Ka goynta DNA ee E. Coli waa hab aasaasi ah aasaasi ah bayoolaji molikalanta. Qodobkaani wuxuu kugu lugeynayaa geedi socodka oo dhan, oo bixiya tillaabooyin faahfaahsan iyo sharraxaad, hubinta inaad fahanto sayniska iyo dhinacyada wax ku oolka ah ee nidaamka. Haddii aad tahay cilmi-baare xilliyeed ama ku cusub sheybaarka, hagahan wuxuu noqon doonaa ilo qiimo leh.
Diyaarinta ka joojinta qolka
Ururinta unugyada E. Coli
Tallaabada ugu horreysa ee gooni uga goynta DNA ee E. Coli waxaa ku jira ururinta unugyada bakteeriyada. Tani waxay badanaa u baahan tahay koritaanka E. Coli oo ku habboon dareere ku habboon oo dareere ah ilaa uu ka gaarayo wejiga kobaca logarithmicm. Waqtiga ayaa muhiim u ah maxaa yeelay unugyada wejigan ayaa ah kuwa ugu macquulsan uguna sahlan yihiin Lyse, oo sababi doonta dhalidda sare ee DNA.
● dib-u-soo-nooleynta unugyada ku habboon
Unugyada la soo ururiyey ayaa markaa dib loogu soo celiyaa wax lagu dhejiyo ku habboon. Xulashada guud waa TRIS - Edta (TE) Buffer, kaas oo ka caawiya joogtaynta sharafta ee DNA-da inta lagu gudajiro habka soo saarista. Xaraashka ayaa u adeega ujeeddooyin badan: Waxay dejisaa PH, waxay ka dhigeysaa wax aan qosli karin oo ay ku dhex degi karto DNA-da, waxayna siisaa jawi aan fiicnayn oo loogu talagalay falcelinta enzymatic ee xiga.
Centrifutation si ay u hesho unugyada pellet
● Cabirrada loo yaqaan 'centrifulution' (xawaaraha iyo waqtiga)
Ka dib markii dib loo soo celiyo unugyada, hakinta waxaa lagu soo rogay si loo dhajiyo unugyada loo yaqaan 'pellut' unugyada. Xawaaraha adag iyo waqtiga waa halbeegyo muhiim ah. Caadi ahaan, centrifeed waxaa lagu sameeyaa ku dhawaad 4,000 - 6,000 g for 10 - 15 daqiiqo gudahood 4 ° C. Tani waxay xaqiijineysaa in unugyadu ay ku dhajistaan pellet aad u adag xagga hoose ee tuubada Centrifugeuge.
Muhiimadda qandhada habboon
Qulqulka saxda ah waa lama huraan in unugyada laga sooco unugyada ka soo koritaanka dhexdhexaadka ah iyo qaybaha kale ee milmi gruufka. Waa ceel
Ka saarista supernat
● Farsamooyinka ka saarida sare
Marka unugyada la qoro, supebant-ka (dareeraha ka sarreeya pellet) waa in si taxaddar leh loo saaraa iyadoon la carqaladeyn pellet-ka. Tan waxaa badanaa lagu sameeyaa iyadoo la adeegsanayo micropipette. Waa muhiim in talaabadan si isdaba joog ah loo sameeyo si looga fogaado inaad lumiso unugyada.
● Hubinta lumista ugu yar ee pellet
Hubinta luminta ugu yar ee pellet-ka ee pellet-ka ah waxay ku lug leedahay tuubbo taxaddar leh iyo, haddii loo baahdo, wareegyo badan oo koronto iyo ka saaritaan sare leh. Hadafku waa in la ilaaliyo unugyo badan oo suuragal ah oo ku jira pellet si loogu helo ugu badnaan soo kabashada DNA.
Ku darista xalka nuclei resis
● Waxyaabaha ay ka kooban yihiin xalka nuclei lysis
Xalka Nuclei resiy-ga waxaa caadi ahaan ka kooban saabuun (sida sds), wax lagu dhejiyo (sida Tris - HCl), iyo wakiil wakiil ah (sida Edta). Xeelku wuxuu carqaladeeyaa xuubka unugyada iyo baqshada nukliyeerka, sii deynta waxyaabaha ku jira gacanta, oo ay ku jiraan DNA, xalka.
● Doorka jabinta darbiyada unugyada
Xalka Nuclei ee aan ahayn oo keliya xarkaha xuubka unugyada laakiin waxay sidoo kale beenisaa borotiinnada iyo burooyinka, si wax ku ool ah u jajabinta darbiyada unugyada iyo baqshada nukliyeerka si ay ugu sii daayaan DNA xalka.
Dib u soo celinta unugyada
● dhuuban dhuuban si looga fogaado ijaarka DNA
Mar haddii xalka nuclei lagu daro, unugyadu waxay u baahan yihiin in si tartiib ah loogu soo celiyo si looga fogaado ixtiraamka DNA. Ifcidation waxay u jebin kartaa DNA-ga jajab yar, kaas oo dhibaato ku noqon kara codsiyada hoos udhaca ee u baahan sareeya - molikalar - culeyska DNA.
● Hubinta dib u soo celinta dhameystiran
Dib-u-soo-celinta dhameystiran waxay xaqiijineysaa in unugyada oo dhami ay si isku mid ah u xidhnaayeen, kor u qaadista soo kabashada DNA. Tan waxaa lagu gaari karaa tuubbo jilicsan ama ka hortag ah xalka xawaaraha hoose.
