou fongique ne doivent pas dépasser 10 ng/dose.
En outre, pour les méthodes de détermination des résidus d’ADN exogène, les pharmacopées nationales donnent également des recommandations d’orientation. L'édition 2017 de la Pharmacopée américaine de la disposition générale 1130 de l'USP40-NF35 décrit trois méthodes pour la détermination des résidus d'ADN exogènes, à savoir l'hybridation de sondes ADN, la méthode de seuil et la méthode de PCR quantitative en temps réel. La Pharmacopée Européenne propose la PCR quantitative en temps réel et la méthode immunoenzymatique, deux méthodes analytiques sensibles pour quantifier l'ADN résiduel des cellules hôtes. La version 2020 de la Pharmacopée chinoise des trois règles générales 3407 stipule également que les méthodes de détection des résidus d'ADN des cellules hôtes sont l'hybridation de sondes ADN, la coloration par fluorescence et la PCR quantitative.
Parmi elles, la méthode qPCR présente une sensibilité, une spécificité de séquence et une précision extrêmement élevées, ce qui peut fournir un moyen de détection fiable pour l'industrie biopharmaceutique dans la recherche sur les processus et le contrôle qualité des produits finis, et elle est désormais devenue la méthode de détection préférée de chaque fabricant de produits biologiques.
Informations sur les produits Bluekit
Caractéristiques du produit
Détection rapide, forte spécificité, performances fiables, la limite de détection la plus basse peut atteindre le niveau « fg ».
Paramètres du produit
- Plage de détection : 3,00 × 101 ~ 3,00 × 105fg/μL
- Limite de quantification：00×101fg/μL
- Limite de détection :00 fg/μL
- Précision : CV% ≤ 15%.
Problèmes de détection courants et précautions
1. Ce kit est destiné uniquement à la recherche in vitro et non au diagnostic clinique.
2. Le kit doit être utilisé pendant la période de validité.
3. Il est recommandé de fondre tous les composants du kit dans un environnement à basse température, puis de les utiliser.
4. Respectez strictement les instructions de la méthode de fonctionnement, toute l'utilisation du kit prenant en charge les réactifs pour garantir le meilleur effet de détection.
5. Faites attention aux différentes étapes d'échantillonnage en temps opportun pour remplacer la pointe, pour éviter toute contamination croisée, évitez d'ouvrir le couvercle pendant une longue période.
6. Les résultats finaux des tests peuvent être considérablement influencés par l'efficacité des réactifs, les méthodes opératoires de l'opérateur et l'environnement de test.
Consultation sur les produits
Téléphone : +86-18013115357
Courriel :info@hillgene.com
Heure de publication : 2024-01-11 10:31:30
