Kit de détection résiduelle de Pichia pastoris HCP (protéine de cellules hôtes)
Kit de détection résiduelle de Pichia pastoris HCP (protéine de cellules hôtes)
✓ Pichia pastoris - Spécifique - pas de croix - réactivité avec Cho / hCPS
✓ Prêt - Utiliser - Aucun prétraitement d'échantillon requis
Utilisation prévue
Ce kit est conçu pour la détection quantitative des résidus de protéines de cellules hôtes (HCP) dans les produits biopharmaceutiques dérivés de Pichia pastoris Souches (par exemple, GS115, x33), en utilisant un test d'immunosorbant enzyme one - étape - lié (ELISA). Pour la recherche uniquement. Pas à des fins diagnostiques.
Principe de détection
Le kit utilise un Sandwich Elisa méthode:
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Revêtement: Les puits de microplaques sont enduits d'anticorps polyclonaux de mouton contre Pichia pastoris HCPS.
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Incubation: Des échantillons / calibrateurs sont ajoutés, suivis par HRP - Moufle conjugué Polyclonal Anti -Pichia pastoris Anticorps HCP.
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Détection: Après le lavage, le substrat TMB est ajouté pour le développement des couleurs. La réaction est arrêtée et l'absorbance est mesurée à 450 nm.
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Quantification: La concentration de HCP est calculée à partir de la courbe standard (absorbance ∝ concentration HCP).
Caractéristiques clés
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Aucun prétraitement d'échantillon requis (seule validation de dilution nécessaire).
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Protocole rationalisé: Étapes minimales, résultats rapides (<2 heures).
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Spécificité et fiabilité élevée: Optimisé pour Pichia pastoris HCPS.
Notes techniques
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Échantillons compatibles: Surnageants de culture cellulaire, biologiques purifiés.
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Plage dynamique: 1–100 ng / ml (typique).
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Alignement réglementaire: Convient pour le développement de processus et les tests de libération de lots GMP.
Processus d'utilisation1. Équilibre
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Amenez tous les composants à température ambiante (≥20 min).
2. Ajout d'échantillon / anticorps-
Ajouter des échantillons / calibrateurs: 100 µl / puits
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Ajouter 1x enzyme - anticorps conjugué: 100 µl / puits (voir légende ①)
3. Incubation-
Incuber à RT, protégé de la lumière, 600 tr / min pendant 3 h (voir légende ③)
4. Lavage-
Laver 1: 300 µl / puits 1x tampon (position de plaque verticale)
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Laver 2 - 5: 300 µl / puits 1x tampon, 5 lavages totaux
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Taper sécher: Après le lavage final, inverser la plaque sur du papier absorbant
5. Développement du substrat TMB-
Ajouter TMB: 100 µl / puits
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Développer: 10 min à RT (protégé de la lumière)
6. Arrêtez la réaction et lecture-
Ajouter une solution d'arrêt: 50 µl / puits
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Rester: 5 min
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Lire: OD à 450 nm (référence 620 nm)
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| Composant | N ° de produit | Spécification | Description |
|---|---|---|---|
| Pré - Microplaque HCP anti - Pichia HCP | PNA015 | 8 puits × 12 bandes | Pré - enduit de moutons Polyclonal Anti -Pichia pastoris Anticorps HCP. Scellé dans des sachets en papier d'aluminium avec dessiccants. Magasin protégé de la lumière. |
| Calibrateur de Pichia HCP | PNB015 | 2 flacons | Poudre lyophilisée. Reconstituer avec 500 μL de diluant du calibrateur (PNC002). Autorisez 5 à 10 min pour la dissolution (la solution doit être claire). Magasin protégé de la lumière. |
| Calibrateur diluant | PNC002 | 1,5 ml × 1 tube | Solution claire pour reconstituer le calibrateur PIHIA HCP. |
| Dosage diluant | PNE006 | Bouteilles de 25 ml × 2 | Pour diluer les calibrateurs, les échantillons et l'anticorps conjugué enzymatiques. Valider le facteur de dilution optimale pour de nouveaux échantillons. |
| Tampon de lavage (10 × concentré) | PNF001 | Bouteilles de 25 ml × 2 | Pour le lavage des plaques. Les cristaux peuvent se former à des températures basses - à tasse à 37 ° C avant utilisation. Diluer 10 × avec de l'eau ultrapure. |
| HRP - anticorps conjugué anti - Pichia HCP (100 ×) | PNN009 | 120 μl × 1 tube | Anticorps polyclonal de mouton. Diluer 100 × avec le test diluant avant utilisation. Magasin protégé de la lumière. |
| Substrat TMB | PND004 | 12 ml × 1 bouteille | Équilibrer à température ambiante (≥20 min) avant utilisation. Magasin protégé de la lumière. |
| Arrêter la solution | PNI002 | 6 ml × 1 bouteille | Contient HCL. Portez des lunettes et évitez le contact de la peau. |
| Films de scellement | PNK001 | 3 feuilles | Pour couvrir les bandes de microplaques pour éviter la contamination et l'évaporation. |
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