Kit de detecção de célula alimentadora residual K562
Kit de detecção de célula alimentadora residual K562
✓Detecção Ultra-Sensível: Detecta células alimentadoras K562 residuais em níveis tão baixos quanto 0,05% (10 cópias/μL), garantindo a conformidade com as diretrizes da FDA para segurança da terapia celular.
✓Especificidade baseada em RT-PCR-: utiliza primers/sondas otimizados direcionados a sequências específicas de K562 via RT-PCR, validados quanto à especificidade, exatidão e precisão de acordo com os requisitos regulatórios.
✓Ampla faixa dinâmica: faixa de detecção linear de 10–1×106cópias/μL, abrangendo vestígios residuais até amostras de alta concentração sem diluição.
Este kit utiliza RT-PCR com locais-alvo especificamente projetados para a detecção de células alimentadoras K562 residuais. Células K562 projetadas por meio de edição genética são amplamente estudadas e utilizadas por suas excelentes propriedades proliferativas. A pesquisa mostrou que o uso de células K562 editadas por genes como células alimentadoras pode aumentar a eficiência da expansão das células NK em dezenas a dezenas de milhares de vezes. Embora as células K562 sejam irradiadas e facilmente eliminadas pelas células NK, é essencial garantir que as células alimentadoras residuais sejam minimizadas no produto final para garantir a segurança do paciente.
Fluxo de trabalho geral
1.Preparação
Componentes do kit: Descongele todos os reagentes (exceto primers/sondas) a 4°C, depois agite no vórtex e centrifugue brevemente (6.000 rpm, 5 segundos).
Segurança: Use EPI (jaleco, luvas, máscara) e trabalhe em área limpa para evitar contaminação.
Configuração do equipamento:
Certifique-se de que o instrumento qPCR (por exemplo, ABI 7500, Bio-Rad CFX96) esteja calibrado com canais FAM/VIC.
Prepare extração de RNA e reagentes de transcrição reversa.
2. Pré-tratamento de amostra
Extração de RNA:
Isole o RNA total de 1×106–5×106células usando um kit comercial de extração de RNA.
Transcrição reversa:
Converta RNA em cDNA usando remoção de gDNA e reagentes RT (não incluídos no kit).
3. Preparação da mistura de reação PCR
Diluição da Curva Padrão:
Diluir em série o Padrão Quantitativo K562 (1×108cópias/μL) com Diluente de DNA para gerar 6 pontos (10–1×106cópias/μL).
Exemplo:
Montagem Master Mix (por reação):
*Omita ROX se o instrumento não exigir (por exemplo, Roche LightCycler).
Configuração da placa:
Carregue 15 μL Master Mix + 5 μL de amostra/padrão por poço (triplicados para padrões/amostras). Inclui NTC (diluente de DNA).
Informações de envio
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