E. Coladan DNKni izolyatsiya qilish molekulyar biologiyada asosiy protsedura hisoblanadi. Ushbu maqola sizni butun jarayondan o'tib, batafsil qadamlar va tushuntirishlarni taqdim etadi, bu sizning ilm-fan va protseduraning amaliy jihatlarini tushunasiz. Siz magistral tadqiqotchi yoki laboratoriyaga yangi kelganmisiz, bu qo'llanma qimmatli manba bo'ladi.
Hujayra to'xtatib turish
● E. Cola hujayralari to'plami
E. Coladan izolyatsiya qiluvchi DNKning birinchi bosqichi bakterial hujayralarni to'plashni o'z ichiga oladi. Odatda bu E. Colni logarifmik o'sish bosqichiga etib borguncha, munosib suyuqlikdagi o'sishni talab qiladi. Vaqt juda muhimdir, chunki bu bosqichdagi hujayralar eng istiqbolli va osonroqdir, bu esa yuqori DNKning yuqori daromadliligiga olib keladi.
● tegishli buferdagi hujayralarni qayta tiklash
To'plangan hujayralar mos keladigan tampon ichida qayta tiklanadi. Umumiy tanlov - bu Tris - Edta (te) buferni qazib olish jarayonida DNKning yaxlitligini saqlashga yordam beradi. Bufer bir nechta maqsadlarga xizmat qiladi: pHni barqarorlashtiradi, aks holda DNKni kamaytirishi mumkin bo'lgan dlatentatentatlar, keyingi fermik reaktsiyalar uchun optimal ion muhitini ta'minlaydi.
Centrifecuction pellet hujayralariga
● Kentrifugiya (tezlik va vaqt) parametrlari
Hujayralarni qayta tiklagandan so'ng, to'xtatib turish sandiqlarni peletkaga aylantirishga olib keladi. Centrifulation tezligi va vaqt muhim parametrlardir. Odatda, santrifüj, taxminan 4000 dona - 15 daqiqada 4 ° C da 15 minut. Bu hujayralar sentragugu naychaning pastki qismida qattiq pellet shakllanishini ta'minlaydi.
● To'g'ri pelletingning ahamiyati
To'g'ri pelleting hujayralarni o'sadi va boshqa eriydigan komponentlardan ajratish uchun zarurdir. Yaxshi, hosil bo'lgan pellet keyingi bosqichlarni yanada sezilarli va samaraliroq qiladi, hujayralarning minimal yo'qotishini va shuning uchun maksimal darajada maksimal darajada.
Jartorantni olib tashlash
● Jarkotant olib tashlash uchun texnikalar
Hujayralar pelleted, o'ta g'ayritabiiy (pelet ustidagi suyuqlik) hujayra pelletni bezovta qilmasdan ehtiyotkorlik bilan olib tashlanishi kerak. Bu odatda mikroppa yordamida amalga oshiriladi. Har qanday hujayralarni yo'qotmaslik uchun bu qadamni diqqat bilan bajarish juda muhimdir.
● hujayra pellet-ning minimal yo'qotishini ta'minlash
Hujayradagi pellet-ning minimal yo'qotishini ta'minlash ehtiyotkorlik bilan naycha va zarurat, santrifüj va g'ayritabiiy ravishda olib tashlashning bir necha bosqichini o'z ichiga oladi. Maqsad - maksimal dna tiklanish uchun pelletda iloji boricha ko'proq hujayralarni saqlash.
Nuklei liziz echimining qo'shilishi
● Nuklei liziz echimining tarkibiy qismlari
Nuklei lizis echimi odatda yuvish vositasi (SDSlar kabi), bufer (masalan, Tris - HLL) va xiyonat vositasi (ET kabi). Yuvish vositasi hujayra membranasini va yadroviy konvertni, shu jumladan DNKni eritmaga chiqaradigan hujayra va yadroviy konvertni buzadi.
● Hujayra devorlarini buzishda roli
Nukleli lizis echimi nafaqat hujayra membranasini, balki oqsillar va lipidlarni, shuningdek, DNKni eritmaga chiqaradigan hujayra devorlari va yadroviy konvertlarni susaytiradi.
Hujayralarni qayta tiklash
● DNKning kesilishidan saqlanish uchun yumshoq quvurish
Nukle licize echim qo'shilgandan so'ng, DNKning kesilishidan saqlanish uchun hujayralar muloyimlik bilan qayta tiklanishi kerak. Qarayish DNKni kichik bo'laklarga ajratishi mumkin, bu yuqori martaba talab qiladigan quyram tizimlari uchun muammoli bo'lishi mumkin - Molekulyar - og'irlik DNK.
● to'liq qayta tiklanishni ta'minlash
To'liq repenziya barcha hujayralarni bir tekisda tiklab, DNKni qayta tiklashni maksimal darajada oshiradi. Bunga yumshoq naychani yoki past tezlikda eritmaning pasayishiga erishish mumkin.
