ای کولی سے ڈی این اے کو الگ کرنا سالماتی حیاتیات میں ایک بنیادی طریقہ کار ہے۔ یہ مضمون آپ کو پورے عمل سے گزرتا ہے ، تفصیلی اقدامات اور وضاحت فراہم کرتا ہے ، اس بات کو یقینی بناتا ہے کہ آپ سائنس اور طریقہ کار کے عملی پہلوؤں دونوں کو سمجھیں گے۔ چاہے آپ تجربہ کار محقق ہوں یا لیب میں نئے آنے والے ہوں ، یہ گائیڈ ایک قیمتی وسیلہ ہوگا۔
سیل معطلی کی تیاری
E. ای کولی کے خلیوں کا مجموعہ
ای کولی سے ڈی این اے کو الگ تھلگ کرنے کا پہلا قدم بیکٹیریل خلیوں کو جمع کرنا شامل ہے۔ اس کے لئے عام طور پر ایک مناسب مائع میڈیم میں بڑھتی ہوئی E. کولی کی ضرورت ہوتی ہے جب تک کہ یہ لوگرتھمک نمو کے مرحلے تک نہ پہنچ جائے۔ وقت بہت اہم ہے کیونکہ اس مرحلے میں خلیات سب سے زیادہ قابل عمل اور لائسنس کے لئے آسان ہیں ، جس کے نتیجے میں ڈی این اے کی زیادہ پیداوار ہوگی۔
an ایک مناسب بفر میں خلیوں کو دوبارہ استعمال کرنا
جمع شدہ خلیوں کو پھر ایک مناسب بفر میں بازیافت کیا جاتا ہے۔ ایک مشترکہ انتخاب ٹرس - ای ڈی ٹی اے (ٹی ای) بفر ہے ، جو نکالنے کے عمل کے دوران ڈی این اے کی سالمیت کو برقرار رکھنے میں مدد کرتا ہے۔ بفر متعدد مقاصد کی تکمیل کرتا ہے: یہ پییچ کو مستحکم کرتا ہے ، وائلنٹ کیٹیشن کو چیلیٹ کرتا ہے جو دوسری صورت میں ڈی این اے کو ہراساں کرسکتا ہے ، اور اس کے بعد کے انزیمیٹک رد عمل کے ل an ایک زیادہ سے زیادہ آئنک ماحول مہیا کرتا ہے۔
گولیوں کے خلیوں میں سینٹرفیوگریشن
cent سنٹرفیوگریشن (رفتار اور وقت) کے لئے پیرامیٹرز
خلیوں کو بحال کرنے کے بعد ، معطلی کو خلیوں کو چھرے کرنے کے لئے سنٹرفیوگریشن کا نشانہ بنایا جاتا ہے۔ سینٹرفیگریشن کی رفتار اور وقت اہم پیرامیٹرز ہیں۔ عام طور پر ، سینٹرفیوگریشن 4 ° C پر 10 - 15 منٹ کے لئے تقریبا 4،000 - 6،000 جی پر انجام دیا جاتا ہے۔ اس سے یہ یقینی بنتا ہے کہ خلیوں کو سینٹرفیوج ٹیوب کے نیچے ایک سخت چھرہ تشکیل دیا جاتا ہے۔
proper مناسب چھرے کی اہمیت
خلیوں کو نمو کے درمیانے درجے اور دیگر گھلنشیل اجزاء سے الگ کرنے کے لئے مناسب چھرے کرنا ضروری ہے۔ ایک کنواں - تشکیل شدہ چھرہ بعد کے اقدامات کو آسان اور موثر بناتا ہے ، جو خلیوں کے کم سے کم نقصان کو یقینی بناتا ہے اور اس وجہ سے زیادہ سے زیادہ ڈی این اے کی پیداوار کو یقینی بناتا ہے۔
سپرنٹنٹنٹ کا خاتمہ
super سپرنٹنٹنٹ ہٹانے کے لئے تکنیک
ایک بار جب خلیوں کو چھرے لگایا جاتا ہے تو ، سپرنٹنٹنٹ (چھرے کے اوپر مائع) سیل چھرے کو پریشان کیے بغیر احتیاط سے ہٹانا چاہئے۔ یہ عام طور پر مائکروپیپیٹ کا استعمال کرتے ہوئے کیا جاتا ہے۔ کسی بھی خلیوں کو کھونے سے بچنے کے ل this اس قدم کو احتیاط سے انجام دینا بہت ضروری ہے۔
cell سیل گولی کے کم سے کم نقصان کو یقینی بنانا
سیل گولی کے کم سے کم نقصان کو یقینی بنانا محتاط پائپٹنگ اور ، اگر ضروری ہو تو ، سنٹرفیوگریشن اور سپرنٹنٹنٹ کو ہٹانے کے متعدد راؤنڈ شامل ہیں۔ مقصد یہ ہے کہ زیادہ سے زیادہ ڈی این اے کی بازیابی کے لئے زیادہ سے زیادہ خلیوں کو گولی میں رکھیں۔
