A. कोलीबाट DNOLLETING A. कोली आणविक जीवविज्ञानमा आधारभूत प्रक्रिया हो। यो लेख सम्पूर्ण प्रक्रियाको माध्यमबाट हिंड्नेछ, विस्तृत चरणहरू र स्पष्टीकरणहरू प्रदान गर्दै विज्ञान दुबैलाई र प्रक्रियाका व्यावहारिक पक्षहरू बुझ्ने भनेर सुनिश्चित गर्दछ। चाहे तपाईं एक अनुभवी अनुसन्धानकर्ता हुनुहुन्छ वा ल्याबमा एक नयाँ कम्पनर, यो गाइड एक मूल्यवान संसाधन हुनेछ।
सेल निलम्बनको तयारी
● E. कोली कोशिकाको संग्रह
ई। कोकीबाट DNOLLING DNA INOLLING मा पहिलो चरण समावेश गर्दछ ब्याक्टेरिया कोषहरू स .्कलन गर्दछ। यसको लागि प्राय: बढ्दो तरल मोडमा बढ्नको लागि आवश्यक पर्दछ जब सम्म यो लोगारिथमिक वृद्धि चरणमा पुग्दैन। समय महत्वपूर्ण छ किनकि यस चरणमा कोषहरू प्राय: व्यावहारिक र मृयनको उत्पादन हुनेछ, जसले उच्च डीएनए उत्पादनलाई परिणाम दिन्छ।
● एक उचित बफरमा पुनःप्रवाह कोषहरू
स collected ्कलन गरिएको कक्षहरू त्यसपछि एक उपयुक्त बफरमा पुनःप्रास गरियो। एउटा सामान्य छनौट एक त्रिस हो - UDTA (TA) बफर, जसले dnawne प्रक्रियाको समयमा DNA को अखण्डतालाई कायम राख्न मद्दत गर्दछ। बफरले बहु उद्देश्यहरू सेवा गर्दछ: यसले पीएचपीलाई स्थिर गर्दछ, ह्रुजीन्स डिस्चाइट डिस्ट्यान्टिग्रेड क्र्यागहरू जसले अन्यथा dengaids dnage गर्न सक्दछ, र त्यसपछि एन्जाइमेटिक प्रतिक्रियाहरूको लागि एक इष्टतम िक वातावरण प्रदान गर्दछ।
प्यालेट्स कोषहरूको लागि सेन्ट्रीफुजन
● contrimalsguations (गति र समय) को लागी प्यारामिटरहरू
कक्षहरू पुनःसुच गरिसकेपछि निलम्बन कक्षहरू कोषहरूलाई गोली हानेका छन्। सेन्ट्रीफेसन गति र समय महत्वपूर्ण प्यारामिटरहरू हुन्। सामान्यतया, सेन्ट्रीफुजन करीव 4000 मा गरिन्छ -, -, -, - 1 - 1 - 1 ° मिनेटमा 1 ° 0 यो सुनिश्चित गर्दछ कि कक्षहरू एक कडा गोली हान्ने गोली हानेको छ।
● उचित पेलेटि of को महत्त्व
उचित पेलिंगिंग वृद्धि मध्यम र अन्य धोखापूर्ण कम्पोनेन्टहरूबाट छुट्याउन उचित पेलिंग आवश्यक छ। एक राम्रो - गठन बैसलेलेटले त्यसलाई कम र अधिक दक्षतापूर्ण र अधिक कुशल बनाउँदछ, कोषहरूको न्यूनतम घाटा सुनिश्चित गर्ने र, यसैले अधिकतम डीएनए उपज।
सुपरिटलको हटाउने
Sublation सुपरनिटन्ट हटाउनको लागि प्रविधिहरू
एकचोटि कक्षहरू पेलेरेट गरिएको छ, सुपरिटन्ट (पीटलेट माथि तरल) सेल गोलीले विचलित नगरी सावधानीपूर्वक हटाइनु पर्छ। यो सामान्यतया माइक्रोसिपेटको प्रयोग गरेर गरिन्छ। यो कुनै पनि कक्षहरू हराउनबाट बच्न यो चरण सावधानीपूर्वक गर्न महत्त्वपूर्ण छ।
A सेल पिल्लेटको न्यूनतम घाटा सुनिश्चित गर्दै
सेल कीलेटको न्यूनतम घाटा सुनिश्चित गर्ने कुरामा ध्यानपूर्वक पाइपेटि or र, आवश्यक भएमा, सैन्य रूपमा सतार, बहुविध राउन्डहरू। लक्ष्य अधिकतम DNA रिकभरीको लागि पीएल्लेटमा सकेसम्म धेरै कोषहरू राख्नु हो।
