ஈ.கோலியிடமிருந்து டி.என்.ஏவை தனிமைப்படுத்துவது மூலக்கூறு உயிரியலில் ஒரு அடிப்படை செயல்முறையாகும். இந்த கட்டுரை முழு செயல்முறையிலும் உங்களை அழைத்துச் செல்லும், விரிவான படிகளையும் விளக்கங்களையும் வழங்கும், விஞ்ஞானம் மற்றும் நடைமுறையின் நடைமுறை அம்சங்களை நீங்கள் புரிந்துகொள்வதை உறுதி செய்யும். நீங்கள் ஒரு அனுபவமுள்ள ஆராய்ச்சியாளராக இருந்தாலும் அல்லது ஆய்வகத்திற்கு புதியவராக இருந்தாலும், இந்த வழிகாட்டி ஒரு மதிப்புமிக்க வளமாக இருக்கும்.
செல் இடைநீக்கம் தயாரித்தல்
E. ஈ.கோலை கலங்களின் தொகுப்பு
ஈ.கோலியில் இருந்து டி.என்.ஏவை தனிமைப்படுத்துவதற்கான முதல் படி பாக்டீரியா செல்களை சேகரிப்பதை உள்ளடக்குகிறது. இதற்கு வழக்கமாக மடக்கை வளர்ச்சி கட்டத்தை அடையும் வரை பொருத்தமான திரவ ஊடகத்தில் வளர்ந்து வரும் ஈ.கோலை தேவைப்படுகிறது. நேரம் முக்கியமானது, ஏனெனில் இந்த கட்டத்தில் உள்ள செல்கள் மிகவும் சாத்தியமானவை மற்றும் லைஸ் செய்ய எளிதானவை, இதன் விளைவாக அதிக டி.என்.ஏ மகசூல் ஏற்படும்.
Active பொருத்தமான இடையகத்தில் செல்களை மீண்டும் இணைத்தல்
சேகரிக்கப்பட்ட செல்கள் பின்னர் பொருத்தமான இடையகத்தில் மீண்டும் இணைக்கப்படுகின்றன. ஒரு பொதுவான தேர்வு ஒரு TRIS - EDTA (TE) இடையகமாகும், இது பிரித்தெடுக்கும் செயல்பாட்டின் போது டி.என்.ஏவின் ஒருமைப்பாட்டை பராமரிக்க உதவுகிறது. இடையக பல நோக்கங்களுக்காக உதவுகிறது: இது PH ஐ உறுதிப்படுத்துகிறது, டி.என்.ஏவை சிதைக்கக்கூடிய மாறுபட்ட கேஷன்களை செல்கிறது, மேலும் அடுத்தடுத்த நொதி எதிர்வினைகளுக்கு உகந்த அயனி சூழலை வழங்குகிறது.
பெல்லட் கலங்களுக்கு மையவிலக்கு
Conter மையவிலக்குக்கான அளவுருக்கள் (வேகம் மற்றும் நேரம்)
கலங்களை மீண்டும் இணைத்த பிறகு, இடைநீக்கம் உயிரணுக்களைக் கட்டுவதற்கு மையவிலக்கத்திற்கு உட்படுத்தப்படுகிறது. மையவிலக்கு வேகம் மற்றும் நேரம் முக்கியமான அளவுருக்கள். பொதுவாக, மையவிலக்கு சுமார் 4,000 - 6,000 கிராம் 10 - 15 நிமிடங்களுக்கு 4 ° C க்கு செய்யப்படுகிறது. மையவிலக்கு குழாயின் அடிப்பகுதியில் செல்கள் ஒரு இறுக்கமான துகள்களை உருவாக்குவதை இது உறுதி செய்கிறது.
Atter சரியான துகள்களின் முக்கியத்துவம்
உயிரணுக்களை வளர்ச்சி ஊடகம் மற்றும் பிற கரையக்கூடிய கூறுகளிலிருந்து பிரிக்க சரியான துகள்கள் அவசியம். ஒரு கிணறு - உருவாக்கப்பட்ட துகள்கள் அடுத்தடுத்த படிகளை எளிதாகவும் திறமையாகவும் ஆக்குகின்றன, மேலும் உயிரணுக்களின் குறைந்தபட்ச இழப்பை உறுதி செய்கின்றன, எனவே அதிகபட்ச டி.என்.ஏ மகசூல்.
