残留 K562 フィーダー細胞検出キット

残留 K562 フィーダー細胞検出キット

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✓超高感度検出: 残留 K562 フィーダー細胞を 0.05% (10 コピー/μL) という低いレベルで検出し、細胞療法の安全性に関する FDA ガイドラインへの準拠を保証します。

✓RT-PCR- ベースの特異性: RT-PCR を介して K562- 特異的配列をターゲットとする最適化されたプライマー/プローブを利用し、規制要件に従って特異性、精度、精度が検証されています。

✓広いダイナミックレンジ: 10～1×10の線形検出範囲⁶コピー/μL、微量残留物から高濃度サンプルまで希釈せずにカバーします。

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概要

プロトコル

仕様

配送と返品

ビデオ録画

このキットは、残留 K562 フィーダー細胞の検出のために特別に設計された標的部位を使用した RT-PCR を利用します。遺伝子編集によって操作された K562 細胞は、その優れた増殖特性により広く研究され、利用されています。研究により、遺伝子編集されたK562細胞をフィーダー細胞として使用すると、NK細胞の増殖効率を数十から数万倍高めることができることが示されています。 K562 細胞は放射線照射を受けており、NK 細胞によって容易に除去されますが、患者の安全を確保するには、最終製品でのフィーダー細胞の残留を確実に最小限に抑えることが不可欠です。

一般的なワークフロー

1.準備

キットの成分: すべての試薬 (プライマー/プローブを除く) を 4°C で解凍し、ボルテックスして短時間遠心分離します (6000 rpm、5 秒)。

安全性: 汚染を避けるために、PPE (白衣、手袋、マスク) を着用し、清潔な場所で作業してください。

機器のセットアップ:

qPCR 機器 (ABI 7500、Bio-Rad CFX96 など) が FAM/VIC チャネルで校正されていることを確認します。

RNA 抽出試薬と逆転写試薬を準備します。

2. サンプルの前処理-処理

RNA抽出:

1×10からトータルRNAを分離⁶–5×10⁶市販の RNA 抽出キットを使用して細胞を抽出します。

逆転写:

gDNA 除去および RT 試薬 (キットには含まれていません) を使用して、RNA を cDNA に変換します。

3. PCR 反応ミックスの調製

標準曲線の希釈:

K562 Quantitative Standard を連続希釈します (1×10⁸DNA 希釈液を使用してコピー/μL) を生成し、6 ポイント (10–1×10) を生成します⁶コピー数/μL)。

例:

マスターミックスアセンブリ (反応ごと):

*機器が ROX を必要としない場合は、ROX を省略してください (例: Roche LightCycle)。

プレートのセットアップ:

ウェルごとに 15μL マスターミックス + 5μL サンプル/標準をロードします (標準/サンプルを 3 回ずつ)。 NTC (DNA 希釈剤) を含みます。

残留 K562 フィーダー細胞検出キットの使用説明書

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