Golinging DNA tina E. coli mangrupikeun prosedur peramatan dina biologi molekular. Artikel ieu bakal jalan anjeun dina hiji dumasar sababaraha prosés, ngajing léngkah-léngkah anu rinci anu langkung rinci, mastikeun Anjeun ngartos élmu sareng aspék prakték prosedur. Naha anjeun panaliti usum atanapi palayanan ka laboratorium, pituduh ieu bakal janten sumber anu berharga.
Persiapan gantung sél
● kumpulan sél E. coli
Léngkah munggaranna dina ngawas DNA ti E. coli ngalegol sél baktéri. Ieu biasana ngembang E. Coli dina sedeng cair anu cocog dugi ka fase kompariti logaritmic. Pungkasan si palupusan kumargi sél dina fase ieu sépelida sareng gampang pisan, anu bakal nyababkeun ngahasilkeun DNA langkung luhur.
● sél resuspending dina panyangga anu luyu
Sél anu dikumpulkeun teras diperpanjang dina panyangga anu cocog. H pilihan anu umum mangrupikeun tris - édta (li) panyangga, anu ngabantosan ngajaga integritas DNA dina prosés ékstraksi. Mufer pikeun sababaraha tujuan: éta stabil pH, ngagentos kaleresan anu sengit anu tiasa DAGR teras Duh Dék sateuacana.
Centrifugasi kana sél pelet
● Parameter pikeun centrifugation (laju sareng waktos)
Saatos resuspendus Sél, gurosa ieu aya dialukkeun ka amprok sél. Kecepatan sareng waktos sétri. Ilaharna, sentrifugation parantos dilakukeun sakitar 4,000 - 6,000 g kanggo 10 - 15 menit dina 4 ° C. Ieu mastikeun yén sél ngabentuk pelet anu ketat di handapeun tabung palirifuge.
● Pentingna pelet
Pelleting anu leres penting pikeun misahkeun sél tina méodeu kamekaran sareng komponén larar sanés. Hiji saé - pelet anu ngawangun damel langkung saé langkung gampang sareng épéktentient, ngalahtikeun tulang médimitas sareng, ogé, DNA Mekambung.
Ngaleupaskeun supernatant
● Téhnik pikeun ngaleupaskeun supernatant
Sakali sél dileulkeun, supernatant (cairan di luhur palet) kedah dipiceun sacara saksama tanpa ngaganggu pelet sél. Ieu biasana dilakukeun nganggo micropipte. Éta penting pikeun ngalakukeun léngkah ieu sacara écés pikeun ngindarkeun sél sél.
● Ngaleungitkeun kaleungitan minimal pelet sél
Ngeras turun leungitna minimal tina pelet sél bakal kéngingkeun pipet anu ati-ati sareng, upami aranjeunna sering, langkung bunderan sentrifugasi sareng ngaleupaskeun supaya. Tujuanana pikeun ngajaga seueur sél anu jéntré dina pelet pikeun pulih DNA maksimum.
Tambihan solusi Latika inti
● Komponén solusi inti inti inti
Solusi LIGI Essis biasana ngandung cuci (sapertos SDS), panyangga (sapertos tris - HCH), sareng agén Chelates (sapertos EDTA). Tiétna nyababkeun membran sél sareng amplop nimbany, ngaleupaskeun eusi sélulér, kalebet DNA, kana solusi, kana solusi.
● peran dina pegat témbok sél
Solusi lips sanésna sanés ngan ukur ngiringan membran sél jero tapi ogé nolak protein sareng lipid, épéktules pikeun ngaleupaskeun DNP.
Resuspensi sél
● Pipeting hipu pikeun nyingkahan DNA
Sakali solusi elysistis nukly tambah, sél kedah resenttipel lemes pikeun nyingkahan DNA anu nyéépkeun DNA. SHAREING tiasa ngarobih dakap kana windows anu langkung alit, anu tiasa janten dipercaya pikeun aplikasi hileum anu butuh luhur - Beurat Rna.
● Entruksing resuspensi lengkep
Resuspensi lengkep mastikeun yén sadaya sél anu dipisahkeun seragam, maksimalkeun pulih DNA. Ieu tiasa dihontal ku pipét hipu atanapi vortexing solusi dina laju rendah.
