Э. Колидан ДНКны изоляцияләү - молекуляр биология буенча төп процедура. Бу мәкалә сезне бөтен процесс белән йөртәчәк, җентекле адымнар һәм аңлатмалар бирер, сез фәнне дә, процедураның практик аспектларын да аңларга. Сез белемле тикшерүче яки лабораториягә яңа гына килерме, бу җитәкче кыйммәтле ресурс булачак.
Күзәнәк туктатуны әзерләү
● E. Коли күзәнәкләрен җыю
Э.Г. Колидән ДНКны изоляцияләүдә беренче адым Бакатыр күзәнәкләрен туплауны үз эченә ала. Бу гадәттә E. Coli-ны капчык уртасында үсә барган сыек уртада үсә баруны таләп итә. Вакытлау бик мөһим, чөнки бу этаптагы күзәнәкләр иң яшерен һәм курыккан җиңелрәк, бу ДНК юлына китерәчәк.
● Тиешле буфердагы кабатлау күзәнәкләре
Кабакланган күзәнәкләр тиз арада буферга реанфельт ителә. Уртак сайлау - TRIS - EDTA (TE) Буфер, бу чыгару процессы вакытында ДНКның бөтенлеген сакларга ярдәм итә. Буфер берничә максатка ирешә: ул PH, ДНКны кимсетә алган дивалент очракларны селкетә, һәм аннан соң энжиматик реакцияләр өчен оптималь иональ мохит бирә.
Центрифугация Пелет күзәнәкләренә
● центрифугация өчен параметрлар (тизлек һәм вакыт)
Күзәнәкләрне үзгәрткәч, туктату күзәнәкләрне тоташтырырга дучар итә. Центрифугация тизлек һәм вакыт - критик параметрлар. Гадәттә, центрифугация 4000 тирәсе тирәсе 4000 г 10 000 г башкарыла. 4 ° C 4 ° C. Бу күзәнәкләрнең центрифен трубасы төбендәге каты пелет ясавын тәэмин итә.
Meetheredгары Пеллингның мөһимлеге
Күзәнәкләрне үстерү һәм башка эри торган компонентлардан аеру өчен, дөрес пелл. Хәер - Формалашкан Пелет киләсе адымнарны җиңеләйтә, нәтиҗәлерәк, нәтиҗәлерәк, максимум ДНКЕМ ЭШЛӘР.
Суперантияне бетерү
Surnир супернатны бетерү өчен техника
Күзәнәкләр пеленетланганнан соң, супернатант (Пелет өстендәге сыеклык) күзәнәк пеллетын бозмыйча җентекләп бетерелергә тиеш. Бу гадәттә микропипета ярдәмендә эшләнә. Бу адымны шакмакны югалту өчен бик мөһим.
● күзәнәк пеллетын минималь югалтуны тәэмин итү
Кәрәзле пликлның минималь югалтуын тәэмин итү җайфа торфетны үз эченә ала, кирәк булса, берничә төр центнер һәм супертанат бетерү. Максат - максималь DNA торгызу өчен пелетта мөмкин кадәр күбрәк күзәнәкләрне саклау.
Нуклей Линис эремәсе өстәү
● Нуклей Линис эремәсен компонентлар
Nuclei LySISION-ның гадәттәгечә (SDS кебек), буфер (TRIS - HCC кебек HCL), һәм бизәү агенты (Эдта кебек) бар. Инде юу кәрәзле мембрана һәм атом конвертын боза, кәрәзле эчтәлекне чыгарган, шул исәптән ДНК, чишелешкә.
● Күзәнәк стеналарын өзүдә роль
Нуклей Линис эреме күзәнәк мембранасы гына түгел, ә протеиннарны һәм липидларны да кертә алмый, күзәнәк чорын чыгару өчен күзәнәк стеналарын һәм атом конвертларын нәтиҗәле өзүне төзәтә.
Күзәнәкләрне реансацияләү
Dna туплау өчен йомшак торба
Nuclei LysISE чишелеше өстәлгәннән соң, күзәнәкләр ДНК бозмас өчен, йомшак кына үзгәрергә кирәк. Киү ДНКны кечкенә кисәкләргә сындырырга мөмкин, алар югары дәрәҗәдәге кушымталар өчен проблемалы булырга мөмкин, алар югары дәрәҗәдәге кушымталар өчен булырга мөмкин - Молекуляр - Авырлык ДНК.
● тулы реанимацияне тәэмин итү
Тулы реанпрессия барлык күзәнәкләрнең дә ДНКны торгызуның бертөрле барлыкка килүен тәэмин итә. Моны йомшак торбетт белән яки чишелешне ворт эксплуатациягә ирешеп була.