Ku-da'ay unugyada Lyse
● Heerkulka heerkulka ee loo yaqaan
Unugyada dib loo soo celiyo waxaa lagu dhex dari karaa heerkul gaar ah si loo hubiyo in lagu dhameystiro lysis. Tan waxaa badanaa lagu sameeyaa 37 ° C illaa 55 ° C. Heerkulka saxda ah iyo muddada ayaa ku kala duwanaan kara iyadoo kuxiran borotokoolka iyo shuruudaha gaarka ah ee xirmada go'doominta ee DNA-da ee loo adeegsado.
● muddada looga baahan yahay hinsis wax ku ool ah
Muddada caadiga ah ee lagu soo gelinayo waa inta u dhexeysa 20 illaa 30 daqiiqo, laakiin waa la hagaajin karaa iyadoo lagu saleynayo hufnaanta unugyada ee loo yaqaan 'resiciol cell' ee la arkay. Kordhinta daba dheeraada ayaa laga yaabaa inay lagama maarmaan noqoto LUQORE laakiin waa in la isku dheelitiraa khatarta xaalada DNA-ga.
Qaboojinta heerkulka qolka
Muhiimadda qaboojinta tartiib tartiib ah
Ka dib markii lagu soo baxo, muraayadaha indhaha ayaa si tartiib tartiib ah loogu qaboojiyaa heerkulka qolka. Qaboojiyaha tartiib-tartiib ah wuxuu ka caawiyaa xasilinta DNA waxayna yareysaa halista shoogga kuleylka, kaasoo suuragal ah in lagu keydiyo DNA.
Saamaynta DNA iyo qashinka dhiiga
Qaboojinta heerkulka qolka ayaa u oggolaanaya qashinka gacanta inay saadaaliso, taasoo u sahlaysa in laga sooco DNA-da talaabooyinka xiga. Tani waxay sidoo kale gacan ka geysaneysaa xasilinta howlaha enzyme waxayna fududeynaysaa ka saarida RNA ee daaweynta RNASACE.
Ku darsanaanta xalka RNACE
Ujeeddo Ujeedada RNASE ee nidaamka
Xalka RNASE waxaa lagu darayaa in lagu meeleeyo hoos udhaca RNA, oo haddii kale CO - uu ku daahiri karo DNA-da iyo faragalinta DNA-ga hoose. RENACE FARSAMADA FARSAMADA FARSAMADA RNA, ka tagista DNA-da.
● Ka hortagga faddaraynta
Ka hortagga faddaraynta RNA waxay muhiim u tahay codsiyada u baahan DNA saafi ah, sida PCR iyo isku xirka. Daaweynta loo yaqaan 'RNASE' waxay hubisaa in DNA go'doonsan tahay ay ka madax bannaan tahay sunta faneed.
Nadiifinta DNA
● Qaababka loogu talagalay kala-sooca DNA qaybaha kale ee gacanta
Dhowr habab ayaa loo istcimaali karaa in lagu nadiifiyo DNA ka dib. Kuwaas waxaa ka mid ah phenol - Soo-saarista chaloroforforform, roobka etloroforform, roobka ethonol, iyo adeegsiga xirmooyinka ganacsiga ee coli-ka. Qaab kastaa wuxuu leeyahay faa'iidooyinkiisa iyo qasaarooyinka, xirmooyinka ganacsiga oo bixiya natiijooyin ku habboon iyo natiijooyin joogto ah.
● Tixgelinnada daahirka DNA
Daacaddu waa cunsur muhiim u ah guusha codsiyada hoose. Xirmooyinka ganacsiga, sida daaweynta unugyada E. MNA KIT MNNA DNA, waxaa loogu talagalay in lagu siiyo sare - daahir DNA si wax ku ool ah oo meesha ka saaraya borotiinnada, lipids, iyo wasakhooyinka kale.
Kaydinta iyo maaraynta DNA go'doon ah
● Dhaqanka ugu wanaagsan ee lagu keydiyo DNA
Mar alla markii la nadiifiyo, DNA waa in lagu kaydiyaa wax lagu dhejiyo, sida te rukunka, at - 20 ° C ama - 80 ° C muddo dheer - waqtiga keydinta ereyga. Ka fogow barafoobay oo soo noqnoqda
● Joogtaynta sharafta DNA ee codsiyada hoose
Si loo joogteeyo sharafta DNA, isticmaal jeermis nadiif ah, nucleuse - tuubooyin bilaash ah iyo xallin. Tani waxay xaqiijineysaa in DNA-da ay wali tahay mid aan xirneyn oo ku habboon codsiyada sida cloning, isku xirka, iyo PCR.
Ku saabsanBuluug leh
Jangsu Hilgene wuxuu aasaasay xarunteeda (10,000㎡ GMP Xarunta iyo Xarunta 'R & D' ee Suzhou, Suzhou, oo ah magaalada Lzhoug ee quruxda badan ee Lake, iyo laba goobood oo wax soo saar ah oo la soo bandhigo shaanthen iyo Shanzhore, Shanthai, oo fidiyay shabakadda ay soosaarto. Goobta North Carolina ee Mareykanka ayaa hada socota, oo sii faafa joogitaankeeda adduunka. Hillgene waxay dhistay waddo muuqata oo lagu horumarinayo alaabada dhiiga gacantu, laga bilaabo daahfurka si loo keeno, oo leh aaladaha wax soosaarka aashitada ee nucleic acid, Serum - hakinta hakinta, iyo horumarka hakinta oo xiran, iyo baaritaanka QC. Alaabada buluuga ah waxaa loogu talagalay xakameynta tayada leh, iyadoo la hubinayo in guusha cudurka loo yaqaan 'surpruur'.
Waqtiga Post: 2024 - 05 - 05 14:47:03
