ДНК-и ҷудогона аз E. COLI тартиби асосӣ дар биологияи молекулавӣ мебошад. Дар ин мақола шумо тавассути тамоми равандҳо роҳ мераванд ва марҳилаҳо ва тавзеҳи муфассал, ки шумо дарк мекунед, ки шумо ҳам ҳам ҳам ҳам ба ҳам мефаҳмед, ки ҳам ҳам ҳам ҳам ҳам ҳам ҳам илм ва ҳам ҷанбаҳои амалии расмиро таъмин мекунед. Новобаста аз он ки шумо муҳаққиқгарони мавсимӣ ё навбатии навигариҳанда ҳастед, ин дастур манбаи арзишманд хоҳад буд.
Омодасозии боздоштани чашмак
● Ҷамъоварии ҳуҷайраҳои E. CONI
Қадами аввал дар дурнамоии ДНК аз E. COLI ҷамъоварии чашмакҳои бактериявиро дар бар мегирад. Ин одатан ба парвариши E. COLI дар Миёна ба воситаи моеъи мувофиқ ниёз дорад, то он даме ки ба марҳилаи афзоиши логартикӣ расад. Вақт аҳамияти ҳалкунанда аст, зеро ҳуҷайраҳо дар ин марҳила аз ҳама дилхоҳ ва осонтаранд, ки ба ҳосили баландтари ДНК оварда мерасонанд.
● айнакҳо дар буфери мувофиқ
Чашмакҳои ҷамъшуда пас аз он ки дар буфери мувофиқ мувофиқанд. Интихоби умумӣ трис - буферест, ки ҳангоми истихроҷи ДНК-и ДНК-ро нигоҳ медорад. Буфер ҳадафҳои гуногунро ба амал меорад: он қалбҳои фосиларо мӯътадил мекунад, ки дигар ДНК-ро дар акси ҳол, ё муҳити оптималии Идилиро барои аксуламалҳои оқилона истифода мебаранд.
Centrifuguation ба ҳуҷайраҳои Пеллет
● Параметрҳо барои центрифугатсия (суръат ва вақт)
Пас аз бозгашт аз ҳуҷайраҳо, боздоштан боздоштан ба пеллетҳо пеллетҳо гузошта мешавад. Суръати истиқоматӣ ва вақт параметрҳои интиқодӣ мебошанд. Одатан, Sentrifuguation тақрибан 4,000 - 6,000 г барои 10 - 15 дақиқа дар 4 ° C иҷро карда мешавад. Ин кафолат медиҳад, ки ҳуҷайраҳо як пеллетҳои қатъӣ дар поёни қубурҳои centrifuge ташкил медиҳанд.
● Аҳамияти пелликатсияи дуруст
Плюсинги дуруст барои ҷудо кардани ҳуҷайраҳои миёна ва дигар ҷузъҳои ҳалшаванда муҳим аст. Ally - Плитаи ташаккулёфта қадамҳои минбаъдаро осонтар мекунад ва самараноктар таъмин месозанд, таъмини талафоти ҳадди ақали ҳуҷайраҳо ва аз ин рӯ, ҳосили dНna.
Хориҷ кардани Supernatant
● Техника барои тоза кардани Supernatantantantantantantant
Пас аз он ки ҳуҷайраҳо пелликатсия шудаанд, Supernatant (моеъ аз болои пеллет) бояд бе вайрон кардани пеллети ҳуҷайра бодиққат нест карда шавад. Он одатан бо истифодаи микрофеттесия анҷом дода мешавад. Барои пешгирии гум кардани ягон ҳуҷайраҳо, ин муҳим аст.
● Таъмини талафоти ҳадди ақали пеллети ҳуҷайра
Таъмини талафоти ҳадди аққали пеллети ҳуҷайраҳо ва агар зарур бошад, даври сершумори SMRIFUGUTACT ва хориҷкунии фавқулодда. Ҳадаф аст, ки дар пеллетсия дар Плелле барои барқароркунии DANE бошад.
Илова кардани ҳалли лучи
● Ҷузъҳои ҳалли люкти
Ҳалли Люлси одатан як шустушӯй (ба монанди Sts), буферӣ (ба монанди TRIS - HCL) ва агенти шикаста (ба монанди EDTA). Шаколдор мембранаи ҳуҷайра ва лифофаи атомӣро халалдор мекунад, ки мундариҷаи мобилӣ, аз ҷумла ДНК, ба маҳлулҳо, ба маҳлулият халал мерасонад.
● Дар бораи шикастани деворҳои ячейка
Маҳлул кардани Люсӣ на танҳо мембранаи ҳуҷайра, балки сафедаҳо ва липидҳоро низ инкор мекунад, ки ба таври муассир ҷойгир кардани деворҳои ҳуҷайра ва лифофаҳои яроқ ва лифофаҳои яроқ ва лифофаҳои яроқ ва лифофаҳои яроқ ва лифофаҳои яроқро барои ба ҳалли ДНК рад мекунад.
Оғози истинодҳои ҳуҷайраҳо
● барои пешгирӣ кардани такрори ДНК
Пас аз он ки ҳалли лучи люзил илова карда мешавад, чашмакҳо бояд мулоим шаванд, то ки ба сабади ДНК пешгирӣ кунанд. Ҷамъ метавонад ДНК-ро ба қисмҳои хурдтар вайрон кунад, ки метавонад барои татбиқи заминҳои поёноб мушкилтар бошад, ки баландиро талаб мекунанд - молекулавӣ - Молекулял - ДНК.
