Areolating DNA lati E. Coli jẹ ilana ipilẹ ni isedale Molucular. Nkan yii yoo rin ọ nipasẹ gbogbo ilana, pese awọn igbesẹ ti alaye ati awọn alaye ti o loye mejeeji ati awọn apakan ti o wulo. Boya o jẹ oniwadi ti igba tabi tuntun tuntun si laabu, itọsọna yii yoo jẹ orisun ti o niyelori.
Igbaradi ti idaduro sẹẹli
● ikojọpọ awọn sẹẹli coli
Igbesẹ akọkọ ni areolating DNA lati E. Coli pẹlu ikojọpọ awọn sẹẹli kokoro. Eyi nigbagbogbo nilo dida E. coli ni alabọde omi bibajẹ ti o dara titi ti o fi de alakoso idagbasoke logarithmic. Akoko jẹ pataki nitori awọn sẹẹli ni ipo yii jẹ seable pupọ julọ ati rọrun lati tan, eyiti yoo fa abajade ni eso DNA ti o ga julọ.
● Dapin awọn sẹẹli ninu ifipamọ ti o yẹ
Awọn sẹẹli ti a gba lẹhinna tun bẹrẹ ni ifipamọ to dara. Yiyan ti o wọpọ jẹ Tris - Edta (Te) ajesara, eyiti o ṣe iranlọwọ lati ṣetọju iduroṣinṣin ti DNA lakoko ilana isediwon. Buffer ṣiṣẹ awọn idi pupọ: o ni iduroṣinṣin ph, chelated awọn opin awọn ẹda ti o le ṣe bibẹẹkọ bajẹ DNA, ati pese ipo ipo to dara fun awọn ododo atẹle fun awọn aati atẹle.
CentRifugation si awọn sẹẹli Pellet
● Awọn paramifus fun centrafugation (iyara ati akoko)
Lẹhin ti o ba tun awọn sẹẹli naa, idaduro ti ni ipo si centrifugation lati pellet awọn sẹẹli naa. Iyara centrifugation ati akoko jẹ awọn ayetan pataki. Ni igbagbogbo, a ṣe ọgọọgọrun ni ayika 4,000 - 6,000 g fun 10 - iṣẹju iṣẹju ni 4 ° C. Eyi ṣe idaniloju pe awọn sẹẹli dagba pellet ti o muna ni isalẹ ti tube centrice.
● Pataki ti pelleting ti o dara
Pelleting ti o dara jẹ pataki lati ya awọn sẹẹli kuro ni alabọde idagbasoke ati awọn paati miiran ti o muna. Kan daradara - Peselet ṣe atilẹyin awọn igbesẹ ti o tẹle ni irọrun ati lilo daradara, aridaju iyọkuro ti awọn sẹẹli ati, o jẹ eso DENA.
Yiyọ ti supernatant
● awọn imuposi fun yiyọkuro supernatant
Ni kete ti awọn sẹẹli naa wa ni peelted, supernatotan (omi ti o wa loke pellet) gbọdọ wa ni farabalẹ laisi wahala ti pellet sẹẹli naa. Eyi ni igbagbogbo ṣe lilo micropopette. O ṣe pataki lati ṣe igbesẹ yii si ẹkọ lati yago fun pipadanu eyikeyi awọn sẹẹli.
● Ṣiṣe idaniloju ipadanu ti o kere ju ti pellet sẹẹli
Aridaju ipadanu ti o kere ju ti Pellot sẹẹli pẹlu iṣọra ṣọra ati, ti o ba jẹ dandan, awọn iyipo pupọ ti centrafugation ati yiyọkuro agbara. Ibi-afẹde ni lati tọju bi ọpọlọpọ awọn sẹẹli bi o ti ṣee ṣe ninu pellet fun imularada DNA ti o pọju.
Afikun ti nuclei lunce
Awọn ohun elo ti nuclei Loose
Awọn ojutu arin loclei jẹ igbagbogbo ni ohun-ini rẹ (bi SDS), a fifin (bii tris - HCL), ati aṣoju ccl), ati aṣoju ccl), ati aṣoju clating (bi Edta). Awọn ikunsinu di abuku itanna sẹẹli ati apoowe iparun, tulẹ awọn akoonu sẹẹli, pẹlu DNA, sinu ojutu.
● ipa ninu fifọ awọn ogiri sẹẹli
Awọn ohun elo Nuclei Lonsis kii ṣe awọn iwe iranti sẹẹli nikan ṣugbọn awọn eegun sẹẹli nikan, ni fifọ awọn ogiri sẹẹli ati awọn ewon iparun lati tu dna sinu ojutu.
Resuspening ti awọn sẹẹli
● Onírẹlẹ ti onírẹlẹ lati yago fun fifọ DNA
Ni kete ti ojutu arin ti arin arin ti wa ni afikun, awọn sẹẹli nilo lati wa ni rọra rọra lati yago fun itiju DNA. Ṣiulerin ti o le fọ DNA si awọn apa kekere, eyiti o le jẹ iṣoro fun awọn ohun elo isalẹ ti o nilo giga - molecular - DNA.
● o n ṣe idaniloju resuspensione
Resuspension pipe ṣe idaniloju pe gbogbo awọn sẹẹli ti wa ni jinlẹ ni iṣọkan, mimu gbigba imularada DNA. Eyi le ṣee waye nipasẹ pipinting ti onírẹlẹ tabi vortexing ojutu ni iyara kekere.
