Kit di rilevamento cella alimentatore residuo K562
Kit di rilevamento cella alimentatore residuo K562
✓Rilevamento ultra-sensibile: rileva le cellule feeder K562 residue a livelli pari allo 0,05% (10 copie/μL), garantendo la conformità con le linee guida FDA per la sicurezza della terapia cellulare.
✓Specificità basata su RT-PCR-: utilizza primer/sonde ottimizzati target K562-sequenze specifiche tramite RT-PCR, convalidate per specificità, accuratezza e precisione in base ai requisiti normativi.
✓Ampia gamma dinamica: gamma di rilevamento lineare di 10–1×106copie/μL, coprendo tracce residue fino a campioni ad alta concentrazione senza diluizione.
Questo kit utilizza RT-PCR con siti target appositamente progettati per il rilevamento delle cellule feeder K562 residue. Le cellule K562 ingegnerizzate tramite editing genetico sono ampiamente studiate e utilizzate per le loro eccellenti proprietà proliferative. La ricerca ha dimostrato che l'utilizzo di cellule K562 geneticamente modificate come cellule feeder può migliorare l'efficienza di espansione delle cellule NK da decine a decine di migliaia di volte. Sebbene le cellule K562 siano irradiate e facilmente eliminate dalle cellule NK, è essenziale garantire che le cellule feeder residue siano ridotte al minimo nel prodotto finale per garantire la sicurezza del paziente.
Flusso di lavoro generale
1.Preparazione
Componenti del kit: scongelare tutti i reagenti (eccetto primer/sonde) a 4°C, quindi agitare nel vortex e centrifugare brevemente (6.000 giri/min, 5 secondi).
Sicurezza: indossare DPI (camice da laboratorio, guanti, maschera) e lavorare in un'area pulita per evitare contaminazioni.
Configurazione dell'attrezzatura:
Assicurarsi che lo strumento qPCR (ad esempio ABI 7500, Bio-Rad CFX96) sia calibrato con i canali FAM/VIC.
Preparare i reagenti per l'estrazione dell'RNA e la trascrizione inversa.
2. Pre-trattamento campione
Estrazione dell'RNA:
Isolare l'RNA totale da 1×106–5×106cellule utilizzando un kit commerciale di estrazione dell'RNA.
Trascrizione inversa:
Convertire l'RNA in cDNA utilizzando la rimozione del gDNA e i reagenti RT (non inclusi nel kit).
3. Preparazione della miscela di reazione PCR
Diluizione della curva standard:
Diluire in serie lo standard quantitativo K562 (1×108copie/μL) con DNA Diluent per generare 6 punti (10–1×106copie/μL).
Esempio:
Assemblaggio della Master Mix (per reazione):
*Omettere ROX se lo strumento non lo richiede (ad esempio, Roche LightCycler).
Configurazione della piastra:
Caricare 15μL di Master Mix + 5μL di campione/standard per pozzetto (triplicato per standard/campioni). Includere NTC (diluente del DNA).
Informazioni sulla spedizione
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Dazi doganali e politica fiscale
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