E. Coli မှ DNA ကိုသီးခြားခွဲထုတ်ခြင်းသည်မော်လီကျူးဇီဝဗေဒတွင်အခြေခံလုပ်ထုံးလုပ်နည်းဖြစ်သည်။ ဤဆောင်းပါးသည်သင့်အားလုပ်ငန်းစဉ်တစ်ခုလုံးမှတစ်ဆင့်လမ်းလျှောက်ခြင်း, သင်ဟာရာသီအလိုက်သုတေသီတစ် ဦး လား, ဓာတ်ခွဲခန်းထဲကိုလာမယ့်လား, ဒီလမ်းညွှန်ဟာအဖိုးတန်အရင်းအမြစ်တစ်ခုဖြစ်လာလိမ့်မယ်။
ဆဲလ်ရပ်ဆိုင်းမှုပြင်ဆင်မှု
●အီး Coli Cells များကိုစုဆောင်းခြင်း
E. Coli မှ DNA ကိုသီးခြားခွဲထုတ်ခြင်းတွင်ပထမဆုံးခြေလှမ်းသည်ဘက်တီးရီးယားဆဲလ်များကိုစုဆောင်းခြင်းပါဝင်သည်။ ၎င်းသည်များသောအားဖြင့်အီးကို coli ကို logarithmic ကြီးထွားလာသည့်အဆင့်သို့ရောက်ရှိသည်အထိသင့်တော်သောအရည်အလတ်စားတွင်တိုးပွားစေရန်လိုအပ်သည်။ ဤအဆင့်ရှိဆဲလ်များသည်အလားအလာရှိသောဆဲလ်များမှာအလားအလာရှိသောဆဲလ်များကိုပိုမိုလွယ်ကူစွာပိုမိုလွယ်ကူစွာပြုလုပ်ပေးနိုင်သည့်အချိန်မှာအလွန်အရေးကြီးသည်။
●ဆဲလ်များကိုသင့်လျော်သောကြားခံတွင်ပြန်လည်ပြင်ဆင်ခြင်း
စုဆောင်းထားဆဲလ်များကိုထို့နောက်သင့်လျော်သောကြားခံတွင်ပြန်လည်ရောက်ရှိလာသည်။ ထုတ်လုပ်မှုလုပ်ငန်းစဉ်အတွင်း DNA ၏သမာဓိကိုထိန်းသိမ်းရန်အထောက်အကူပြုသောဘုံရွေးချယ်မှုသည် TRIS - Etta (TE) ကြားခံ။ Buffer သည်ရည်ရွယ်ချက်များစွာရှိသည် - PH ကိုတည်ငြိမ်ပြီး DNA ကိုယုတ်ညံ့နိုင်သည့် DADA ကိုနစ်မြုပ်စေနိုင်သည့် Disteral Cames များကိုတည်ငြိမ်စေပြီးနောက်ဆက်တွဲအင်ဇိုင်းတုံ့ပြန်မှုများအတွက်အကောင်းဆုံး ionic ပတ်ဝန်းကျင်ကိုပေးသည်။
Pellet ဆဲလ်များသို့ centrifugation
● Centrifugation အတွက် parameters များ (မြန်နှုန်းနှင့်အချိန်)
ဆဲလ်များကို resuspending လုပ်ပြီးနောက်ဆဲလ်များကိုလုံး 0 လုံးလေးများဖြည့်ဆည်းရန် Centrifugation ကိုစစ်ဆေးသည်။ Centrifugation Speed နှင့်အချိန်တို့သည်အရေးပါသော parameterster များဖြစ်သည်။ ပုံမှန်အားဖြင့် Centrifugation ကို 4000 0 န်းကျင်တွင် 4000 0 န်းကျင်တွင် 10.0 G အတွက် 10 - 15 မိနစ် 4 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင်ရှိသည်။ ဤသည်ဆဲလ်များသည် centrifuge tube ၏အောက်ခြေရှိတင်းကျပ်စွာလုံးလေးတစ်ခုဖွဲ့စည်းထားကြောင်းသေချာစေသည်။
●သင့်လျော်သော pelleting ၏အရေးပါမှု