Abeabo si awọn sẹẹli lyse
Awọn eto otutu ni iwọn lilo
Awọn sẹẹli ti o tun wa ni iparun ni iwọn otutu kan pato lati rii daju Lonsis pipe. Eyi nigbagbogbo ni a ṣe ni 37 ° C si 55 ° C. Iwọn otutu gangan ati iye akoko le yatọ da lori Ilana ati awọn ibeere pato ti Iwe Kit Isolation Dnalation ti nlo.
Igbese ti a beere fun Lonsis ti o munadoko
Iye akoko aṣoju fun abeabo wa laarin 20 si 30 iṣẹju, ṣugbọn o le tunṣe da lori ṣiṣe ti awọn akiyesi sẹẹli sẹẹli. Giga gigun le jẹ pataki fun Lonsis pipe ṣugbọn o yẹ ki o iwọntunwọnsi lodi si eewu ti ibajẹ DNA.
Itutu si iwọn otutu yara
Pataki ti itutu agbapo eleyi
Lẹhin abeabo, Lesate ni a tutu tutu si iwọn otutu yara. Ikotu itutu agbaiye ṣe iranlọwọ ni iduroṣinṣin DNA ati se iyato eewu ti ijanilaya gbona, eyiti o le bajẹ DNA naa.
Awọn ipa lori DNA ati awọn idoti cellular
Itutu si iwọn otutu yara ngbanilaaye lati ṣe asọtẹlẹ, ni o rọrun lati ya DNA ni awọn igbesẹ atẹle naa. Eyi tun ṣe iranlọwọ lati ṣe iduroṣinṣin awọn iṣẹ henensiamu ati mu ki yiyọ kuro ti RNA nipasẹ itọju RNASE.
Afikun ti tunnu ojutu
Idi ti RNASE ninu ilana naa
A fi ojutu RNA dide lati Debart RNA, eyiti o le bibẹẹkọ coppifere pẹlu DNA ati dabaru pẹlu awọn ohun elo isalẹ. RNEET n wa titi di agolo RNA, nlọ DNA ṣe afẹsodi.
● Dena idibajẹ RNA
Dena konjesonu RNA jẹ pataki fun awọn ohun elo ti o nilo DNN mimọ, gẹgẹ bi PCR ati adaṣe. Itọju RNOSE ṣe idaniloju pe DNA ti o ya sọtọ lati awọn isọnu RNA.
Mimọ ti DNA
Awọn ọna fun yiya sọtọ DNN lati awọn ohun elo cellula miiran
Orisirisi awọn ọna le ṣee lo lati sọ DNN mu kuro lati inu ipon. Iwọnyi pẹlu lasan - imukuro chloroframu, ojoriro ehanol, ati lilo iṣowo iṣowo fun. Ọna kọọkan ni awọn imọran ati awọn apejọ rẹ, pẹlu awọn ohun elo iṣowo ti o rubọ irọrun ati awọn abajade deede.
● Loro fun mimọ DNA
Mimọ jẹ ipin pataki to ṣe pataki fun aṣeyọri ti awọn ohun elo isalẹ. Awọn ohun elo iṣowo, bii Itọju Alagbeka E. Coli DNA ohun elo, ni a ṣe apẹrẹ lati mu ga - mimọ kuro ni imunadoko awọn ọlọjẹ, awọn ẹkun -pa, ati awọn dọgba miiran.
Ibi ipamọ ati mimu ti DNA sọtọ DNA
● Awọn iṣe ti o dara julọ fun titoju DNA
Lọgan ti wẹ, DNA fọwọsi, DNA ni o yẹ ki o wa ni fipamọ ni ifipamọ ti o yẹ kan, bi SFFER, ni - 20 ° C tabi - 80 ° fun gigun - ibi ipamọ. Yago fun wi loorekoore wi - awọn kẹkẹ traw bi wọn ṣe le fa ibajẹ DNA DNA.
● Ṣoyàn iduroṣinṣin DNA fun awọn ohun elo isalẹ
Lati ṣetọju ile-ede DNA, lo apadani - awọn Faili ọfẹ ati awọn solusan. Eyi ṣe idaniloju pe DNA naa wa aibikita ati pe o dara fun awọn ohun elo bii ayanmọ, iṣedede, ati pcr.
NipaBuluu
Jiangsu Hillgene ṣe idi fun olu-iṣẹ rẹ (10,000 awọn irugbin ati ile-iṣẹ RMP ati Shanghn, Googhou, Graghai ati Shanghai, ti n ṣe nẹtiwọọki iṣelọpọ lẹwa, ni apapọ nẹtiwọọki iṣelọpọ lẹwa ni Jerusalẹmu. Aaye Aferi Carolina ni AMẸRIKA lọwọlọwọ labẹ ikole, siwaju siwaju si wiwa rẹ kariaye. Hillgene ti kọ ipa-ọna ti o han fun idagbasoke awọn ọja itọju cellular, pẹlu awọn iru ẹrọ fun iṣelọpọ nucleric acid, ibi isuna owo ọfẹ, ati idanwo QC. Awọn ọja BlueKit jẹ apẹrẹ fun Iṣakoso Didara, aridaju aṣeyọri ti awọn imotuntun itọju ailera cellular.
Akoko Post: 2024 - 09 - 0,5 14:47:03
