Pichia Pastoris HCP (Wirt Cell Protein) Resterkennungskit
Pichia Pastoris HCP (Wirt Cell Protein) Resterkennungskit
✓ Pichia pastoris - spezifisch - Kein Kreuz - Reaktivität mit CHO/HCPS
✓ Bereit - zu - verwenden - Keine Probenvorbehandlung erforderlich
Beabsichtigte Verwendung
Dieses Kit ist für den quantitativen Nachweis von Wirtszellproteinresten (HCP) in biopharmazeutischen Produkten ausgelegt, die abgeleitet werden Pichia Pastoris Stämme (z. B. GS115, x33), unter Verwendung eines ein - Schritt -Enzyms - verknüpften Immunosorbent -Assay (ELISA). Nur für Forschungsgebrauch. Nicht für diagnostische Zwecke.
Erkennungsprinzip
Das Kit verwendet a Sandwich Elisa Verfahren:
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Beschichtung: Mikroplattenbrunnen werden mit Schaf -polyklonalen Antikörpern gegen Schafe überzogen Pichia Pastoris HCPs.
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Inkubation: Proben/Kalibratoren werden hinzugefügt, gefolgt von HRP - konjugierte Schafe polyklonaler Anti -Pichia Pastoris HCP -Antikörper.
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Erkennung: Nach dem Waschen wird das TMB -Substrat für die Farbentwicklung hinzugefügt. Die Reaktion wird gestoppt und die Absorption wird bei gemessen 450 nm.
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Quantifizierung: Die HCP -Konzentration wird aus der Standardkurve (Absorption ∝ HCP -Konzentration) berechnet.
Schlüsselmerkmale
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Keine Probenvorbehandlung erforderlich (Nur Verdünnungsvalidierung erforderlich).
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Optimiertes Protokoll: Minimale Schritte, schnelle Ergebnisse (<2 Stunden).
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Hohe Spezifität und Zuverlässigkeit: Optimiert für Pichia Pastoris HCPs.
Technische Notizen
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Kompatible Proben: Zellkulturüberstände, gereinigte Biologika.
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Dynamikbereich: 1–100 ng/ml (typisch).
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Regulatorische Ausrichtung: Geeignet für Prozessentwicklung und GMP -Los -Release -Tests.
Nutzungsprozess1. Gleichgewicht
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Bringen Sie alle Komponenten auf Raumtemperatur (≥ 20 min).
2. Addition der Probe/Antikörper-
Fügen Sie Proben/Kalibratoren hinzu: 100 µl/Brunnen
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1x Enzym - konjugiertes Antikörper hinzufügen: 100 ul/Brunnen (siehe Legende ①)
1. Inkubation-
In RT inkubieren, von Licht geschützt, 600 U / min für 3 Stunden (siehe Legende ③)
4. Waschen-
Waschen 1: 300 µl/Well 1x Puffer (vertikale Plattenposition)
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Wäsche 2 - 5: 300 & mgr; l/Well 1x Puffer, 5 Wäsche insgesamt
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Pat trocken: Nach der letzten Wäsche invertieren Sie die Platte auf saugfähigem Papier
5. TMB -Substratentwicklung-
TMB hinzufügen: 100 µl/Brunnen
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Entwickeln: 10 min bei RT (vor Licht geschützt)
6. Stop Reaction & Readout-
Stop -Lösung hinzufügen: 50 µl/Brunnen
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Stand: 5 min
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Lesen: OD bei 450 nm (Referenz 620 nm)
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| Komponente | Produktnummer | Spezifikation | Beschreibung |
|---|---|---|---|
| Vor - beschichtete Anti -- Pichia HCP -Mikroplatte | PNA015 | 8 Brunnen × 12 Streifen | Pre - mit Schafe polyklonaler Anti - beschichtet -Pichia Pastoris HCP -Antikörper. In Folienbeuteln mit Trockenmittel versiegelt. Speichern Sie vor Licht geschützt. |
| Pichia HCP -Kalibrator | PNB015 | 2 Fläschchen | Lyophilisiertes Pulver. Rekonstituieren Sie mit 500 μl -Kalibratorverdünnung (PNC002). Für die Auflösung 5–10 Minuten zulassen (Lösung sollte klar sein). Speichern Sie vor Licht geschützt. |
| Calibrator Diluent | PNC002 | 1,5 ml × 1 Rohr | Klare Lösung zur Rekonstitutierung von Pichia HCP -Kalibrator. |
| Assay -Verdünnungsmittel | Pne006 | 25 ml × 2 Flaschen | Zum Verdünnen von Kalibratoren, Proben und Enzym - konjugiertem Antikörper. Validieren Sie einen optimalen Verdünnungfaktor für neue Proben. |
| Waschpuffer (10 × Konzentrat) | PNF001 | 25 ml × 2 Flaschen | Zum Waschen von Tellern. Kristalle können sich bei niedrigen Temperaturen bilden - vor der Verwendung bei 37 ° C. 10 × mit Ultratwasser verdünnen. |
| HRP - konjugiertes Anti - Pichia HCP -Antikörper (100 ×) | PNN009 | 120 μl × 1 Rohr | Schafe polyklonaler Antikörper. 100 × mit Assay -Verdünnungsmittel vor der Verwendung verdünnen. Speichern Sie vor Licht geschützt. |
| TMB -Substrat | PND004 | 12 ml × 1 Flasche | Äquilibrieren Sie die Raumtemperatur (≥ 20 min) vor der Verwendung. Speichern Sie vor Licht geschützt. |
| Lösung stoppen | PNI002 | 6 ml × 1 Flasche | Enthält HCl. Tragen Sie eine Schutzbrille und vermeiden Sie den Hautkontakt. |
| Versiegelungsfilme | PNK001 | 3 Blätter | Zur Abdeckung von Mikroplattenstreifen, um Kontaminationen und Verdunstung zu verhindern. |
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