A necessidade de testes de DNA residual de E.coli
Em áreas como terapia celular e genética, os plasmídeos virais são amplificados e fermentados usando E. coli como hospedeiro. O plasmídeo amplificado precisa passar pelo controle de qualidade do DNA residual de E.coli antes de poder ser usado para infectar células 293 e empacotar o vírus. Portanto, a detecção de DNA residual de E. coli é crítica.
Requisitos Regulamentares e Métodos de Teste
As diretrizes atuais da OMS e da FDA dos EUA recomendam que o DNA residual em produtos acabados não seja superior a 10 ng/agente, e a FDA dos EUA também afirma que o DNA residual em células hospedeiras de produtos biológicos não deve ser superior a 100 pg/agente. Os Princípios Gerais da Farmacopeia Europeia estipulam que o limite de ADN residual em produtos biológicos não deve ser superior a 10 ng/dose, mas o limite de ADN residual para algumas vacinas específicas é mais rigoroso, por exemplo, o ADN residual na vacina inactivada contra a hepatite A não deve ser superior a 100 pg/dose, e que na vacina contra a hepatite B não deve ser superior a 10 pg/dose. A edição de 2020 da Farmacopeia Chinesa, Parte III, estipula que o resíduo de ADN em preparações biológicas produzidas numa matriz celular não deve exceder 100 pg/dose, e o resíduo de ADN em vacinas produzidas numa matriz bacteriana ou fúngica não deve exceder 10 ng/dose.
Além disso, para os métodos de determinação de resíduos de ADN exógeno, as farmacopeias nacionais também fornecem recomendações de orientação. A edição 2017 da Farmacopeia dos EUA da USP40 - NF35 General Provision 1130 descreve três métodos para a determinação de resíduos de DNA exógenos, que são hibridização de sonda de DNA, método de limite e método de PCR quantitativo em tempo real. A Farmacopeia Europeia propõe PCR quantitativo em tempo real e método imunoenzimático, dois métodos analíticos sensíveis para quantificar o DNA residual da célula hospedeira. A versão 2020 da Farmacopeia Chinesa das três regras gerais 3407 também estipula que os métodos de detecção de resíduos de DNA da célula hospedeira são hibridização de sonda de DNA, coloração fluorescente e PCR quantitativo.
Entre eles, o método qPCR tem sensibilidade, especificidade de sequência e precisão extremamente altas, o que pode fornecer um meio confiável de detecção para a indústria biofarmacêutica em pesquisa de processos e controle de qualidade de produtos acabados, e agora se tornou o método de detecção preferido para cada fabricante de produtos biológicos.
Informações sobre produtos Bluekit
Recursos do produto
Detecção rápida, forte especificidade, desempenho confiável, o limite de detecção mais baixo pode atingir o nível “fg”.
Parâmetros do produto
- Faixa de detecção: 3,00×101 ~3,00×105fg/μL
- Limite de quantificação:00×101fg/μL
- Limite de detecção:00 fg/μL
- Precisão: CV% ≤ 15%.
Problemas e precauções comuns de detecção
1. Este kit é apenas para uso em pesquisas in vitro e não para diagnóstico clínico.
2. O kit deve ser utilizado dentro do prazo de validade.
3. Recomenda-se que todos os componentes do kit sejam derretidos em ambiente de baixa temperatura e depois utilizados.
4. Cumpra rigorosamente apenas as instruções do método de operação, todo o uso do kit de suporte de reagentes para garantir o melhor efeito de detecção.
5. Preste atenção às diferentes etapas de amostragem em tempo hábil para substituir a ponta, para evitar contaminação cruzada, evite abrir a tampa por muito tempo.
6. Os resultados finais do teste podem ser significativamente afetados pela eficácia dos reagentes, pelos métodos operacionais do operador e pelo ambiente de teste.
Consulta de Produto
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Horário da postagem: 2024-01-11 10:31:30
