Ho khetholla DNA ho tloha E. Coli ke mokhoa oa bohlokoa ka har'a biolocular biology. Sengoliloeng sena se tla ho uena ka ts'ebetso eohle, se fana ka mehato le lintlha tse qaqileng, ke netefatsa hore o utloisisa mahlale le likarolo tse sebetsang tsa ts'ebetso. Hore na u mofuputsi ea khethiloeng kapa u se mocha ho lab, tataiso ena e tla ba mohloli oa bohlokoa.
Ho hlophisoa ha ho emisoa ka seleng
● Ho bokella lisele tsa E. Coli
Bohato ba pele ba ho khetholla DNA ho tsoa ho E. Ho kenyelletsa ho bokella lisele tsa baktheria. Hangata hona ho hloka hore e mele ea E. coli ka mokelikeli o loketseng oa metsi ho fihlela e fihla mohato oa kholo ea lorrithmic. Nako ea bohlokoa hobane lisele tse ka sehloohong sena li na le tšusumetso e matla ebile ho tla ba bonolo ho Lhatsa.
● Lisele tse katiloeng ka buffer e loketseng
Lisele tse bokelloang li hlophisitsoe bocha buffer e loketseng. Khetho e tloaelehileng ke tris - Edta (Te) Buffer, e thusang ho boloka botšepehi ba DNA nakong ea tlhahiso ea DNA. Buffer e sebetsa merero e mengata: E tiisa pH, e chela PH, 'me e fana ka tikoloho e nepahetseng bakeng sa karabelo e sa tloaelehang bakeng sa boits'oaro bo latelang bakeng sa karabelo e tlang e latelang bakeng sa karabelo e tlang e latelang bakeng sa karabelo e tlang e latelang bakeng sa karabelo e tlang e tlang.
Centrifugation ho lisele tsa pellet
● Lirapa tsa ho makala (lebelo le nako)
Ka mor'a ho qala lisele, ho emisoa ho ka baloa ka sesupo sa ho petetsa lisele. Ho potlakela lebelo le nako ho na le likarolo tse tebileng. Ka tloaelo, centifuzig e etsoa ho 4,000 - 6,000 g bakeng sa 10 - metsotso e 15 ka 4 ° C. Sena se tiisa hore lisele li theha pellet e thata ka tlase ho tube ea centrisugue.
● Bohlokoa ba pelletso e nepahetseng
Ho ipeha hantle ho bohlokoa ho arola lisele tse tsoang ho kholo le tse ling tse tsitsitseng. Seliko sa Pellet se etsa hore mehato e latelang e be bonolo ebile e sebetsa hantle haholo, e na le tahlehelo e nyane ea lisele, ka hona, ho lahleheloa hanyane ka lisele.
Ho tlosoa hoa matla a matla
● Mekhahlelo ea ho tlosa lintho tse matlafatsang
Hang ha lisele li ntse li phahamisoa, li-supenatant (mokelikeli o kaholimo ho pellet) o tlameha ho tlosoa ka hloko ntle le ho senya seleng. Hangata sena se etsoa ka micropipette. Ho bohlokoa ho etsa boitlamo bona ka hloko ho qoba ho lahleheloa ke lisele.
● Ho netefatsa tahlehelo e nyane ea sele ea selepeit
Ho netefatsa ho lahleheloa hanyane ka ho lahleheloa ke sekholo, ho hloka phoso ka hloko 'me, haeba ho hlokahala, mabokoseng a mangata a makole. Morero ke ho boloka liseleng tse ngata kamoo ho ka khonehang Pellet bakeng sa ho hlaphoheloa ho phahameng.
Kenyelletso ea tharollo ea Nuclei Lysis
● Likarolo tsa tharollo ea Nuclei Lysis
Tharollo ea Nuclei Ka tloaelo e na le sesepa (joalo ka SDS), buffer (joalo ka TRIS - HCL), joalo ka Edta). Seteishene se senya enfelopo le envelope ea nyutlelie, sa nyutlelie, li lokolla likarolong tse kholo, ho kopanyelletsa le DNA, ka tharollo.
● Karolo ea ho nyenyefatsa mabota a lisele
Tharollo ea Nuclei Tharollo ha e hlepse membrane ea membrane empa e boetse e kopanya liprotheine le enjute ea nyutlelie ho lokolla DNA ka tharollo.
Ho nchafatsa lisele
● Phopo e bonolo ea ho qoba DNA e apereng
Hang ha tharollo ea Nuclei Lysis e ekelitsoe, lisele li hloka ho pepesetsoa ka bonolo ho qoba DNA. Ho kuta ho ka senya dna ka mathata a fokolang, a ka bang le mathata bakeng sa lits'ebetso tse tlase tse hlokang ho phahama - limolek'hule - boima ba DNA.