Inkubasi ka sél LYSE
● Setélan suhu pikeun inkubasi
Sél resuspended diaduk dina suhu anu khusus pikeun mastikeun litsics lengkep. Ieu biasana dilakukeun dina 37 ° C ka 55 ° C. Kainal pasti sareng duration tiasa béntv gumantung kana protokol sareng syarat khusus pikeun klolik DNA anu dianggo.
● Durasi diperyogikeun pikeun luyu
Digasi biasana kusabab inkubasi nyaéta antara 20 30 30 menit, tapi éta tiasa dialédakeun dumasar kana efisiensi abisis sélisén dititel. Insidasi berkepanjangan tiasa dipikabutuh pikeun ayat lengkep tapi kedah saimbang ngalawan résiko degradasi DNA.
Panyekel ka suhu kamar
● Pentingna pendinginan
Saatos inkubasi, pinjuh laun laun angkat ka suhu kamar. Kacamaian Chréstruminasi ngabantuan dina Pruninizing DNA sareng nyairim résiko kejutan téras, anu tiasa ngahapus DNA.
● épék dina lebu DNA
Pamias panutup ka suhu mista lebu sélulér kanggo prasar, sahingga langkung gampang misahkeun DNA dina léngkah anu salajengna. Ieu ogé ngabantuan pikeun nyieun kagiatan kagiatan énzim sareng ngabahaya panyabutan RNA ku perlakuan rnase.
Tambihan solusi rnase
● Tujuan Rnase dina prosedur
Solusi rnase diperhambahkeun pikeun Daur Rna, anu disebatkeun CO - Ngahubarkeun sareng DNA sareng ngaganggu Dultende. Ramrase sacara seluceur nyampur rna, ninggalkeun DNA Morac.
● Nyegah kontaminasi rantal
Nyambah kontaminasi rék penting pikeun aplikasi anu meryogikeun DNA murni, sapertos PCC sareng sekuen. Perawatan rnase mastikeun yén DNA anu diasingkeun ti Remina.
Purifikasi DNA
● Métode pikeun misahkeun DNA ti komponén sélulér sanés
Sababaraha metode tiasa dianggo pikeun ngabersihan DNA ti Lied. Ieu kalebet fenol - ekstraksi kloroform, étanol dasar Amalol, sareng nganggo komérsial E. Coli DNA. Unggal metoda gaduh paruareun na sam teu, sareng Kaler komérsial nawiskeun genah sareng hasil konsent.
● Pertimbangan pikeun debuan DNA
Kekenan mangrupikeun faktor kritis pikeun kasuksésan aplikasi hilir. Kits veriferial, sapertos terapi sél E. Coli, dirancang pikeun ngahasilkeun tinteur - DNAsir Disimpen protéfékték protéféktly.
Panyimpen sareng nanganan dna terasing
● Prakték pangsaéna pikeun nyimpen DNA
Sakali dimurnikeun, DNA kedah disimpen dina panyangga anu cocog, sapertos huntu panyangga, dina - 20 ° C atanapi - 30 ° C. - Panyimpen. Hindarkeun hardeze anu sering - siklus anu tiasa nyababkeun degradasi DNA.
● Ngajaga integritas DNA pikeun aplikasi hilir
Pikeun ngajaga integritas DNA, nganggo steril, nukloce - tabung gratis sareng solusi. Ieu mastikeun yén DM na tetep henteu dipercaya sareng cocog pikeun aplikasi sapertos kloning, bercahangan, sareng PCC.
Kira-kiraWaykit
Jiangsu Hirgeten ngadegkeun Markas (10,000 sérem GMP sareng Pusat R & D Cent) di Suzhou, anu aya di Disebuk Wuihore, ngajanjian jaringan Wuihue. Situs Ropolina kalér di Amérika ayeuna di Amérika ayeuna lumangsung di konstruksi, salajengna nyebarkeun ayana global nya. Helungine parantos ngawangun jalur ekspres pikeun ngembangkeun produk terturna semat, tina penemuan pikeun pangiriman asam asam zim - sareng pangwangunan Umum. Produk Bebkit dirancang pikeun dikeluaran kualitas, mastikeun kasuksésan inovasi thing katilu.
Waktu Pasang: 2024 - 09 - 05 14:07:03