न्यूक्लिटी लिसिस समाधानको थप
● आलुली लिसिस समाधानको कम्पोनेन्टहरू
आलुली लिब्स समाधानले सामान्यतया एक डिटर्जन्ट गर्दछ (जस्तै SDS), एक बफर (जस्तै ट्ररिसले - HCCLET एजेन्ट (EDTA)। डिटर्जिंगले सेल झिल्ली र आणविक खामलाई बाधा पुर्याउँछ, डीएनए सहित, ट्यागिकल सामग्रीहरू जारी गर्दै।
Salls सेल भित्ताहरू तोड्दा भूमिका
आलुकी लिसिस समाधान मात्र सेल झिल्ली मात्र हुँदैन तर प्रोटीन र लिरिडहरू पनि फैलाउँदछ, डीनालाई समाधानमा रिलीज गर्न सेल भित्ता र आणविक खामहरू अस्वीकार गर्दछ।
कोषहरूको पुन: अवशेष
● DNA Staring बेवास्ता गर्न कोमल पाइप
एक पटक आलु लिसिस समाधान थपियो, डीएनए शेरिंगबाट बच्न कोषहरूलाई बिस्तारै बिस्तारै बिरुवाको पुनःस्थापना गर्नुपर्नेछ। कपालले डीएनएलाई सानो टुक्राहरू तोड्न सक्दछ, जुन डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगहरूको लागि समस्याग्रस्त हुन सक्छ जुन उच्च - मोलकुलर - वजन DNA
Suchure पूर्ण पुन: पुन: पुनर्मुशीपन सुनिश्चित गर्दै
पूर्ण पुन: पुन: पुन: बचाव सुनिश्चित गर्दछ कि सबै कोषहरू समान रूपमा ढल्किसकेका छन्, डीएनए पुन: प्राप्ति अधिकतम गर्दै। यो कोमल पाइपराइटिंगबाट प्राप्त गर्न सकिन्छ वा कम गतिमा समाधानको विचलित गर्न सकिन्छ।
लाइसे कोषहरूको लागि इन्साबेशन
● इनपबयनको लागि तापमान सेटिंग्स
पुनः कब्जा गरिएको सेलहरू पूर्ण तापमानमा पूर्ण लिसिस सुनिश्चित गर्न एक विशिष्ट तापमानमा समावेश छ। यो सामान्यतया 37 37 डिग्री सेल्सियस in 55 डिग्री सेल्सियस मा गरिन्छ। सटीक तापक्रम र अवधिको लागि प्रोटोकल र डीएनएस एलियन किटको विशिष्ट आवश्यकताहरूको आधारमा फरक हुन्छ।
● अवधि प्रभावकारी लिसिसका लागि आवश्यक छ
इनक्युबेशनको लागि विशिष्ट अवधि 20 देखि minutes0 मिनेट बीचमा छ, तर सेल लिसिस को दक्षताको आधारमा यो समायोजित गर्न सकिन्छ। पूर्ण उल्ल .्गेशन पूर्ण लिशिसको लागि आवश्यक हुन सक्छ तर डीएनए गिरावटको जोखिमको बिरूद्ध सन्तुलित हुनुपर्दछ।
कोठाको तापक्रममा चिसो
● क्रमिक चिसोको महत्त्व
आक्रमण पछि, Lyseate बिस्तारै कोठाको तापक्रममा चिसो हुन्छ। क्रमिक चिसोले डीएनएलाई स्थिर गर्न र थर्मल दुख्ने जोखिममा कम गर्न मद्दत गर्दछ, जुनसँग सम्भावित रूपमा डीएनए डिग्रेड गर्न सक्दछ।
Dnu र सेलुलर मलबेसमा प्रभाव
कोठाको तापक्रमको लागि चिसो सेलुलर मलबेलाई बटुल्न अनुमति दिन्छ, यसलाई पछाडि चरणहरूमा डीएनएलाई अलग गर्न सजिलो बनाउँदछ। यसले इन्जाइम गतिविधिहरूलाई स्थिर बनाउन मद्दत गर्दछ र rneese उपचार द्वारा आरएनएमा हटाउने सुविधा गर्दछ।
Rnease समाधान को थप