சூப்பர்நேட்டண்ட் அகற்றுதல்
The சூப்பர்நேட்டண்ட் அகற்றுவதற்கான நுட்பங்கள்
செல்கள் துளையிடப்பட்டவுடன், சூப்பர்நேட்டண்ட் (துகள்களுக்கு மேலே உள்ள திரவம்) செல் துகள்களை தொந்தரவு செய்யாமல் கவனமாக அகற்றப்பட வேண்டும். இது பொதுவாக மைக்ரோபிபெட்டைப் பயன்படுத்தி செய்யப்படுகிறது. எந்தவொரு உயிரணுக்களையும் இழப்பதைத் தவிர்ப்பதற்காக இந்த நடவடிக்கையை மிகச்சிறப்பாகச் செய்வது முக்கியம்.
Cell செல் துகள்களின் குறைந்தபட்ச இழப்பை உறுதி செய்தல்
செல் துகள்களின் குறைந்தபட்ச இழப்பை உறுதி செய்வது கவனமாக குழாய் பதித்தல் மற்றும் தேவைப்பட்டால், பல சுற்று மையவிலக்கு மற்றும் சூப்பர்நேட்டண்ட் அகற்றுதல் ஆகியவை அடங்கும். அதிகபட்ச டி.என்.ஏ மீட்புக்காக துகள்களில் முடிந்தவரை பல செல்களை வைத்திருப்பதே குறிக்கோள்.
கருக்கள் லிசிஸ் கரைசலைச் சேர்ப்பது
Cum கருக்கள் லிசிஸ் கரைசலின் கூறுகள்
கருக்கள் லிசிஸ் கரைசலில் பொதுவாக ஒரு சோப்பு (எஸ்.டி.எஸ் போன்றவை), ஒரு இடையகம் (ட்ரிஸ் - எச்.சி.எல் போன்றவை) மற்றும் ஒரு செலாட்டிங் முகவர் (ஈடிடிஏ போன்றவை) உள்ளன. சவர்க்காரம் செல் சவ்வு மற்றும் அணு உறை ஆகியவற்றை சீர்குலைக்கிறது, டி.என்.ஏ உள்ளிட்ட செல்லுலார் உள்ளடக்கங்களை கரைசலில் வெளியிடுகிறது.
Cell செல் சுவர்களை உடைப்பதில் பங்கு
கருக்கள் லிசிஸ் கரைசல் உயிரணு சவ்வை ஏற்றிச் செல்வது மட்டுமல்லாமல், புரதங்கள் மற்றும் லிப்பிட்களையும் மறுக்கிறது, செல் சுவர்கள் மற்றும் அணு உறைகளை திறம்பட உடைத்து டி.என்.ஏவை கரைசலில் வெளியிடுகிறது.
கலங்களின் மறுசீரமைப்பு
T டி.என்.ஏ வெட்டுவதைத் தவிர்க்க மென்மையான குழாய்
கருக்கள் லிசிஸ் கரைசல் சேர்க்கப்பட்டதும், டி.என்.ஏ வெட்டுவதைத் தவிர்க்க செல்கள் மெதுவாக மீண்டும் இணைக்கப்பட வேண்டும். வெட்டுதல் டி.என்.ஏவை சிறிய துண்டுகளாக உடைக்கக்கூடும், இது உயர் - மூலக்கூறு - எடை டி.என்.ஏ தேவைப்படும் கீழ்நிலை பயன்பாடுகளுக்கு சிக்கலாக இருக்கும்.
Precess முழுமையான மறுசீரமைப்பை உறுதி செய்தல்
முழுமையான மறுசீரமைப்பு அனைத்து உயிரணுக்களும் ஒரே மாதிரியாக லைஸ் செய்யப்படுவதை உறுதி செய்கிறது, இது டி.என்.ஏ மீட்பை அதிகரிக்கிறது. குறைந்த வேகத்தில் கரைசலை மென்மையான குழாய் அல்லது சுழல் மூலம் இதை அடைய முடியும்.
