ई. कोलाई पासून डीएनए अलग ठेवणे ही आण्विक जीवशास्त्रातील मूलभूत प्रक्रिया आहे. हा लेख आपल्याला संपूर्ण प्रक्रियेद्वारे पुढे जाईल, तपशीलवार चरण आणि स्पष्टीकरण प्रदान करेल, आपल्याला विज्ञान आणि प्रक्रियेचे व्यावहारिक पैलू दोन्ही समजून घ्या. आपण एक अनुभवी संशोधक किंवा लॅबमध्ये नवागत असो, हे मार्गदर्शक एक मौल्यवान स्त्रोत असेल.
सेल निलंबन तयार करणे
E ई. कोलाई पेशींचा संग्रह
ई. कोलाईपासून डीएनए वेगळ्या करण्याच्या पहिल्या चरणात बॅक्टेरियाच्या पेशी एकत्रित करणे समाविष्ट आहे. हे लॉगरिथमिक वाढीच्या अवस्थेपर्यंत पोहोचत नाही तोपर्यंत योग्य द्रव माध्यमात वाढणारी ई. कोलाई आवश्यक असते. वेळ महत्त्वपूर्ण आहे कारण या टप्प्यातील पेशी सर्वात व्यवहार्य आणि लायस करणे सोपे आहेत, ज्यामुळे डीएनए उत्पादन जास्त होईल.
Futer योग्य बफरमध्ये सेल्ससिंग सेल्स
त्यानंतर एकत्रित पेशी योग्य बफरमध्ये पुन्हा तयार केल्या जातात. एक सामान्य निवड एक ट्रायस - ईडीटीए (टीई) बफर आहे, जी एक्सट्रॅक्शन प्रक्रियेदरम्यान डीएनएची अखंडता टिकवून ठेवण्यास मदत करते. बफर एकाधिक उद्देशाने काम करतो: हे पीएच स्थिर करते, चेलेट्स डिव्हॅलेंट केशन्स जे अन्यथा डीएनए खराब करू शकते आणि त्यानंतरच्या एंजाइमॅटिक प्रतिक्रियांसाठी इष्टतम आयनिक वातावरण प्रदान करते.
गोळीच्या पेशींमध्ये सेंट्रीफ्यूगेशन
Cent सेंट्रीफ्यूगेशनसाठी पॅरामीटर्स (वेग आणि वेळ)
पेशींचा पुन्हा प्रयत्न केल्यानंतर, पेशींना गोळी घालण्यासाठी निलंबन सेंट्रीफ्यूगेशन केले जाते. सेंट्रीफ्यूगेशन वेग आणि वेळ गंभीर पॅरामीटर्स आहेत. थोडक्यात, सेंट्रीफ्यूगेशन सुमारे 4,000 - 6,000 ग्रॅम 10 - 15 मिनिटांसाठी 4 डिग्री सेल्सिअस तापमानात केले जाते. हे सुनिश्चित करते की पेशी सेंट्रीफ्यूज ट्यूबच्या तळाशी एक घट्ट गोळी तयार करतात.
Prote योग्य पेलेटिंगचे महत्त्व
पेशींना वाढीच्या माध्यमातून आणि इतर विद्रव्य घटकांपासून विभक्त करण्यासाठी योग्य पेलेटिंग आवश्यक आहे. एक विहीर - तयार केलेली गोळी त्यानंतरच्या चरणांना सुलभ आणि अधिक कार्यक्षम करते, पेशींचे कमीतकमी नुकसान सुनिश्चित करते आणि म्हणूनच, जास्तीत जास्त डीएनए उत्पन्न.
सुपरनाटंट काढून टाकणे
Several सत्रात आणण्याची तंत्रे
एकदा पेशींना गोळ्या घातल्या गेल्या की सेलच्या गोळीला त्रास न देता अलौकिक (गोळ्याच्या वरील द्रव) काळजीपूर्वक काढले जाणे आवश्यक आहे. हे सहसा मायक्रोपीपेट वापरुन केले जाते. कोणतीही पेशी गमावू नये म्हणून हे चरण सावधपणे करणे महत्त्वपूर्ण आहे.
Cell सेल पेलेटचे कमीतकमी नुकसान सुनिश्चित करणे
सेल पॅलेटचे कमीतकमी नुकसान सुनिश्चित करणे काळजीपूर्वक पाइपेटिंग आणि आवश्यक असल्यास, सेंट्रीफ्यूगेशन आणि अलौकिक हटविण्याच्या एकाधिक फे s ्या. जास्तीत जास्त डीएनए पुनर्प्राप्तीसाठी गोळीमध्ये जास्तीत जास्त पेशी ठेवणे हे ध्येय आहे.
