E.coli-Rest-DNA-Nachweiskit (qPCR)

Die Notwendigkeit eines Tests auf E. coli-Rest-DNA

In Bereichen wie der Zell- und Gentherapie werden virale Plasmide unter Verwendung von E. coli als Wirt amplifiziert und fermentiert. Das amplifizierte Plasmid muss einer Qualitätskontrolle der E. coli-Rest-DNA unterzogen werden, bevor es zur Infektion von 293-Zellen und zur Verpackung des Virus verwendet werden kann. Daher ist der Nachweis von E. coli-Rest-DNA von entscheidender Bedeutung. 

Regulatorische Anforderungen und Testmethoden

Aktuelle Richtlinien der WHO und der US-amerikanischen FDA empfehlen, dass die Rest-DNA in Fertigprodukten nicht mehr als 10 ng/Wirkstoff betragen darf, und die US-amerikanische FDA gibt außerdem an, dass die Rest-DNA in Wirtszellen von Biologika nicht mehr als 100 pg/Wirkstoff betragen sollte. In den Allgemeinen Grundsätzen des Europäischen Arzneibuchs ist festgelegt, dass die Rest-DNA-Grenze in biologischen Produkten nicht mehr als 10 ng/Dosis betragen sollte. Allerdings ist die Rest-DNA-Grenze für einige bestimmte Impfstoffe strenger, z. B. sollte die Rest-DNA im inaktivierten Impfstoff gegen Hepatitis A nicht mehr als 100 pg/Dosis und im Impfstoff gegen Hepatitis B nicht mehr als 10 pg/Dosis betragen. In der Ausgabe 2020 des Chinesischen Arzneibuchs, Teil III, ist festgelegt, dass der DNA-Rückstand in biologischen Präparaten, die auf einer zellulären Matrix hergestellt werden, 100 pg/Dosis nicht überschreiten darf und dass der DNA-Rückstand in Impfstoffen, die auf einer Bakterien- oder Pilzmatrix hergestellt werden, 10 ng/Dosis nicht überschreiten darf.

Darüber hinaus geben nationale Arzneibücher auch Leitlinienempfehlungen für die Methoden zur Bestimmung exogener DNA-Rückstände. In der U.S. Pharmacopoeia Ausgabe 2017 von USP40-NF35 General Provision 1130 werden drei Methoden zur Bestimmung exogener DNA-Reste beschrieben: DNA-Sondenhybridisierung, Schwellenwertmethode und quantitative Echtzeit-PCR-Methode. Das Europäische Arzneibuch schlägt die quantitative Echtzeit-PCR und die immunoenzymatische Methode vor, zwei empfindliche Analysemethoden zur Quantifizierung der restlichen DNA von Wirtszellen. Die chinesische Pharmakopöe 2020-Version der drei allgemeinen Regeln 3407 legt außerdem fest, dass die Methoden zum Nachweis von DNA-Rückständen der Wirtszelle DNA-Sondenhybridisierung, Fluoreszenzfärbung und quantitative PCR sind.

Unter anderem weist die qPCR-Methode eine extrem hohe Empfindlichkeit, Sequenzspezifität und Genauigkeit auf, die ein zuverlässiges Nachweismittel für die biopharmazeutische Industrie in der Prozessforschung und Qualitätskontrolle von Fertigprodukten darstellen kann und mittlerweile zur bevorzugten Nachweismethode für jeden Hersteller von Biologika geworden ist.

Informationen zu Bluekit-Produkten

Produktmerkmale

Schnelle Erkennung, starke Spezifität, zuverlässige Leistung, die niedrigste Nachweisgrenze kann das „fg“-Niveau erreichen.

Produktparameter

• Erfassungsbereich: 3,00×101 ~3,00×105fg/μL
• Bestimmungsgrenze:00×101fg/μL
• Nachweisgrenze:00 fg/μL
• Präzision: CV% ≤ 15 %.

Häufige Erkennungsprobleme und Vorsichtsmaßnahmen
1. Dieses Kit ist nur für In-vitro-Forschungszwecke bestimmt, nicht für die klinische Diagnose.
2. Das Kit muss innerhalb der Gültigkeitsdauer verwendet werden.
3. Es wird empfohlen, alle Komponenten im Kit in einer Umgebung mit niedrigen Temperaturen zu schmelzen und dann zu verwenden.
4. Befolgen Sie bei der Verwendung der im Kit enthaltenen Reagenzien nur strikt die Anweisungen zur Betriebsmethode, um den besten Nachweiseffekt zu gewährleisten.
5. Beachten Sie die verschiedenen Probenahmeschritte rechtzeitig, um die Spitze auszutauschen. Um Kreuzkontaminationen zu vermeiden, vermeiden Sie ein längeres Öffnen des Deckels.
6. Die endgültigen Testergebnisse können erheblich von der Wirksamkeit der Reagenzien, den Arbeitsmethoden des Bedieners und der Testumgebung beeinflusst werden.

Produktberatung

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