ကြီးထွားမှုအလတ်စားနှင့်အခြားပျော်ဝင်နိုင်သောအစိတ်အပိုင်းများမှဆဲလ်များကိုခွဲခြားရန်သင့်လျော်သော pelleting မရှိမဖြစ်လိုအပ်သည်။ ကောင်းမွန်စွာ - ဖွဲ့စည်းထားသောလုံးလေးသည်နောက်ဆက်တွဲခြေလှမ်းများကိုပိုမိုလွယ်ကူစွာပိုမိုထိရောက်စေသည်။ အနည်းဆုံးဆဲလ်များဆုံးရှုံးခြင်းနှင့်အမြင့်ဆုံး DNA အထွက်အများဆုံးဖြစ်သည်။
Supernatant ၏ဖယ်ရှားရေး
● Supernatant ဖယ်ရှားရေးအတွက်နည်းစနစ်
ဆဲလ်များကို pelleted လုပ်သည်နှင့်တပြိုင်နက် Supernatant (PLELET အထက်ရှိအရည်) ကိုဆဲလ်လုံးလေးများကိုအနှောင့်အယှက်မဖြစ်စေဘဲဂရုတစိုက်ဖယ်ရှားပစ်ရမည်။ ၎င်းကိုများသောအားဖြင့် microlopette ကို သုံး. ပြုလုပ်သည်။ မည်သည့်ဆဲလ်များမဆုံးရှုံးခြင်းကိုရှောင်ရှားရန်ဤခြေလှမ်းကိုသေချာစွာလုပ်ဆောင်ရန်အလွန်အရေးကြီးသည်။
●ဆဲလ်လုံးလေးများဆုံးရှုံးခြင်းကိုသေချာစေရန်
ဆဲလ်တစ်ခုလုံးလေး၏အနည်းဆုံးဆုံးရှုံးမှုကိုသေချာစေရန်သေချာစေရန်, ရည်မှန်းချက်မှာအမြင့်ဆုံး DNA ပြန်လည်ထူထောင်ရေးအတွက် Pelloet တွင်ဆဲလ်များစွာကိုတတ်နိုင်သမျှထားရန်ဖြစ်သည်။
နျူကလိယ lysis ဖြေရှင်းချက်၏ထို့အပြင်
●နျူကလိယ lysis solution ၏အစိတ်အပိုင်းများ
Nuclei Lysis Sedary တွင်ပုံမှန်အားဖြင့်ပုံမှန်အားဖြင့် (SD များကဲ့သို့) အစက်များ (SDS ကဲ့သို့) ကြားခံတစ်ခုရှိသည်။ ဆပ်ပြာသည်ဆဲလ်အမြှေးပါးနှင့်နျူကလီးယားစာအိတ်ကိုအနှောင့်အယှက်ပေးပြီး DNA အပါအ 0 င် DNA အပါအ 0 င်,
●ဆဲလ်နံရံများကိုချိုးဖောက်ရာတွင်အခန်းကဏ် role
Nuclei Lysis Solution သည်ဆဲလ်အမြှေးပါးကိုလုယက်ရုံသာမကပရိုတင်းများနှင့် lipids များကိုလည်းဖြေရှင်းရန် DNA ကိုဖြေရှင်းရန်ဆဲလ်နံရံများနှင့်နျူကလီးယားစာအိတ်များကိုလည်းထိထိရောက်ရောက်ဖြန့်ဖြူးသည်။
ဆဲလ်များ၏ resuspension
● DNA ညှပ်ကိုရှောင်ရှားရန်နူးညံ့သိမ်မွေ့သောပိုက်ကွန်
Nuclei lysised Solution ကိုဖြည့်စွက်ပြီးတာနဲ့ဆဲလ်များသည် DNA ညှပ်ကိုရှောင်ရှားရန်ညင်ညင်သာသာပြန်လည်စတင်ရန်လိုအပ်သည်။ ညှပ်သည် DNA ကိုသေးငယ်သောအပိုင်းအစများထဲသို့ခွဲထားနိုင်သည်။
●ပြည့်စုံသော resuspension ကိုသေချာစေရန်
ဖြည့်စွက် resuspensens သည်ဆဲလ်များအားလုံးကိုတစ်ပုံစံတည်းခိုသည်, ဤအရာကိုနူးညံ့သိမ်မွေ့သော pipetting သို့မဟုတ်အနိမ့်အနိမ့်အနေဖြင့်ဖြေရှင်းချက်ဖြင့်ရေဝဲခြင်းဖြင့်အောင်မြင်နိုင်သည်။