न्यूक्ली लिसिस सोल्यूशनची जोड
Nun न्यूक्ली लिसिस सोल्यूशनचे घटक
न्यूक्लीई लिसिस सोल्यूशनमध्ये सामान्यत: डिटर्जंट (सारखे एसडीएस), बफर (जसे की ट्रिस - एचसीएल) आणि चेलेटिंग एजंट (ईडीटीए सारखे) असते. डिटर्जंट सेल झिल्ली आणि अणु लिफाफा व्यत्यय आणते, डीएनएसह सेल्युलर सामग्री सोल्यूशनमध्ये सोडते.
Cell सेल भिंती तोडण्यात भूमिका
न्यूक्लीई लिसिस सोल्यूशन केवळ पेशीच्या पडदाचाच लिसेच नाही तर प्रथिने आणि लिपिड्स देखील डीनॅटराइझ करते, सोल्यूशनमध्ये डीएनए सोडण्यासाठी सेलच्या भिंती आणि विभक्त लिफाफे प्रभावीपणे तोडतात.
पेशींचा पुन्हा देखभाल
D डीएनए कातरणे टाळण्यासाठी कोमल पाइपेटिंग
एकदा न्यूक्लीई लिसिस सोल्यूशन जोडल्यानंतर, डीएनए कातरणे टाळण्यासाठी पेशींना हळूवारपणे पुन्हा तयार करणे आवश्यक आहे. कातरणे डीएनएला लहान तुकड्यांमध्ये खंडित करू शकते, जे उच्च - आण्विक - वजन डीएनए आवश्यक असलेल्या डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगांसाठी समस्याप्रधान असू शकते.
Res पूर्ण पुनर्वसन सुनिश्चित करणे
पूर्ण पुनर्स्थापन हे सुनिश्चित करते की सर्व पेशी एकसमानपणे लिस्ड केल्या आहेत, डीएनए पुनर्प्राप्ती जास्तीत जास्त करतात. हे कमी वेगाने सोल्यूशनचे सौम्य पाइपेटिंग किंवा भोवरा करून हे साध्य केले जाऊ शकते.
लिसे पेशींना उष्मायन
In उष्मायनासाठी तापमान सेटिंग्ज
संपूर्ण लिसिस सुनिश्चित करण्यासाठी विशिष्ट तापमानात पुनर्स्थापित पेशी उष्मायित केल्या जातात. हे सहसा 37 डिग्री सेल्सियस ते 55 डिग्री सेल्सियस पर्यंत केले जाते. प्रोटोकॉल आणि डीएनए अलगाव किटच्या विशिष्ट आवश्यकतानुसार अचूक तापमान आणि कालावधी बदलू शकतो.
Pective प्रभावी लिसिससाठी कालावधी आवश्यक आहे
उष्मायनासाठी विशिष्ट कालावधी 20 ते 30 मिनिटांच्या दरम्यान असतो, परंतु तो सेल लिसिसच्या कार्यक्षमतेच्या आधारे समायोजित केला जाऊ शकतो. संपूर्ण लिसिससाठी दीर्घकाळापर्यंत उष्मायन आवश्यक असू शकते परंतु डीएनए अधोगतीच्या जोखमीच्या विरूद्ध संतुलित केले पाहिजे.
खोलीच्या तपमानावर थंड
Lay हळूहळू शीतकरणाचे महत्त्व
उष्मायनानंतर, लायसेट हळूहळू खोलीच्या तपमानावर थंड होते. हळूहळू शीतकरण डीएनए स्थिर करण्यास मदत करते आणि थर्मल शॉकचा धोका कमी करते, जे डीएनए संभाव्यत: कमी करू शकते.
D डीएनए आणि सेल्युलर मोडतोडांवर परिणाम
खोलीच्या तपमानावर शीतकरण केल्याने सेल्युलर मोडतोडचा नाश होऊ शकतो, ज्यामुळे डीएनए नंतरच्या चरणांमध्ये वेगळे करणे सुलभ होते. हे सजीवांच्या शरीरात निर्मार्ण होणारे द्रव्य क्रियाकलाप स्थिर करण्यास आणि आरनेस उपचारांद्वारे आरएनए काढून टाकण्यास सुलभ करते.