● Ho netefatsa tšebeliso e felletseng
Phokotso e felletseng e tiisa hore kaofela lisele tsohle ke litlolo tse sa rateheng, li eketsa polliso ea DNA. Sena se ka fumaneha ke pipetting e bonolo kapa e lelekisa tharollo ka lebelo le tlase.
Incubation ho lisele tsa Lyse
● Litlhophiso tsa mocheso tsa incubation
Lisele tse lebelo li kenngoa ka mocheso o itseng ho netefatsa lipina tse felletseng. Hangata sena se etsoa ho 37 ° C ho la 55 ° C. Mofuthu le nako e ngata le nako li ka fapana ho latela protocol le litlhokahalo tse khethehileng tsa ho ipehatsoa ke ho sebelisoa.
● Nako e hlokoa bakeng sa LYSIS e sebetsang
Nako e tloaelehileng ea ho kenella ho pakeng tsa metsotso e 20 ho isa ho e 30, empa e ka fetoloa ho latela mahlakore a Cell Lysis ea Seli e laetse. Ho ka hlokahala nako e telele bakeng sa Lysis e felletseng empa e lokela ho ba tekano khahlanong le kotsi ea kotsi ea DNA.
Ho futhumatsa mocheso oa kamore
● Bohlokoa ba ho futhumatsa butle
Kamora ho kenella, Lysate butle butle e kholoe ka mocheso oa kamore. Ho futhumatsa butle butle ho thusa ho tsitsisa DNA le ho fokotsa kotsi ea ho makala a futhumatsang, e ka fokolisang DNA.
● Litlamorao ho DNA le maloanlahla a cellular
Ho futhumatsa mocheso oa kamore ho lumella maloanlahla a ho e sebelisa, ho nolofalletsa ho arola DNA ka mehato e latelang. Sena se boetse se thusa ho tsitsisa mesebetsi ea enzyme le ho nolofalletsa ho tlosoa ha rnase ka ho phekola kalafo.
Kenyelletso ea tharollo ea rnase tharollo
● Morero oa ho etsa joalo ka ts'ebetso
Rnase tharollo e eketsoa ho nyenyefatsa rna, e leng ho bona ho ka itlhoekisa ka DNA le ho kena-kenana le lits'ebetso tse tlase. Rnase e na le lijana tse ngata tse ikhethileng RNA, 'me a siea DNA o tsitsitse.
● Ho thibela tšoaetso ea Rna
Ho thibela tšoaetso ea Rna ho bohlokoa bakeng sa lits'ebeliso e hlokang DNA e hloekileng ea PRNA e joalo ka PCR le tatellano. Phekolo ea Rnase e tiisa hore DNA e ikemetseng e lokolohile ho RNA DILLININ.
Tlhoekiso ea DNA
● Mekhoa ea ho arola DNA ho tsoa mehatong e meng ea cellular.
Ho ka sebelisoa mekhoa e mengata ho itlhoekisa DNA ho tloha lysate. Tsena li kenyelletsa Phenol - Chloroforctions, pula ea ETOLL, le ho sebelisa khoebo DNAIs. Mokhoa o mong le o mong o na le melemo ea eona le litaba, ka li-kits tsa khoebo le litholoana tse sa fetong.
● Ho nahanisisa ka bohloeki ba Dna
Ho hloeka ke ntho e bohlokoa bakeng sa katleho ea lits'ebetso tsa theko ea theko e tlase. Liea tsa khoebo, joalo ka thello ea lisele E. Coli DNA KIT, li etselitsoe ho beha liprotheine tse phahameng haholo - DNAL ea Puity
Boloka le ho sebetsana le DNA e ikhethileng
● Mekhoa e metle ea ho boloka DNA
Ha nako e ntse e hloekisitsoe, DNA e lokela ho bolokoa ka buffer e loketseng, joalo ka la Buffer, ho - 20 ° C kapa - 80 ° C Ho Loile. Qoba khafetsa mahala mahala
● Ho lula a le botsitso a DNA bakeng sa lits'ebetso tse theohileng
Ho boloka botšepehi ba DNA, sebelisa sterile, nyutlelie - Litharollo tsa mahala le Tharollo. Sena se tiisa hore DNA e lula e sa silafaloa ebile e loketse lits'ebetso tse kang ho koaloa, tse latellanang le PCR.
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Jiangsu Hintagene e thehile ntlo-kholo ea eona (lijalo tsa 10,000,000 tsa GFM Sebaka sa North Minona Amerika joale se ntse se hahuoa, se jala le ho feta lefatše. Hillgene e hahile tsela e bonts'ang ea lihlahisoa tsa kalafo ea celpy, serum - NTLE EA LITLHAKISO TSA BOPHELO. Lihlahisoa tsa Bluekit li etselitsoe taolo ea boleng, e netefatsa katleho ea phekolo ea forelyupy.
Nako ea poso: 2024 - 09 - 05 14:47:03