● प्रक्रियामा rnease को उद्देश्य
रिफेजल समाधान अपमानजनक आरएनएमा थपिएको छ, जुन अन्य अन्यथा सहयोग गर्न सक्दछ र डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगहरूमा हस्तक्षेप गर्दछ। Renase छनौट रूपमा डाइजेस्ट्स आरएनए, डीएनए अक्षेर छोडेर।
Rn rna प्रदूषण रोक्दै
Rna संक्रमण रोक्नको लागि अनुप्रयोगहरूको लागि महत्वपूर्ण छ जसलाई पृष्ठ dna आवश्यक छ, जस्तै pcr र contending आवश्यक छ। रिनेज्रीडी उपचार रिलोम डीएनए आरएनए दूरीबाट मुक्त छ भनेर सुनिश्चित गर्दछ।
DNA को शुद्धिकरण
● अन्य सेलुलर कम्पोनेन्टहरूबाट DNA विभाजित गर्न विधिहरू
धेरै विधिहरू लिच्छबाट DNA शुद्ध गर्न प्रयोग गर्न सकिन्छ। यसमा Phenol - क्लोरोलोफल निकासी, इथेनॉल वर्षा, र वाणिज्य ई। कोली dni DNA KITs प्रयोग गर्दछ। प्रत्येक विधिमा यसको पेशेवर र विपरित हुन्छ, व्यावसायिक किटहरू सुविधाहरू र सुसंगत परिणामहरू प्रदान गर्दछ।
Dan dnu शुद्धता को लागी विचारहरु
शुद्धता डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगहरूको सफलताको लागि एक महत्वपूर्ण कारक हो। वाणिज्यिक किटहरू, जस्तै सेल थेरापी ई। कोल डीएनएई किट, उच्च उत्पादन गर्न डिजाइन गरिएको हो - शुद्धता DNA ले प्रभावकारी रूपमा प्रोटीन, र अन्य दूषितकर्ताहरू प्रदान गर्दै।
भण्डारण र पृथक DNA को भण्डारण र ह्यान्डलिंग
Dna DNA भण्डारणको लागि उत्तम अभ्यासहरू
एकचोटि शुद्ध गरिएको, डीएनए उपयुक्त बफरमा भण्डारण गर्नुपर्दछ, - 20 डिग्री सेल्सियसको लागि - 20 डिग्री सेल्सियसको लागि .0 डिग्री सेल्सियसको लागि। बारम्बार फ्रिजबाट बच्नुहोस् - panw चक्र तिनीहरूले डीएनए गिरावट को कारण हुन सक्छ।
De डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगहरूको लागि डीएनएनसीयर्शी कायम गर्दै
डीएनएनएनएस अखण्डता कायम गर्न बाँझ, न्यूक्लिअल प्रयोग गर्न नि: शुल्क ट्यूब र समाधानहरू। यसले सुनिश्चित गर्दछ कि DNA उपेक्षित र लैंनिंग, समतल, र pcr को साथ को लागी उपयुक्त रहन्छ।
प्रायनीलो चिड़
Jiangsu हलजिनले यसको मुख्यालय (10,000 जीएमपीन बोटबिरुवा र आरएमडी बोटबिरुवा र R & D सेन्टर) shzhou, सुकता र शंघाई क्षेत्रहरु को एक निर्माण नेटवर्क को एक निर्माण नेटवर्क विस्तार। अमेरिकामा उत्तर क्यारोलिना साइट हाल निर्माणाधीन छ, यसको विश्वव्यापी उपस्थितिलाई थप। Lailgeen ले सेलुलर थेरापी उत्पादनहरूको विकासका लागि एक्सप्रेस मार्ग बनाएको छ, आर्कुल एसिड निर्माणको लागि प्लेटफर्महरू नि: शुल्क डिस्चार्ज अनुभवी, र QC परीक्षण। ब्लकिट उत्पादनहरू गुणस्तर नियन्त्रणको लागि डिजाइन गरिएको छ, सेलुलर थेरापी आविष्कारको सफलता सुनिश्चित गर्ने।
समय: 2024 - 09 - 05 - - 05:47:03
