E. కోలి నుండి DNA ను వేరుచేయడం పరమాణు జీవశాస్త్రంలో ఒక ప్రాథమిక విధానం. ఈ వ్యాసం మొత్తం ప్రక్రియ ద్వారా మిమ్మల్ని నడిపిస్తుంది, వివరణాత్మక దశలు మరియు వివరణలను అందిస్తుంది, ఇది సైన్స్ మరియు ప్రక్రియ యొక్క ఆచరణాత్మక అంశాలను రెండింటినీ అర్థం చేసుకునేలా చేస్తుంది. మీరు అనుభవజ్ఞుడైన పరిశోధకుడు లేదా ల్యాబ్‌కు కొత్తగా అయినా, ఈ గైడ్ విలువైన వనరు అవుతుంది.
సెల్ సస్పెన్షన్ తయారీ
E E. కోలి కణాల సేకరణ
E. కోలి నుండి DNA ను వేరుచేయడంలో మొదటి దశ బ్యాక్టీరియా కణాలను సేకరించడం. ఇది సాధారణంగా లాగరిథమిక్ వృద్ధి దశకు చేరుకునే వరకు తగిన ద్రవ మాధ్యమంలో E. కోలిని పెంచడం అవసరం. సమయం చాలా ముఖ్యమైనది ఎందుకంటే ఈ దశలోని కణాలు చాలా ఆచరణీయమైనవి మరియు లైస్‌కు సులభంగా ఉంటాయి, దీనివల్ల అధిక DNA దిగుబడి వస్తుంది.
Cells తగిన బఫర్‌లో కణాలను పున use ప్రారంభించడం
సేకరించిన కణాలు తగిన బఫర్‌లో తిరిగి ఇవ్వబడతాయి. ఒక సాధారణ ఎంపిక ఒక ట్రిస్ - EDTA (TE) బఫర్, ఇది వెలికితీత ప్రక్రియలో DNA యొక్క సమగ్రతను నిర్వహించడానికి సహాయపడుతుంది. బఫర్ బహుళ ప్రయోజనాలకు ఉపయోగపడుతుంది: ఇది పిహెచ్‌ను స్థిరీకరిస్తుంది, డివాలెంట్ కాటయాన్‌లను చెలేట్ చేస్తుంది, ఇది డిఎన్‌ఎను క్షీణింపజేస్తుంది మరియు తదుపరి ఎంజైమాటిక్ ప్రతిచర్యలకు సరైన అయానిక్ వాతావరణాన్ని అందిస్తుంది.
గుళికల కణాలకు సెంట్రిఫ్యూగేషన్
సెంట్రిఫ్యూగేషన్ కోసం పారామితులు (వేగం మరియు సమయం)
కణాలను తిరిగి ప్రారంభించిన తరువాత, సస్పెన్షన్ కణాలను గుళికల కోసం సెంట్రిఫ్యూగేషన్‌కు లోబడి ఉంటుంది. సెంట్రిఫ్యూగేషన్ వేగం మరియు సమయం క్లిష్టమైన పారామితులు. సాధారణంగా, సెంట్రిఫ్యూగేషన్ 4,000 - 6,000 గ్రా 10 - 15 నిమిషాలకు 4 ° C వద్ద జరుగుతుంది. కణాలు సెంట్రిఫ్యూజ్ ట్యూబ్ దిగువన గట్టి గుళికను ఏర్పరుస్తాయని ఇది నిర్ధారిస్తుంది.
సరైన గుళికల ప్రాముఖ్యత
కణాలను వృద్ధి మాధ్యమం మరియు ఇతర కరిగే భాగాల నుండి వేరు చేయడానికి సరైన గుళికల అవసరం. బావి - ఏర్పడిన గుళికల తదుపరి దశలను సులభతరం చేస్తుంది మరియు సమర్థవంతంగా చేస్తుంది, కణాల కనీస నష్టాన్ని నిర్ధారిస్తుంది మరియు అందువల్ల గరిష్ట DNA దిగుబడి ఉంటుంది.
