Pichia pastoris hcp (proteína de célula hospedeira) kit de detecção residual
Pichia pastoris hcp (proteína de célula hospedeira) kit de detecção residual
✓ Pichia pastoris - específico - Sem reatividade cruzada com CHO/HCPS
✓ Pronto - para - Use - Nenhuma amostra de pré -tratamento necessária
Uso pretendido
Este kit foi projetado para a detecção quantitativa de resíduos de proteína celular (HCP) em produtos biofarmacêuticos derivados de Pichia pastoris cepas (por exemplo, GS115, x33), usando um ensaio imunossorvente de um - etapa - Somente para uso da pesquisa. Não para fins de diagnóstico.
Princípio da detecção
O kit emprega um Sandwich Elisa método:
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Revestimento: Os poços de microplacas são pré -revestidos com anticorpos policlonais de ovinos contra Pichia pastoris HCPS.
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Incubação: Amostras/calibradores são adicionados, seguidos por HRP - Anti -policlonal de ovelha conjugado -Pichia pastoris Anticorpos HCP.
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Detecção: Após a lavagem, o substrato TMB é adicionado para o desenvolvimento de cores. A reação é interrompida e a absorvância é medida em 450 nm.
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Quantificação: A concentração de HCP é calculada a partir da curva padrão (concentração de absorvância ∝ HCP).
Principais recursos
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Nenhuma amostra de pré -tratamento necessária (apenas a validação de diluição necessária).
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Protocolo simplificado: Etapas mínimas, resultados rápidos (<2 horas).
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Alta especificidade e confiabilidade: Otimizado para Pichia pastoris HCPS.
Notas técnicas
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Amostras compatíveis: Sobrenadantes da cultura de células, biológicos purificados.
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Faixa dinâmica: 1–100 ng/ml (típico).
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Alinhamento regulatório: Adequado para o desenvolvimento de processos e testes de liberação de lote GMP.
Processo de uso1. Equilibração
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Traga todos os componentes para a temperatura ambiente (≥20 min).
2. Adição de amostra/anticorpo-
Adicione amostras/calibradores: 100 µl/poço
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Adicionar 1x enzima - anticorpo conjugado: 100 µl/poço (ver legenda ①)
3. Incubação-
Incubar na RT, protegido da luz, 600 rpm por 3 h (ver legenda ③)
4. Lavagem-
Lavar 1: 300 µl/poço 1x tampão (posição da placa vertical)
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Lavagem 2 - 5: 300 µl/poço 1x tampão, 5 lavagens totais
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Pat seco: Após a lavagem final, inverta a placa em papel absorvente
5. Desenvolvimento de substrato TMB-
Adicione TMB: 100 µl/poço
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Desenvolver: 10 min na RT (protegido da luz)
6. Pare de reação e leitura-
Adicione a solução de parada: 50 µl/poço
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Ficar: 5 min
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Ler: OD a 450 nm (referência 620 nm)
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Componente | Número do produto | Especificação | Descrição |
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Microplaca anti - Pichia HCP pré -revestida | PNA015 | 8 poços × 12 tiras | Pré -- revestido com ovelhas policlonais anti -Pichia pastoris Anticorpos HCP. Selado em bolsas de papel alumínio com dessecante. Armazene protegido da luz. |
Calibrador Pichia HCP | PNB015 | 2 frascos | Pó liofilizado. Reconstitua com diluente calibrador de 500 μL (PNC002). Permitir 5 a 10 minutos para dissolução (a solução deve ser clara). Armazene protegido da luz. |
Diluente do calibrador | PNC002 | 1,5 ml × 1 tubo | Solução clara para reconstituir o calibrador Pichia HCP. |
Diluente de ensaio | PNE006 | 25 ml × 2 garrafas | Para diluir calibradores, amostras e anticorpo conjugado enzimático - Valide o fator de diluição ideal para novas amostras. |
Tampão de lavagem (concentrado 10 ×) | PNF001 | 25 ml × 2 garrafas | Para lavagem de placas. Os cristais podem se formar em baixas temperaturas - dissolver a 37 ° C antes do uso. Dilua 10 × com água ultrapura. |
HRP - anticorpo anti - Pichia HCP (100 ×) conjugado (100 ×) | PNN009 | 120 μl × 1 tubo | Anticorpo policlonal de ovelha. Diluta 100 × com diluente de ensaio antes do uso. Armazene protegido da luz. |
Substrato TMB | PND004 | 12 ml × 1 garrafa | Equilibre à temperatura ambiente (≥20 min) antes do uso. Armazene protegido da luz. |
Solução de parada | PNI002 | 6 ml × 1 garrafa | Contém hcl. Use óculos de óculos e evite o contato da pele. |
Filmes de vedação | PNK001 | 3 folhas | Para cobrir tiras de microplacas para evitar contaminação e evaporação. |
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