லைஸ் கலங்களுக்கு அடைகாக்கும்
அடைகாக்கும் வெப்பநிலை அமைப்புகள்
முழுமையான சிதைவை உறுதிப்படுத்த மீண்டும் இணைக்கப்பட்ட செல்கள் ஒரு குறிப்பிட்ட வெப்பநிலையில் அடைக்கப்பட்டுள்ளன. இது வழக்கமாக 37 ° C முதல் 55 ° C வரை செய்யப்படுகிறது. நெறிமுறை மற்றும் டி.என்.ஏ தனிமைப்படுத்தும் கருவியின் குறிப்பிட்ட தேவைகளைப் பொறுத்து சரியான வெப்பநிலை மற்றும் காலம் மாறுபடும்.
Lase பயனுள்ள லிசிஸுக்கு தேவையான காலம்
அடைகாக்கும் வழக்கமான காலம் 20 முதல் 30 நிமிடங்கள் வரை இருக்கும், ஆனால் காணப்பட்ட செல் லிசிஸின் செயல்திறனின் அடிப்படையில் இதை சரிசெய்ய முடியும். முழுமையான சிதைவுக்கு நீடித்த அடைகாக்குதல் தேவைப்படலாம், ஆனால் டி.என்.ஏ சீரழிவின் அபாயத்திற்கு எதிராக சமப்படுத்தப்பட வேண்டும்.
அறை வெப்பநிலைக்கு குளிரூட்டல்
Strage படிப்படியான குளிரூட்டலின் முக்கியத்துவம்
அடைகாத்த பிறகு, லைசேட் படிப்படியாக அறை வெப்பநிலைக்கு குளிரூட்டப்படுகிறது. படிப்படியாக குளிரூட்டல் டி.என்.ஏவை உறுதிப்படுத்த உதவுகிறது மற்றும் வெப்ப அதிர்ச்சியின் அபாயத்தைக் குறைக்கிறது, இது டி.என்.ஏவை சிதைக்கக்கூடும்.
T டி.என்.ஏ மற்றும் செல்லுலார் குப்பைகளில் விளைவுகள்
அறை வெப்பநிலைக்கு குளிரூட்டல் செல்லுலார் குப்பைகளை துரிதப்படுத்த அனுமதிக்கிறது, இதனால் டி.என்.ஏவை அடுத்தடுத்த படிகளில் பிரிப்பதை எளிதாக்குகிறது. இது நொதி நடவடிக்கைகளை உறுதிப்படுத்தவும் உதவுகிறது மற்றும் ஆர்.என்.ஏ.எஸ் சிகிச்சையால் ஆர்.என்.ஏவை அகற்ற உதவுகிறது.
Rnase தீர்வைச் சேர்ப்பது
The நடைமுறையில் RNASE இன் நோக்கம்
ஆர்.என்.ஏவை சீர்குலைக்க ஆர்னேஸ் தீர்வு சேர்க்கப்படுகிறது, இல்லையெனில் டி.என்.ஏ உடன் சுத்திகரிக்கலாம் மற்றும் கீழ்நிலை பயன்பாடுகளில் தலையிடலாம். RNase தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட ஆர்.என்.ஏவை ஜீரணிக்கிறது, டி.என்.ஏவை அப்படியே விட்டுவிடுகிறது.
R ஆர்.என்.ஏ மாசுபாட்டைத் தடுக்கும்
பி.சி.ஆர் மற்றும் வரிசைமுறை போன்ற தூய டி.என்.ஏ தேவைப்படும் பயன்பாடுகளுக்கு ஆர்.என்.ஏ மாசுபடுவதைத் தடுப்பது மிக முக்கியம். தனிமைப்படுத்தப்பட்ட டி.என்.ஏ ஆர்.என்.ஏ அசுத்தங்களிலிருந்து விடுபடுவதை RNASE சிகிச்சை உறுதி செய்கிறது.
டி.என்.ஏவின் சுத்திகரிப்பு
Cell பிற செல்லுலார் கூறுகளிலிருந்து டி.என்.ஏவை பிரிப்பதற்கான முறைகள்
லைசேட்டிலிருந்து டி.என்.ஏவை சுத்திகரிக்க பல முறைகள் பயன்படுத்தப்படலாம். பினோல் - குளோரோஃபார்ம் பிரித்தெடுத்தல், எத்தனால் மழைப்பொழிவு மற்றும் வணிக ஈ.கோலை டி.என்.ஏ கருவிகளைப் பயன்படுத்துதல் ஆகியவை இதில் அடங்கும். ஒவ்வொரு முறைக்கும் அதன் நன்மை தீமைகள் உள்ளன, வணிக கருவிகள் வசதி மற்றும் நிலையான முடிவுகளை வழங்குகின்றன.