Lyse ဆဲလ်များမှပေါက်ဖွား
●ပေါက်ဖွားရန်အတွက်အပူချိန်ချိန်ညှိချက်များ
Resuspended ဆဲလ်များသည်ဖြည့်စွက် lysis ကိုသေချာစေရန်တိကျသောအပူချိန်တွင်ထည့်သွင်းထားသည်။ ၎င်းကိုများသောအားဖြင့် 37 ° C မှ 55 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင်ပြုလုပ်သည်။ အပူချိန်နှင့်ကြာချိန်အတိအကျမှာ protocol နှင့်အသုံးပြုသော DNA အထီးကျန်ကိရိယာအစုံ၏လိုအပ်ချက်များကို မူတည်. ကွဲပြားနိုင်သည်။
●ထိရောက်သော lysys အတွက်လိုအပ်သောကြာချိန်
ပေါက်ဖွားမှုအတွက်ပုံမှန်ကြာချိန်မှာမိနစ် 20 မှ 30 ကြားတွင်ဖြစ်သည်။ ကြာရှည်သောပေါက်ဖွားမှုသည်ဖြည့်စွက် lysis အတွက်လိုအပ်သော်လည်း DNA ကိုယုတ်ညံ့ခြင်းအန္တရာယ်ကိုဟန်ချက်ညီအောင်ထိန်းညှိသင့်သည်။
အခန်းအပူချိန်မှအအေး
●တဖြည်းဖြည်းအအေးခံခြင်း၏အရေးပါမှု
ပေါက်ဖွားပြီးနောက် Lysate သည်တဖြည်းဖြည်းအခန်းအပူချိန်သို့အအေးခံသည်။ တဖြည်းဖြည်းအအေးသည် DNA ကိုတည်ငြိမ်စေရန်နှင့် DNA ကိုယုတ်ညံ့နိုင်သည့်အပူထိတ်လန့်မှုအန္တရာယ်ကိုလျှော့ချပေးသည်။
● DNA နှင့်ဆယ်လူလာအပျက်အစီးများအပေါ်အကျိုးသက်ရောက်မှုများ
အခန်းအပူချိန်သို့အအေးပေးခြင်းသည်ဆယ်လူလာအပျက်အစီးများကိုမိုးရွာသွန်းမှုကိုပိုမိုလွယ်ကူစေသည်။ ၎င်းသည်အင်ဇိုင်းလှုပ်ရှားမှုများကိုတည်ငြိမ်စေရန်နှင့် RNA ကို rnase ကုသမှုဖြင့်ဖယ်ရှားပေးရန်ကူညီသည်။
rnase ဖြေရှင်းချက်၏ထို့အပြင်
●လုပ်ထုံးလုပ်နည်းတွင် rnase ၏ရည်ရွယ်ချက်
RNASE ဖြေရှင်းချက်ကို DNA နှင့်စင်ကာပူနှင့်အတူသန့်ရှင်းရေးနှင့်မြစ်အောက်ပိုင်း applications များဖြင့် 0 င်ရောက်စွက်ဖက်သော RNA မှ RNA ကို degreade ဖြေရှင်းချက်ကိုဆက်ပြောသည်။ rnase ကို dna နဂိုအတိုင်းထွက်ခွာ,
● RNA ညစ်ညမ်းမှုကိုကာကွယ်ခြင်း
RNA ညစ်ညမ်းမှုကိုကာကွယ်ခြင်းသည် PCR နှင့် sequencing ကဲ့သို့သောစင်ကြယ်သော DNA လိုအပ်သည့် application များအတွက်အရေးပါသည်။ rnase ကုသမှုသည်အထီးကျန်ဖြစ်သော DNA သည် RNA ညစ်ညမ်းမှုများမှကင်းလွတ်စေသည်။
DNA ကိုသန့်ရှင်းရေး
● DNA ကိုအခြားဆယ်လူလာအစိတ်အပိုင်းများနှင့်ခွဲထုတ်ရန်နည်းလမ်းများ