● Таъмини қатъи қатъӣ
Таъмини пурраи қатъӣ кафолат медиҳад, ки ҳама ҳуҷайраҳо яксон ва ҳадди аксар барқароркунии ДНК-ро доранд. Инро тавассути модетҳои мулоим ба даст овардан мумкин аст ё ҳалли худро бо суръати паст иҷро кардан мумкин аст.
Infubation ба ҳуҷайраҳои lyse
● Танзимоти ҳарорат барои инкубатсия
Ҳуҷайраҳои барқароршуда дар ҳарорати мушаххас инкубатсия карда мешаванд, то лизои пурраи худро таъмин кунанд. Он одатан дар 37 ° C то 55 ° C анҷом дода мешавад. Вобаста аз протокол ва талаботи мушаххаси бистари DNA истифода мешавад.
● Барои давомнокии зарурӣ зарур аст
Давомнокии маъмулӣ барои инкубатсия аз 20 то 30 дақиқа иборат аст, аммо он метавонад дар асоси самаранокии лизои ҳуҷайра риоя карда шавад. Барои наврасӣ ба итмом расонидани лозаби пурра зарур аст, аммо бояд бар зидди хатари таназзули ДНК мувозинат бошад.
Хунуккунӣ ба ҳарорати хонагӣ
● Ахбори хунуккунӣ
Пас аз исоб, лизатча тадриҷан ба ҳарорати хонагӣ сард мешавад. Солкунии тадриҷӣ дар мӯътадилсозии ДНК кӯмак мекунад ва хатари зарбаи гармиро кам мекунад, ки эҳтимол дорад ДНКаро таназзул кунад.
● Таъсир ба ДНК ва микросар
Сардор ба ҳарорати хонагӣ имкон медиҳад, ки партовҳои мобилӣ ба бориш намерасад ва дар марҳилаҳои минбаъда ДНК-ро осонтар кунад. Ин инчунин ба мӯътадил кардани фаъолиятҳои фермент кӯмак мерасонад ва аз байн бурдани Рна аз ҷониби табобати rnase мусоидат мекунад.
Илова кардани ҳалли rnase
● Мавсади rnase дар тартиби
Натиҷаи RNASAS барои коҳиш додани Рна, ки метавонад CO - -ро бо ДНК ва дефектак бо довталабӣ ва дахолат кунад, ба ДНК - Rnase ба таври интихобӣ RNALES RONES, тарк кардани ДНК ва.
● Пешгирӣ кардани ифлосшавии RNA
Пешгирӣ кардани ифлосшавии Рна барои барномаҳое, ки ДНК-и покро талаб мекунанд, аҳамияти ҳалкунанда дорад, ба монанди PCC ва пайдарпай. Муносибати rnase кафолат медиҳад, ки ДНК-и ҷудогона аз ифлосони RNA озод аст.
Тозакунии ДНК
● Усулҳои ҷудо кардани ДНК аз дигар ҷузъҳои мобилӣ
Барои тоза кардани ДНК-ро якчанд усул истифода бурдан мумкин аст. Инҳо шомил мешаванд - Эътиқидаи хлориди хочаги, боришоти этол ва истифодаи тиҷоратӣ E. кулоҳҳои кН. Ҳар як усул ҷонибдори он мебошад ва аз ҷониби дастаҳои тиҷоратӣ, ки ба роҳат ва натиҷаҳои пайдарпай пешниҳод мекунад, дорад.
● Масъалаҳо барои тозагии ДНК
Покӣ омили муҳим барои муваффақияти дархостҳои поёноб мебошад. Маҷмӯаҳои тиҷоратӣ, ба монанди терапияи E. COLI DNA, барои баландии гарм кардани сафеда, липидҳо ва дигар ифлосшавон тарҳрезӣ шудаанд.
Нигоҳдорӣ ва коркарди ДНК-ҳои ҷудогона
● таҷрибаҳои беҳтарини нигоҳдории ДНК
Пас аз он, ДНК бояд дар буфери мувофиқ, ба монанди буфер ҷойгир карда шавад, дар - 20 ° C ё - 80 ° C барои нигаҳдорӣ. Нагузоред, ки яхмосҳои зуд-зудро пешгирӣ кунед
● Нигоҳ доштани бепоёни ДНК барои Барномаҳои поёноб
Барои нигоҳ доштани беаймаи ДН, хушкида, лучозед - қубурҳои ройгон ва роҳҳои ҳалли. Ин кафолат медиҳад, ки ДНК барои барномаҳо аз қабили cloning, пайдарпай, ва PCR мувофиқ аст.
Дар атрофиBlutkit
Ҷиангсу Ҳоллҷервен марказори (10,000 000 000 000 аллис, ки дар ноҳияи Wuzhong дар ноҳияи Wuzhong, Sughougn, як ду сайтҳои истеҳсолӣ дар Шензун ва Шанхай таъсис дода шудааст, ки шабакаи истеҳсоли худро дар саросари кишвар паҳн карданд. Сайти Каролинаи Шимолӣ дар ИМА ҳоло сохта шуда истодааст, минбаъд ҳузури глобалии худро паҳн мекунад. Ҳиллжене барои рушди терапияи мобилӣ, бо платформаҳои истеҳсоли кислотаи майна, хунулқудс, рушди ҷараёни пӯшида ва санҷиши QC сохта шудааст. Маҳсулоти кабудизорҳо барои назорати сифат тарҳрезӣ карда мешаванд, ки муваффақияти навовариҳои камобӣ терапияи мобилиро таъмин мекунанд.
Вақти почта: 2024 - 09 - 05 - 14:47:03