Lese hujayralariga inkubatsiya
● Kuluçka uchun harorat sozlamalari
To'liq lizizni ta'minlash uchun qayta tiklangan hujayralar ma'lum bir haroratda inkubatsiya qilinadi. Bu odatda 37 ° C dan 55 ° C gacha amalga oshiriladi. Aniq harorat va davomiyligi protokolga va ishlatiladigan DNK izolyatsiya to'plamining o'ziga xos talablariga qarab farq qilishi mumkin.
● Samarali liziz uchun zarur bo'lgan vaqt
Kuluçka uchun odatiy davomiyligi 20 dan 30 minutgacha, ammo uni sozlash samaradorligi samaradorligi asosida sozlanishi. To'liq liziz uchun uzaytirilgan inkubatsiya zarur bo'lishi mumkin, ammo DNKning buzilishi xavfiga nisbatan muvozanatli bo'lishi kerak.
Xona haroratiga sovutish
● asta-sekin sovutishning ahamiyati
Kuluçkadan keyin lizat asta-sekin xona haroratiga soviydi. Darhol sovutish DNKni barqarorlashtirishda yordam beradi va DNKni yomon tanazzulga soladigan termal zarba xavfini minimallashtiradi.
● DNK va uyali qoldiqlar ta'siri
Xona haroratiga sovutish uyali qoldiqlarga cho'kindi va DNKni keyingi bosqichlarda ajratishni osonlashtiradi. Bu, shuningdek, ferment faoliyatini barqarorlashtirishga yordam beradi va Rnaz davolash orqali RNKni olib tashlashga yordam beradi.
Rnaz eritmasining qo'shilishi
● RNAZning tartibda maqsadlari
RNNEE echimining ta'kidlash uchun RNKni takomir qo'shib qo'yiladi, aks holda ko dna bilan tozalaydi va pastga nisbatan dasturlarga aralashish. Rnaz RNN-ni tanlab, DNKni buzib tashladi.
● RNNning ifloslanishining oldini olish
RNNning ifloslanishining oldini olish PCR va ketma-ketlik kabi toza DNKni talab qiladigan arizalarni talab qiladi. Rezaze davolash izolyatsiya qilingan DNK RNN ifloslantiruvchi moddasidan xoli ekanligini ta'minlaydi.
DNKni tozalash
● DNKni boshqa uyali qismlardan ajratish usullari
DNKni lizatdan tozalash uchun bir nechta usullardan foydalanish mumkin. Bularga fenol - xloroform qazib olish, etanol yog'in va tijorat e. Colli DNK formalaridan foydalanish. Har bir usul o'zining ijobiy va salbiy to'plamlariga qulaylik va izchil natijalarga ega.
● DNK pokligi uchun fikrlar
Tozalik - quyi oqimlarning muvaffaqiyati uchun muhim omil. Elektron terapiya kabi tijorat formasi E. Cola DNK KIT, oqsillar, lipidlar va boshqa ifloslantiruvchi moddalarni samarali olib tashlash orqali poklik DNK.
Izolyatsiya qilingan DNKni saqlash va ishlov berish
● DNKni saqlash bo'yicha eng yaxshi amaliyotlar
Bir marta tozalangan, DNK mos keladigan tamponda, 20 ° C yoki - 80 ° C uchun saqlash kerak. Tez-tez muzlashdan saqlaning - Qishloqing tsikllari DNKning buzilishiga olib kelishi mumkin.
● quyi dasturlar uchun DNK yaxlitligini saqlash
DNN yaxlitligini saqlash uchun steril, nuklenzendan foydalaning - Bepul quvurlar va echimlar. Bu DNK noaniq bo'lib qoladi va klonlash, ketma-ketlik va PCR kabi qo'llaniladi.
HaqidaBluekit
Jiangsu XillGenena "Suzhouning tumanida" Suzhouning ", Suzhouning tumanida joylashgan Suzhou shahrida joylashgan Suzhouda" Suzhouning "va Shanghen va Shanxay shahridagi ikkita ishlab chiqarish joylari, Suzhou va Shanxayning ikkita ishlab chiqarish joylarini butun mamlakat bo'ylab ishlab chiqarish tarmoqlarini kengaytirdi. AQShda Shimoliy Karolina sayti hozirda qurilmoqda, keyinchalik uning global ishtirokini targ'ib qilmoqda. Hillxen hujayra terapiyasini rivojlantirish uchun ekspress yo'lni yaratdi, uni kashfiyotdan so'ng, nuklein kislota ishlab chiqarishi platformalari, zardobni ozod qilish va QK sinovini o'tkazish. BluEKit mahsulotlari uyali terapiya innovatsiyalarining muvaffaqiyatini ta'minlash, sifat nazorati uchun mo'ljallangan.
O'tish vaqti: 2024 - 09 - 05 14:47:03