సూపర్నాటెంట్ తొలగింపు
సూపర్నాటెంట్ తొలగింపు కోసం పద్ధతులు
కణాలు గుళికల తర్వాత, సూపర్నాటెంట్ (గుళిక పైన ఉన్న ద్రవం) కణ గుళికకు భంగం కలిగించకుండా జాగ్రత్తగా తొలగించాలి. ఇది సాధారణంగా మైక్రోపిపెట్ ఉపయోగించి జరుగుతుంది. ఏ కణాలను కోల్పోకుండా ఉండటానికి ఈ దశను సూక్ష్మంగా చేయడం చాలా ముఖ్యం.
Cell సెల్ గుళిక యొక్క కనీస నష్టాన్ని నిర్ధారించడం
సెల్ గుళిక యొక్క కనీస నష్టాన్ని నిర్ధారించడం వలన జాగ్రత్తగా పైపెటింగ్ ఉంటుంది మరియు అవసరమైతే, సెంట్రిఫ్యూగేషన్ మరియు సూపర్నాటెంట్ తొలగింపు యొక్క బహుళ రౌండ్లు ఉంటాయి. గరిష్ట DNA రికవరీ కోసం గుళికలో వీలైనన్ని కణాలను ఉంచడం లక్ష్యం.
కేంద్రక లాయిస్ ద్రావణం అదనంగా
D న్యూక్లియై లైసిస్ ద్రావణం యొక్క భాగాలు
న్యూక్లియై లైసిస్ ద్రావణంలో సాధారణంగా డిటర్జెంట్ (SDS వంటివి), బఫర్ (ట్రిస్ - HCL వంటివి) మరియు చెలాటింగ్ ఏజెంట్ (EDTA వంటివి) ఉంటాయి. డిటర్జెంట్ కణ త్వచం మరియు అణు కవరుకు అంతరాయం కలిగిస్తుంది, DNA తో సహా సెల్యులార్ విషయాలను ద్రావణంలోకి విడుదల చేస్తుంది.
Sell సెల్ గోడలను విచ్ఛిన్నం చేయడంలో పాత్ర
న్యూక్లియై లైసిస్ ద్రావణం కణ త్వచాన్ని లైసెస్ చేయడమే కాకుండా ప్రోటీన్లు మరియు లిపిడ్లను డీనాచురైజ్ చేస్తుంది, సెల్ గోడలు మరియు అణు ఎన్వలప్‌లను సమర్థవంతంగా విచ్ఛిన్నం చేస్తుంది, DNA ను ద్రావణంలోకి విడుదల చేస్తుంది.
కణాల పున usp ప్రారంభం
DNNA మకాను నివారించడానికి సున్నితమైన పైపెటింగ్
న్యూక్లియై లైసిస్ ద్రావణాన్ని జోడించిన తర్వాత, DNA మకాను నివారించడానికి కణాలను శాంతముగా తిరిగి ఇవ్వాలి. మకాం DNA ను చిన్న శకలాలుగా విచ్ఛిన్నం చేస్తుంది, ఇది అధిక - మాలిక్యులర్ - బరువు DNA అవసరమయ్యే దిగువ అనువర్తనాలకు సమస్యాత్మకంగా ఉంటుంది.
The పూర్తి పున usp స్థాపనను నిర్ధారించడం
పూర్తి పున usp ప్రారంభం అన్ని కణాలు ఏకరీతిగా లైస్ అవుతాయని నిర్ధారిస్తుంది, DNA రికవరీని పెంచుతుంది. సున్నితమైన పైపెటింగ్ లేదా తక్కువ వేగంతో ద్రావణాన్ని సుడిగుండం చేయడం ద్వారా దీనిని సాధించవచ్చు.
