La nécessité des tests d'ADN résidus e.coli
Dans des domaines tels que la thérapie cellulaire et génique, les plasmides viraux sont amplifiés et fermentés en utilisant E. coli comme hôte. Le plasmide amplifié doit subir un contrôle de qualité ADN résiduel E. coli avant de pouvoir être utilisé pour infecter 293 cellules et emballer le virus. Par conséquent, la détection de l'ADN résiduel E.coli est critique.
Exigences réglementaires et méthodes de test
Les directives actuelles de l'OMS et de la FDA américaines recommandent que l'ADN résiduel dans les produits finis ne soit pas supérieur à 10 ng / agent, et la FDA américaine indique également que l'ADN résiduel dans les cellules hôtes de biologiques ne devrait pas être supérieur à 100 pg / agent. The General Principles of the European Pharmacopoeia stipulates that the limit of residual DNA in biological products should not be greater than 10 ng/dose, but the residual DNA limit for some particular vaccines is more stringent, e.g., the residual DNA in the inactivated vaccine against hepatitis A should not be higher than 100 pg/dose, and that in the vaccine against hepatitis B should not be higher than 10 pg / dose. L'édition 2020 de la pharmacopée chinoise, la partie III, stipule que le résidu d'ADN dans les préparations biologiques produits sur une matrice cellulaire ne devrait pas dépasser 100 pg / dose, et le résidu d'ADN dans les vaccins produits sur une matrice bactérienne ou fongique ne devrait pas dépasser 10 ng / dose.
De plus, pour les méthodes de détermination des résidus d'ADN exogènes, les pharmacopées nationales font également des recommandations d'orientation. L'édition américaine de pharmacopée 2017 de l'USP40 - NF35 Général Provision 1130 décrit trois méthodes de détermination des résidus d'ADN exogènes, qui sont une hybridation de sonde ADN, une méthode de seuil et une méthode de PCR quantitative réelle. La pharmacopée européenne propose une PCR quantitative réelle et une méthode immunoenzymatique, deux méthodes analytiques sensibles pour quantifier l'ADN résiduel des cellules hôtes. La version chinoise de la pharmacopée 2020 des trois règles générales 3407 stipule également que les méthodes de détection de résidus d'ADN des cellules hôtes sont l'hybridation des sondes ADN, la coloration par fluorescence et la PCR quantitative.
Parmi eux, la méthode QPCR a une sensibilité, une spécificité de séquence et une précision extrêmement élevées, qui peuvent fournir un moyen de détection fiable pour l'industrie biopharmaceutique dans la recherche de processus et le contrôle de la qualité des produits finis, et il est maintenant devenu la méthode de détection préférée pour chaque fabricant de biologie.
Informations sur les produits Bluekit
Caractéristiques du produit
Détection rapide, forte spécificité, performances fiables, la limite de détection la plus basse peut atteindre le niveau «FG».
Paramètres du produit
- Plage de détection: 3,00 × 101 ~ 3,00 × 105fg / μl
- Limite de quantification:00 × 101fg / μl
- Limite de détection ：00 FG / μl
- Précision: CV% ≤ 15%.
Problèmes de détection courants et précautions
1. Ce kit est pour une utilisation de recherche in vitro uniquement, pas pour le diagnostic clinique.
2. Le kit doit être utilisé dans la période de validité.
3. Tous les composants du kit sont recommandés pour être fondues dans un environnement à basse température puis utilisés.
4. Seulement strictement conforme aux instructions de la méthode de fonctionnement, toute l'utilisation du kit supportant les réactifs pour assurer le meilleur effet de détection.
5. Faites attention aux différentes étapes d'échantillonnage en temps opportun pour remplacer la pointe, pour éviter la contamination croisée, évitez d'ouvrir le couvercle pendant longtemps.
6. Les résultats finaux des tests peuvent être considérablement affectés par l'efficacité des réactifs, les méthodes de fonctionnement de l'opérateur et l'environnement de test.
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