نیوکلی لیسس حل کا اضافہ
nuc نیوکللی لیسس حل کے اجزاء
نیوکلی لیسس حل میں عام طور پر ایک ڈٹرجنٹ (جیسے ایس ڈی ایس) ، ایک بفر (جیسے ٹریس - ایچ سی ایل) ، اور ایک چیلٹنگ ایجنٹ (جیسے ای ڈی ٹی اے) ہوتا ہے۔ ڈٹرجنٹ سیل کی جھلی اور جوہری لفافے میں خلل ڈالتا ہے ، جس سے ڈی این اے سمیت سیلولر مشمولات کو حل میں جاری کیا جاتا ہے۔
cell سیل دیواروں کو توڑنے میں کردار
نیوکللی لیسس حل نہ صرف سیل کی جھلی کو لیس کرتا ہے بلکہ پروٹین اور لپڈس کو بھی انکار کرتا ہے ، جس سے ڈی این اے کو حل میں چھوڑنے کے لئے سیل کی دیواروں اور جوہری لفافوں کو مؤثر طریقے سے توڑ دیا جاتا ہے۔
خلیوں کی بحالی
D ڈی این اے کینچی سے بچنے کے لئے نرم پائپٹنگ
ایک بار جب نیوکلی لیسس حل شامل ہوجائے تو ، ڈی این اے کینچی سے بچنے کے لئے خلیوں کو آہستہ سے دوبارہ بحال کرنے کی ضرورت ہے۔ مونڈنے سے ڈی این اے کو چھوٹے چھوٹے ٹکڑوں میں توڑ سکتا ہے ، جو بہاو ایپلی کیشنز کے لئے پریشانی کا باعث ہوسکتا ہے جس میں اعلی - مالیکیولر - وزن ڈی این اے کی ضرورت ہوتی ہے۔
complete مکمل بحالی کو یقینی بنانا
مکمل بحالی اس بات کو یقینی بناتی ہے کہ تمام خلیوں کو یکساں طور پر لیس کیا جاتا ہے ، جس سے زیادہ سے زیادہ ڈی این اے کی بازیابی ہوتی ہے۔ یہ نرم پائپٹنگ یا کم رفتار سے حل کو بھنور کرکے حاصل کیا جاسکتا ہے۔
LYSE خلیوں میں انکیوبیشن
in انکیوبیشن کے لئے درجہ حرارت کی ترتیبات
مکمل لیسس کو یقینی بنانے کے ل the بحالی والے خلیوں کو ایک مخصوص درجہ حرارت پر انکیوبیٹ کیا جاتا ہے۔ یہ عام طور پر 37 ° C سے 55 ° C پر کیا جاتا ہے۔ پروٹوکول اور ڈی این اے تنہائی کٹ کی مخصوص ضروریات کے مطابق استعمال ہونے والے درجہ حرارت اور مدت مختلف ہوسکتی ہے۔
effective مؤثر لیسس کے لئے درکار مدت
انکیوبیشن کے لئے عام مدت 20 سے 30 منٹ کے درمیان ہے ، لیکن مشاہدہ کردہ سیل لیسس کی کارکردگی کی بنیاد پر اسے ایڈجسٹ کیا جاسکتا ہے۔ مکمل لیسس کے ل long طویل انکیوبیشن ضروری ہوسکتی ہے لیکن اسے ڈی این اے ہراس کے خطرے سے متوازن ہونا چاہئے۔
کمرے کے درجہ حرارت پر ٹھنڈا ہونا
mlost آہستہ آہستہ ٹھنڈک کی اہمیت
انکیوبیشن کے بعد ، لیزیٹ آہستہ آہستہ کمرے کے درجہ حرارت پر ٹھنڈا ہوتا ہے۔ تدریجی ٹھنڈک ڈی این اے کو مستحکم کرنے میں مدد کرتی ہے اور تھرمل جھٹکے کے خطرے کو کم سے کم کرتی ہے ، جو ممکنہ طور پر ڈی این اے کو ہراساں کرسکتی ہے۔
D ڈی این اے اور سیلولر ملبے پر اثرات
کمرے کے درجہ حرارت پر ٹھنڈا کرنے سے سیلولر ملبے کو تیز تر ہونے کی اجازت ملتی ہے ، جس سے بعد کے مراحل میں ڈی این اے کو الگ کرنا آسان ہوجاتا ہے۔ اس سے انزائم کی سرگرمیوں کو مستحکم کرنے میں بھی مدد ملتی ہے اور RNase علاج کے ذریعہ RNA کے خاتمے میں مدد ملتی ہے۔