లైస్ కణాలకు పొదిగే
Procation పొదిగే ఉష్ణోగ్రత సెట్టింగులు
పూర్తి లైసిస్ నిర్ధారించడానికి పున usp స్థాపించబడిన కణాలు ఒక నిర్దిష్ట ఉష్ణోగ్రత వద్ద పొదిగేవి. ఇది సాధారణంగా 37 ° C నుండి 55 ° C వద్ద జరుగుతుంది. ప్రోటోకాల్ మరియు DNA ఐసోలేషన్ కిట్ యొక్క నిర్దిష్ట అవసరాలను బట్టి ఖచ్చితమైన ఉష్ణోగ్రత మరియు వ్యవధి మారవచ్చు.
Effection సమర్థవంతమైన లైసిస్ కోసం వ్యవధి అవసరం
పొదిగే సాధారణ వ్యవధి 20 నుండి 30 నిమిషాల మధ్య ఉంటుంది, అయితే సెల్ లైసిస్ యొక్క సామర్థ్యం ఆధారంగా దీనిని సర్దుబాటు చేయవచ్చు. పూర్తి లైసిస్ కోసం దీర్ఘకాలిక పొదిగే అవసరం కావచ్చు కాని DNA క్షీణత ప్రమాదానికి వ్యతిరేకంగా సమతుల్యతను కలిగి ఉండాలి.
గది ఉష్ణోగ్రతకు శీతలీకరణ
Cruc క్రమంగా శీతలీకరణ యొక్క ప్రాముఖ్యత
పొదిగిన తరువాత, లైసేట్ క్రమంగా గది ఉష్ణోగ్రతకు చల్లబడుతుంది. క్రమంగా శీతలీకరణ DNA ని స్థిరీకరించడంలో సహాయపడుతుంది మరియు థర్మల్ షాక్ ప్రమాదాన్ని తగ్గిస్తుంది, ఇది DNA ను క్షీణించగలదు.
UN DNA మరియు సెల్యులార్ శిధిలాలపై ప్రభావాలు
గది ఉష్ణోగ్రతకు శీతలీకరణ సెల్యులార్ శిధిలాలను అవక్షేపించడానికి అనుమతిస్తుంది, ఇది తరువాతి దశలలో DNA ని వేరు చేయడం సులభం చేస్తుంది. ఇది ఎంజైమ్ కార్యకలాపాలను స్థిరీకరించడానికి సహాయపడుతుంది మరియు RNase చికిత్స ద్వారా RNA ను తొలగించడానికి వీలు కల్పిస్తుంది.
RNase ద్రావణం అదనంగా
Dacistance విధానంలో RNase యొక్క ఉద్దేశ్యం
RNASE పరిష్కారం RNA ని క్షీణింపజేయడానికి జోడించబడుతుంది, లేకపోతే DNA తో శుద్ధి చేయవచ్చు మరియు దిగువ అనువర్తనాలతో జోక్యం చేసుకోవచ్చు. RNase ఎంపికగా RNA ను జీర్ణించుకుంటుంది, DNA చెక్కుచెదరకుండా ఉంటుంది.
R RNA కలుషితాన్ని నివారించడం
పిసిఆర్ మరియు సీక్వెన్సింగ్ వంటి స్వచ్ఛమైన డిఎన్‌ఎ అవసరమయ్యే అనువర్తనాలకు ఆర్‌ఎన్‌ఎ కాలుష్యాన్ని నివారించడం చాలా ముఖ్యం. RNase చికిత్స వివిక్త DNA RNA కలుషితాల నుండి ఉచితం అని నిర్ధారిస్తుంది.
DNA యొక్క శుద్దీకరణ
Old ఇతర సెల్యులార్ భాగాల నుండి DNA ని వేరుచేసే పద్ధతులు
లైసేట్ నుండి DNA ను శుద్ధి చేయడానికి అనేక పద్ధతులను ఉపయోగించవచ్చు. వీటిలో ఫినాల్ - క్లోరోఫామ్ వెలికితీత, ఇథనాల్ అవపాతం మరియు వాణిజ్య E. కోలి DNA కిట్‌లను ఉపయోగించడం. ప్రతి పద్ధతి దాని లాభాలు మరియు నష్టాలను కలిగి ఉంటుంది, వాణిజ్య వస్తు సామగ్రి సౌలభ్యం మరియు స్థిరమైన ఫలితాలను అందిస్తుంది.
