잔여 K562 피더 세포 검출 키트
잔여 K562 피더 세포 검출 키트
✓초고감도 검출: 0.05%(10개 복사본/μL) 수준의 잔류 K562 영양 세포를 검출하여 세포 치료 안전성에 대한 FDA 지침을 준수합니다.
✓RT-PCR-기반 특이성: 규제 요구 사항에 따라 특이성, 정확성 및 정밀도가 검증된 RT-PCR을 통해 K562-특정 서열을 표적으로 하는 최적화된 프라이머/프로브를 활용합니다.
✓넓은 동적 범위: 10–1×10의 선형 감지 범위6복사본/μL, 희석 없이 고농도 샘플까지 미량 잔류물을 포함합니다.
이 키트는 잔류 K562 영양 세포를 검출하기 위해 특별히 설계된 표적 부위가 있는 RT-PCR을 활용합니다. 유전자 편집을 통해 조작된 K562 세포는 우수한 증식 특성으로 인해 널리 연구되고 활용됩니다. 연구에 따르면 유전자 편집된 K562 세포를 지지세포로 사용하면 NK 세포 증식 효율을 수만 배에서 수만 배까지 높일 수 있는 것으로 나타났습니다. K562 세포는 방사선 조사를 받아 NK 세포에 의해 쉽게 제거되지만, 환자의 안전을 위해서는 최종 제품에서 잔류 영양세포(feeder cell)를 최소화하는 것이 필수적입니다.
일반 작업 흐름
1. 준비
키트 구성 요소: 모든 시약(프라이머/프로브 제외)을 4°C에서 해동한 다음 와류시키고 짧게 원심분리합니다(6000rpm, 5초).
안전 : PPE(실험복, 장갑, 마스크)를 착용하고 오염을 방지하기 위해 깨끗한 장소에서 작업하십시오.
장비 설정:
qPCR 기기(예: ABI 7500, Bio-Rad CFX96)가 FAM/VIC 채널로 보정되었는지 확인하세요.
RNA 추출 및 역전사 시약을 준비합니다.
2. 샘플 사전-처리
RNA 추출:
1×10에서 총 RNA 분리6-5×106상업용 RNA 추출 키트를 사용하여 세포.
역전사:
gDNA 제거 및 RT 시약(키트에 포함되지 않음)을 사용하여 RNA를 cDNA로 변환합니다.
3. PCR 반응 믹스 준비
표준 곡선 희석:
K562 정량 표준물질(1×10)을 연속적으로 희석합니다.8복사본/μL)을 DNA 희석제로 사용하여 6개 포인트(10–1×106복사본/μL).
예:
마스터 믹스 어셈블리(반응당):
*기기에 ROX가 필요하지 않은 경우 ROX를 생략하세요(예: Roche LightCycler).
플레이트 설정:
웰당 15μL 마스터 믹스 + 5μL 샘플/표준을 로드합니다(표준/샘플의 경우 3배). NTC(DNA 희석제)를 포함합니다.
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