Kit de détection de cellules nourricières résiduelles K562
Kit de détection de cellules nourricières résiduelles K562
✓Détection ultra-sensible : Détecte les cellules nourricières K562 résiduelles à des niveaux aussi bas que 0,05 % (10 copies/μL), garantissant ainsi la conformité aux directives de la FDA en matière de sécurité de la thérapie cellulaire.
✓Spécificité basée sur RT-PCR- : utilise des amorces/sondes optimisées ciblant les séquences spécifiques du K562- via RT-PCR, validées pour la spécificité, l'exactitude et la précision conformément aux exigences réglementaires.
✓Large plage dynamique : plage de détection linéaire de 10 à 1 × 106copies/μL, couvrant les traces résiduelles jusqu'aux échantillons à haute concentration sans dilution.
Ce kit utilise la RT-PCR avec des sites cibles spécialement conçus pour la détection des cellules nourricières K562 résiduelles. Les cellules K562 modifiées par modification génétique sont largement étudiées et utilisées pour leurs excellentes propriétés prolifératives. La recherche a montré que l’utilisation de cellules K562 modifiées par gène comme cellules nourricières peut améliorer l’efficacité de l’expansion des cellules NK de dizaines à dizaines de milliers de fois. Bien que les cellules K562 soient irradiées et facilement éliminées par les cellules NK, il est essentiel de garantir que les cellules nourricières résiduelles soient minimisées dans le produit final afin de garantir la sécurité des patients.
Flux de travail général
1.Préparation
Composants du kit : Décongeler tous les réactifs (sauf les amorces/sondes) à 4 °C, puis vortexer et centrifuger brièvement (6 000 tr/min, 5 s).
Sécurité : Portez des EPI (sarrau, gants, masque) et travaillez dans un endroit propre pour éviter toute contamination.
Configuration de l'équipement :
Assurez-vous que l’instrument qPCR (par exemple, ABI 7500, Bio-Rad CFX96) est calibré avec les canaux FAM/VIC.
Préparer les réactifs d’extraction d’ARN et de transcription inverse.
2. Exemple de pré-traitement
Extraction d'ARN :
Isoler l'ARN total de 1 × 106–5×106cellules à l’aide d’un kit d’extraction d’ARN commercial.
Transcription inversée :
Convertissez l’ARN en ADNc à l’aide des réactifs d’élimination de l’ADNg et RT (non inclus dans le kit).
3. Préparation du mélange réactionnel PCR
Dilution de la courbe standard :
Diluer en série l'étalon quantitatif K562 (1 × 108copies/μL) avec du diluant ADN pour générer 6 points (10–1×106copies/μL).
Exemple :
Assemblage Master Mix (par réaction) :
*Omettez ROX si l'instrument ne l'exige pas (par exemple, Roche LightCycler).
Configuration de la plaque :
Chargez 15 μL de Master Mix + 5 μL d’échantillon/standard par puits (triples pour les standards/échantillons). Inclure NTC (diluant ADN).
Informations d'expédition
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