D டி.என்.ஏ தூய்மைக்கான பரிசீலனைகள்
கீழ்நிலை பயன்பாடுகளின் வெற்றிக்கு தூய்மை ஒரு முக்கியமான காரணியாகும். செல் சிகிச்சை ஈ.கோலை டி.என்.ஏ கிட் போன்ற வணிக கருவிகள், புரதங்கள், லிப்பிடுகள் மற்றும் பிற அசுத்தங்களை திறம்பட அகற்றுவதன் மூலம் உயர் - தூய்மை டி.என்.ஏவைக் கொடுக்க வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளன.
தனிமைப்படுத்தப்பட்ட டி.என்.ஏவின் சேமிப்பு மற்றும் கையாளுதல்
D டி.என்.ஏவை சேமிப்பதற்கான சிறந்த நடைமுறைகள்
சுத்திகரிக்கப்பட்டதும், டி.என்.ஏவை டி பஃபர் போன்ற பொருத்தமான இடையகத்தில், - 20 ° C அல்லது - 80 ° C நீண்ட - கால சேமிப்பகத்திற்கு சேமிக்க வேண்டும். அடிக்கடி முடக்கம் தவிர்க்கவும் - தாவல் சுழற்சிகள் டி.என்.ஏ சீரழிவை ஏற்படுத்தும் என்பதால் அவை.
Town கீழ்நிலை பயன்பாடுகளுக்கான டி.என்.ஏ ஒருமைப்பாட்டை பராமரித்தல்
டி.என்.ஏ ஒருமைப்பாட்டை பராமரிக்க, மலட்டு, நியூக்லீஸ் - இலவச குழாய்கள் மற்றும் தீர்வுகளைப் பயன்படுத்தவும். இது டி.என்.ஏ கட்டுப்பாடற்றதாக இருப்பதை உறுதி செய்கிறது மற்றும் குளோனிங், வரிசைமுறை மற்றும் பி.சி.ஆர் போன்ற பயன்பாடுகளுக்கு ஏற்றது.
பற்றிபுளூக்கிட்
ஜியாங்சு ஹில்ஜீன் தனது தலைமையகத்தை (10,000㎡ ஜி.எம்.பி ஆலைகள் மற்றும் ஆர் அண்ட் டி மையம்) சுஜோவில் நிறுவியது, வுஜோங் மாவட்டத்தில் அமைந்துள்ள சுஜோ, அழகான தைஹு ஏரியின் லேக்ஷோர் நகரம் மற்றும் ஷென்சென் மற்றும் ஷாங்காயில் இரண்டு உற்பத்தி தளங்கள், அதன் உற்பத்தி நெட்வொர்க்கை நாடு முழுவதும் விரிவுபடுத்தின. அமெரிக்காவின் வட கரோலினா தளம் தற்போது கட்டுமானத்தில் உள்ளது, மேலும் அதன் உலகளாவிய இருப்பை மேலும் பரப்புகிறது. நியூக்ளிக் அமில உற்பத்தி, சீரம் - இலவச இடைநீக்க வளர்ப்பு, மூடிய செயல்முறை மேம்பாடு மற்றும் கியூசி சோதனை ஆகியவற்றுடன், கண்டுபிடிப்பு முதல் டெலிவரி வரை செல்லுலார் சிகிச்சை தயாரிப்புகளை உருவாக்குவதற்கான ஒரு வெளிப்படையான பாதையை ஹில்ஜீன் உருவாக்கியுள்ளது. புளூக்கிட் தயாரிப்புகள் தரக் கட்டுப்பாட்டுக்காக வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளன, இது செல்லுலார் சிகிச்சை கண்டுபிடிப்புகளின் வெற்றியை உறுதி செய்கிறது.
இடுகை நேரம்: 2024 - 09 - 05 14:47:03