आरनेस सोल्यूशनची जोड
प्रक्रियेत आरनेसचा उद्देश
आरएनएएस सोल्यूशन डीग्रेड आरएनएमध्ये जोडले गेले आहे, जे अन्यथा सह - डीएनएसह शुद्ध करू शकते आणि डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगांमध्ये हस्तक्षेप करू शकते. Rnase निवडकपणे आरएनए पचवते, डीएनए अबाधित करते.
R आरएनए दूषित होण्यापासून रोखणे
पीसीआर आणि सिक्वेंसींग सारख्या शुद्ध डीएनए आवश्यक असलेल्या अनुप्रयोगांसाठी आरएनए दूषित होण्यापासून प्रतिबंधित करणे महत्त्वपूर्ण आहे. आरनेस उपचार हे सुनिश्चित करते की वेगळ्या डीएनए आरएनए दूषित पदार्थांपासून मुक्त आहे.
डीएनए शुद्धीकरण
D डीएनए इतर सेल्युलर घटकांपासून विभक्त करण्याच्या पद्धती
लायसेटपासून डीएनए शुद्ध करण्यासाठी अनेक पद्धती वापरल्या जाऊ शकतात. यामध्ये फिनॉल - क्लोरोफॉर्म एक्सट्रॅक्शन, इथेनॉल पर्जन्यवृष्टी आणि व्यावसायिक ई. कोलाई डीएनए किट वापरणे समाविष्ट आहे. प्रत्येक पद्धतीमध्ये त्याचे साधक आणि बाधक असतात, व्यावसायिक किट्स सोयीची आणि सुसंगत परिणाम देतात.
D डीएनए शुद्धतेसाठी विचार
डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगांच्या यशासाठी शुद्धता हा एक गंभीर घटक आहे. सेल थेरपी ई. कोलाई डीएनए किट सारख्या व्यावसायिक किट्स प्रथिने, लिपिड आणि इतर दूषित पदार्थ प्रभावीपणे काढून उच्च - शुद्धता डीएनए मिळविण्यासाठी डिझाइन केल्या आहेत.
वेगळ्या डीएनएचे स्टोरेज आणि हाताळणी
D डीएनए संचयित करण्यासाठी सर्वोत्तम सराव
एकदा शुद्ध झाल्यानंतर, डीएनए योग्य बफरमध्ये, टीई बफर सारख्या, - 20 डिग्री सेल्सियस किंवा - - 80 डिग्री सेल्सियस पर्यंत लांब - टर्म स्टोरेजमध्ये ठेवला पाहिजे. वारंवार फ्रीझ टाळा - चक्र पिऊन चक्र कारण ते डीएनए अधोगती होऊ शकतात.
Now डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगांसाठी डीएनए अखंडता राखणे
डीएनए अखंडता राखण्यासाठी, निर्जंतुकीकरण, न्यूक्लीझ - विनामूल्य नळ्या आणि सोल्यूशन्स वापरा. हे सुनिश्चित करते की डीएनए क्लोनिंग, सिक्वेंसींग आणि पीसीआर सारख्या अनुप्रयोगांसाठी अनियंत्रित आणि योग्य आहे.
बद्दलब्लूकिट
जिआंग्सू हिलगेन यांनी वुझोंग जिल्ह्यात असलेल्या सुझो येथे आपले मुख्यालय (१०,००० ㎡ जीएमपी वनस्पती आणि आर अँड डी सेंटर) स्थापन केले, सुझो, सुंदर तैहू तलावाचे एक लाकेशोर शहर आणि शेन्झेन आणि शांघायमधील दोन उत्पादन स्थळे, देशभरात आपले उत्पादन नेटवर्क वाढवत आहेत. अमेरिकेतील नॉर्थ कॅरोलिना साइट सध्या निर्माणाधीन आहे आणि पुढे जागतिक उपस्थिती पसरवित आहे. न्यूक्लिक acid सिड मॅन्युफॅक्चरिंग, सीरम - विनामूल्य निलंबन संस्कृती, बंद प्रक्रिया विकास आणि क्यूसी चाचणीसाठी प्लॅटफॉर्मसह हिलजिनने सेल्युलर थेरपी उत्पादने विकसित करण्यासाठी एक एक्सप्रेस मार्ग तयार केला आहे. सेल्युलर थेरपी इनोव्हेशन्सचे यश सुनिश्चित करण्यासाठी ब्लूकिट उत्पादने गुणवत्ता नियंत्रणासाठी डिझाइन केली आहेत.
पोस्ट वेळ: 2024 - 09 - 05 14:47:03