RNase حل کا اضافہ
procedure طریقہ کار میں RNase کا مقصد
آر نیس حل کو آر این اے کو ہراس میں شامل کیا جاتا ہے ، جو دوسری صورت میں ڈی این اے کے ساتھ پاک - اور بہاو ایپلی کیشنز میں مداخلت کرسکتا ہے۔ RNase منتخب طور پر آر این اے کو ہضم کرتا ہے ، ڈی این اے کو برقرار چھوڑ دیتا ہے۔
R آر این اے آلودگی کو روکنا
آر این اے کی آلودگی کو روکنا ان ایپلی کیشنز کے لئے بہت ضروری ہے جس میں خالص ڈی این اے کی ضرورت ہوتی ہے ، جیسے پی سی آر اور ترتیب۔ RNase علاج یقینی بناتا ہے کہ الگ تھلگ DNA RNA آلودگیوں سے پاک ہے۔
ڈی این اے کی طہارت
D ڈی این اے کو دوسرے سیلولر اجزاء سے الگ کرنے کے طریقے
لیسیٹ سے ڈی این اے کو پاک کرنے کے لئے کئی طریقوں کا استعمال کیا جاسکتا ہے۔ ان میں فینول - کلوروفارم نکالنے ، ایتھنول بارش ، اور تجارتی ای کولی ڈی این اے کٹس کا استعمال شامل ہیں۔ تجارتی کٹس کے ساتھ ہر طریقہ کار میں اپنے پیشہ اور موافق ہوتے ہیں جو سہولت اور مستقل نتائج پیش کرتے ہیں۔
D ڈی این اے طہارت کے لئے تحفظات
پاکیزگی بہاو ایپلی کیشنز کی کامیابی کے لئے ایک اہم عنصر ہے۔ تجارتی کٹس ، جیسے سیل تھراپی ای کولی ڈی این اے کٹ ، پروٹین ، لپڈس اور دیگر آلودگیوں کو مؤثر طریقے سے ختم کرکے اعلی - طہارت ڈی این اے حاصل کرنے کے لئے ڈیزائن کی گئی ہیں۔
الگ تھلگ ڈی این اے کی اسٹوریج اور ہینڈلنگ
D ڈی این اے کو ذخیرہ کرنے کے لئے بہترین عمل
ایک بار پاک ہوجانے کے بعد ، ڈی این اے کو ایک مناسب بفر میں ، جیسے ٹی بفر ، - 20 ° C یا - 80 ° C پر طویل مدت کے ذخیرہ کرنے کے لئے ذخیرہ کرنا چاہئے۔ بار بار منجمد سے پرہیز کریں
stream بہاو ایپلی کیشنز کے لئے ڈی این اے سالمیت کو برقرار رکھنا
ڈی این اے کی سالمیت کو برقرار رکھنے کے لئے ، جراثیم سے پاک ، نیوکلیز - مفت نلیاں اور حل استعمال کریں۔ اس سے یہ یقینی بنتا ہے کہ ڈی این اے بے قابو اور کلوننگ ، ترتیب ، اور پی سی آر جیسی ایپلی کیشنز کے ل suitable موزوں ہے۔
کے بارے میںبلیو کٹ
جیانگسو ہلجن نے سوزہو میں واقع اپنے ہیڈکوارٹر (10،000㎡ جی ایم پی پلانٹس اور آر اینڈ ڈی سینٹر) قائم کیے ، جو ووزونگ ضلع میں واقع ہے ، خوبصورت تائہو جھیل کے ایک لکشور شہر سوزہو ، اور شینزین اور شنگھائی میں دو مینوفیکچرنگ سائٹیں ، جو اس کے تیاری کے نیٹ ورک کو ملک بھر میں پھیلاتی ہیں۔ امریکہ میں نارتھ کیرولائنا سائٹ اس وقت زیر تعمیر ہے ، جس نے اپنی عالمی موجودگی کو مزید پھیلایا ہے۔ ہلجن نے سیلولر تھراپی کی مصنوعات تیار کرنے کے لئے ایک ایکسپریس راستہ بنایا ہے ، دریافت سے لے کر ترسیل تک ، نیوکلیک ایسڈ مینوفیکچرنگ ، سیرم - مفت معطلی کی ثقافت ، بند عمل کی ترقی ، اور کیو سی ٹیسٹنگ کے پلیٹ فارم کے ساتھ۔ بلیوکیٹ مصنوعات کو کوالٹی کنٹرول کے لئے ڈیزائن کیا گیا ہے ، جس سے سیلولر تھراپی بدعات کی کامیابی کو یقینی بنایا گیا ہے۔
پوسٹ ٹائم: 2024 - 09 - 05 14:47:03
