Kit de detección de celdas de alimentación residuales K562
Kit de detección de celdas de alimentación residuales K562
✓Detección ultrasensible: detecta células alimentadoras K562 residuales en niveles tan bajos como 0,05 % (10 copias/μL), lo que garantiza el cumplimiento de las directrices de la FDA para la seguridad de la terapia celular.
✓Especificidad basada en RT-PCR: utiliza cebadores/sondas optimizados dirigidos a secuencias específicas de K562 mediante RT-PCR, validados para especificidad, exactitud y precisión según los requisitos reglamentarios.
✓Amplio rango dinámico: rango de detección lineal de 10–1×106copias/μL, cubriendo trazas residuales hasta muestras de alta concentración sin dilución.
Este kit utiliza RT-PCR con sitios objetivo diseñados específicamente para la detección de células alimentadoras K562 residuales. Las células K562 diseñadas mediante edición genética se estudian y utilizan ampliamente por sus excelentes propiedades proliferativas. La investigación ha demostrado que el uso de células K562 editadas genéticamente como células alimentadoras puede mejorar la eficiencia de expansión de las células NK entre decenas y decenas de miles de veces. Aunque las células NK irradian y eliminan fácilmente las células K562, es esencial garantizar que las células alimentadoras residuales se minimicen en el producto final para garantizar la seguridad del paciente.
Flujo de trabajo general
1.Preparación
Componentes del kit: descongele todos los reactivos (excepto los cebadores/sondas) a 4 °C, luego agite y centrifugue brevemente (6000 rpm, 5 segundos).
Seguridad: Use EPI (bata de laboratorio, guantes, mascarilla) y trabaje en un área limpia para evitar la contaminación.
Configuración del equipo:
Asegúrese de que el instrumento qPCR (por ejemplo, ABI 7500, Bio-Rad CFX96) esté calibrado con canales FAM/VIC.
Preparar reactivos de extracción de ARN y transcripción inversa.
2. Muestra de tratamiento previo
Extracción de ARN:
Aislar ARN total de 1×106–5×106células utilizando un kit de extracción de ARN comercial.
Transcripción inversa:
Convierta ARN en ADNc mediante eliminación de ADNg y reactivos RT (no incluidos en el kit).
3. Preparación de la mezcla de reacción de PCR
Dilución de curva estándar:
Diluir en serie el Estándar Cuantitativo K562 (1×108copias/μL) con diluyente de ADN para generar 6 puntos (10–1×106copias/μL).
Ejemplo:
Montaje de mezcla maestra (por reacción):
*Omita ROX si el instrumento no lo requiere (p. ej., Roche LightCycler).
Configuración de la placa:
Cargue 15 μl de mezcla maestra + 5 μl de muestra/estándar por pocillo (por triplicado para estándares/muestras). Incluye NTC (diluyente de ADN).
Información de envío
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