D DNA స్వచ్ఛత కోసం పరిగణనలు
దిగువ అనువర్తనాల విజయానికి స్వచ్ఛత కీలకమైన అంశం. సెల్ థెరపీ E. కోలి DNA కిట్ వంటి వాణిజ్య వస్తు సామగ్రి, ప్రోటీన్లు, లిపిడ్లు మరియు ఇతర కలుషితాలను సమర్థవంతంగా తొలగించడం ద్వారా అధిక - స్వచ్ఛత DNA ను ఇవ్వడానికి రూపొందించబడింది.
వివిక్త DNA యొక్క నిల్వ మరియు నిర్వహణ
D DNA ను నిల్వ చేయడానికి ఉత్తమ పద్ధతులు
శుద్ధి చేసిన తర్వాత, DNA ను TE బఫర్ వంటి తగిన బఫర్‌లో, - 20 ° C లేదా - 80 ° C వద్ద ఎక్కువ కాలం - టర్మ్ స్టోరేజ్. తరచుగా ఫ్రీజ్ - కరిగే చక్రాలు మానుకోండి ఎందుకంటే అవి DNA క్షీణతకు కారణమవుతాయి.
The దిగువ అనువర్తనాల కోసం DNA సమగ్రతను నిర్వహించడం
DNA సమగ్రతను నిర్వహించడానికి, శుభ్రమైన, న్యూక్లిస్ - ఉచిత గొట్టాలు మరియు పరిష్కారాలను ఉపయోగించండి. క్లోనింగ్, సీక్వెన్సింగ్ మరియు పిసిఆర్ వంటి అనువర్తనాలకు డిఎన్‌ఎ అవాంఛనీయమైనది మరియు అనుకూలంగా ఉందని ఇది నిర్ధారిస్తుంది.
గురించిబ్లూకిట్
జియాంగ్సు హిల్‌జీన్ సుజౌలో తన ప్రధాన కార్యాలయాన్ని (10,000㎡ జిఎంపి ప్లాంట్లు మరియు ఆర్ అండ్ డి సెంటర్) స్థాపించింది, ఇది వూజోంగ్ జిల్లాలో ఉంది, అందమైన తైహు సరస్సు యొక్క లేక్‌షోర్ నగరం సుజౌ, మరియు షెన్‌జెన్ మరియు షాంఘైలోని రెండు తయారీ ప్రదేశాలు, దాని తయారీ నెట్‌వర్క్‌ను దేశవ్యాప్తంగా విస్తరించింది. యుఎస్‌లోని నార్త్ కరోలినా సైట్ ప్రస్తుతం నిర్మాణంలో ఉంది, దాని ప్రపంచ ఉనికిని మరింత విస్తరించింది. డిస్కవరీ నుండి డెలివరీ వరకు, న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ తయారీ, సీరం - ఉచిత సస్పెన్షన్ కల్చరింగ్, క్లోజ్డ్ ప్రాసెస్ డెవలప్‌మెంట్ మరియు క్యూసి పరీక్షలతో సెల్యులార్ థెరపీ ఉత్పత్తులను అభివృద్ధి చేయడానికి హిల్‌జీన్ ఒక ఎక్స్‌ప్రెస్ మార్గాన్ని నిర్మించింది. బ్లూకిట్ ఉత్పత్తులు నాణ్యత నియంత్రణ కోసం రూపొందించబడ్డాయి, సెల్యులార్ థెరపీ ఆవిష్కరణల విజయాన్ని నిర్ధారిస్తాయి.
పోస్ట్ సమయం: 2024 - 09 - 05 14:47:03