Лейс күзәнәкләренә инкубация
● Инкубация өчен температура көйләүләре
Resseәяүле күзәнәкләр тулы температурада тулы температурада инкубацияләнә. Бу гадәттә 37 ° C 55 ° C тәшкил итә. Төгәл температура һәм озынлык протоколына һәм ДНК изоляция комплектының конкрет таләпләренә карап үзгәрергә мөмкин.
Emperation эффектив лизит өчен кирәк булган вакыт кирәк
Инкубациягә типик озынлык 20-30 минут арасында, ләкин күзәтелгән күзәнәк лизисының эффективлыгы нигезендә көйләнергә мөмкин. Озак вакыт инкубация тулы лизка өчен кирәк булырга мөмкин, ләкин ДНК даны куркынычы белән тигезләнергә тиеш.
Бүлмә температурасына суыту
Breadalyәр әкренләп суытуның мөһимлеге
Инкубациядән соң, Лизат бүлмә температурасына әкренләп суытыла. Акрынлап суыту ДНКны тотрыклыландырырга һәм җылылык шок куркынычын киметергә ярдәм итә, бу ДНКны боза ала.
Your ДНКына һәм кәрәзле чүплеккә китерә
Бүлмә температурасын суыту кәрәзле чүплеккә төшәргә мөмкинлек бирә, ДНКны киләсе адымнарда аеру җиңелрәк. Бу шулай ук фермент эшчәнлеген тотрыклыландырырга һәм RNAны рланны рланны бетерүне җиңеләйтә.
Rnase чишелешен өстәү
● Процедурада рназның максаты
RNASE чишелеше РНКны кимсетү өчен өстәлде, ул башка CO - DNA белән чистарта һәм түбән агым кушымталарына комачаулый ала. DNA-ны актив калдырып, RNNA - DNA-ны сайлап карагыз.
● РНИТны пычрану
RNA динмастринасы PCR һәм эзлеклелек кебек саф ДНК таләп итә торган кушымталар өчен бик мөһим. Рназны дәвалау аерым ДНКның Рна пычраткыч матдәләрдән азат булуын тәэмин итә.
ДНКны чистарту
● ДНКны башка кәрәзле компонентлардан аеру ысуллары
ДНКны лизаттан чистарту өчен берничә ысул кулланылырга мөмкин. Алар арасында фенол - хлорофор чыгару, этанол явуы, һәм Coli dna комплектларын кулланып. Eachәрбер ысулның уңайлыклары һәм эзлекле нәтиҗәләр тәкъдим итү, коммерция комплекты бар.
● ДНК сафлыгы турында уйланыгыз
Чисталык - аста агымдагы кушымталарның уңышлары өчен критик фактор. Коммерция комплекты, мәсәлән, күзәнәк терапиясе кебек, Coli dna комплекты.
Изоляцияләнгән ДНКны саклау һәм эшкәртү
DNA саклау өчен иң яхшы тәҗрибәләр
Бервакыт чистартылганнан соң, ДНК тиешле буферда, теле буферында, Searche, Sead Searche, Study4 Shot4 S яки - Саклау өчен сакларга тиеш. Еш туңдырудан сакланыгыз.
● ДНКны түбән агымдагы кушымталар өчен саклау
ДНК сафлыгын саклап калу өчен, стериль, нуклеаз - бушлай трубалар һәм чишелешләр кулланыгыз. Бу ДНКның сокландыргыч булып калуы һәм клонлаштыру, эзлеклелек, һәм PCR кебек гаризалар өчен яраклы булып кала.
ТурындаЗәңгәр
JISSU HILGGEN үзенең штаб-квартирасын оештырды (2013-нче елга "Тайвань күлендәге Л & Д Шанхей шәһәрендә, Шэньчжэнь һәм Шанхайдагы ике җитештерү мәйданчыгы илкүтватасын киңәйтү. АКШта Төньяк Каролина сайты төзелә, аның глобаль булуын тагын да тарала. Хиллгене кәрәзле терапия продуктларын йөртү өчен, платформалар белән, ямьлис кислотасы җитештерү өчен платформаларны үстерү өчен экспресс юлын салды, серум - Ирекле туктату культурасы культурасы, ябык процесс үсеше, QC сынау. Bluekit продуктлары күзәнәк терапия инновацияләренең уңышын тәэмин итү өчен, сыйфат белән идарә итү өчен эшләнгән.
Пост вакыты: 2024 - 05:47:03