method များကို lysate မှ DNA ကိုသန့်စင်ရန်အသုံးပြုနိုင်သည်။ ၎င်းတို့တွင် phenol ကို Chloroform ထုတ်ယူခြင်း, Ethanol မိုးရွာသွန်းမှုနှင့်စီးပွားဖြစ်အီးကိုမိုးရွာသွန်းမှုနှင့်စီးပွားဖြစ်အီးကို DNA ပစ္စည်းများပါဝင်သည်။ နည်းလမ်းတစ်ခုစီတွင်စီးပွားဖြစ်ပစ္စည်းများသည်အဆင်ပြေပြီးတသမတ်တည်းရလဒ်များကိုကမ်းလှမ်းသောစီးပွားဖြစ်ပစ္စည်းများနှင့်အတူ၎င်း၏အကောင်းအဆိုးများနှင့်ဆိုးကျိုးများရှိသည်။
● DNA ကိုသန့်ရှင်းစင်ကြယ်မှုအတွက်ထည့်သွင်းစဉ်းစားပါ
Surevepstream application များ၏အောင်မြင်မှုအတွက်အရေးကြီးသောအချက်တစ်ချက်ဖြစ်သည်။ Commertery E. Coli DNA Kit ကဲ့သို့သောစီးပွားဖြစ်ပစ္စည်းများဖြစ်သောပရိုတင်းဓာတ်များ, lipids နှင့်အခြားညစ်ညမ်းမှုများကိုထိထိရောက်ရောက်ဖယ်ရှားခြင်းအားဖြင့်မြင့်မားစွာထုတ်ပေးရန်ဒီဇိုင်းပြုလုပ်ထားသည်။
သီးခြား DNA ကိုသိုလှောင်ခြင်းနှင့်ကိုင်တွယ်ခြင်း
# DNA ကိုသိမ်းဆည်းရန်အကောင်းဆုံးအလေ့အကျင့်များ
စင်ကြယ်ပြီးသည်နှင့် DNA ကို TE Buffer ကဲ့သို့သောသင့်လျော်သောကြားခံတွင်သိုလှောင်ထားသင့်သည်။ 20 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်သို့မဟုတ် - 80 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်ကြာရှည်စွာ - သက်တမ်းသိုလှောင်မှု။ မကြာခဏအေးခဲခြင်းကိုရှောင်ကြဉ်ပါ။
● DNA ၏သမာဓိကို DNA ၏သမာဓိကိုထိန်းသိမ်းခြင်း
DNA ၏သမာဓိကိုထိန်းသိမ်းရန်, မြုံ, nuclease အခမဲ့။ အခမဲ့ပြွန်နှင့်ဖြေရှင်းချက်များ။ ဤအချက်သည် DNA သည်မသန့်ရှင်းသေးဖြစ်နေဆဲဖြစ်ပြီးပုံတူပွားခြင်း,
အကေြာင်းအကအပြာရောင်
Jiangsu Hillgene သည် Suzhong ခရိုင်, Suzhong ခရိုင်တွင်တည်ရှိပြီး Suzhong ခရိုင်တွင်တည်ရှိပြီး Suzhong ခရိုင်တွင်တည်ရှိပြီး Suzhong ခရိုင်တွင်တည်ရှိပြီး Suzhong ခရိုင်တွင်တည်ရှိသည်။ ယူအက်စ်ရှိမြောက်ကာရိုလိုင်းနားသည်လက်ရှိဆောက်လုပ်ဆဲဖြစ်ပြီးကမ္ဘာလုံးဆိုင်ရာတည်ရှိမှုကိုထပ်မံဖြန့်ဝေသည်။ HillGene သည်ရှာဖွေတွေ့ရှိမှုမှ Discovery မှ Discount မှ Discount မှ Discount မှ Discount မှ Platfular Platform, Serum - အခမဲ့ဆိုင်းငံ့ထားခြင်း, ပိတ်ခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုနှင့် QC စစ်ဆေးမှုများအခမဲ့ဆိုင်းငံ့ထားခြင်း, Bluekit ထုတ်ကုန်များကိုအရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှုအတွက်ဒီဇိုင်းဆွဲထားသည်,
Post Time: 2024 - 09 - 09 - 05 14:47:03
