E. Coli-аас тусгаарлах ДНХ-ыг тусгаарлах нь молекул биологийн үндсэн журам юм. Энэ нийтлэл нь бүх үйл явцыг бүхэлд нь алхаж, нарийвчилсан алхам, тайлбарыг өгч, шинжлэх ухаан, практик талыг хоёуланг нь ойлгох болно. Та LABED судлаач эсвэл шинээр ирсэн хүн байгаа эсэх нь лабораторид байгаа эсэх, энэ гарын авлага нь үнэ цэнэтэй нөөц болно.
Нүдний түдгэлзүүлэлтийг бэлтгэх
● E. Coli эсүүдийн цуглуулга
E. Coli-ээс тусгаарлах эхний алхам нь бактерийн эсийг цуглуулахад оролцдог. Энэ нь ихэвчлэн e.-ийн өсөн нэмэгдэж буй E. COLI-ийг Логарифмын өсөлтийн үе шатанд хүрч өгнө. Цаг хугацаа нь энэ үе шатанд байгаа эсүүд нь хамгийн чухал бөгөөд энэ нь хамгийн их амьдрах чадвартай бөгөөд энэ нь дено ургацын үр дүнд хүрэх болно.
● Тохирох буферт сөхөрдөг эсүүд
Цуглуулсан эсүүд дараа нь тохиромжтой буферт дахин суулгана. Нийтлэг сонголт бол TRIS - EDTA (TE) edta (TE) буфер, олборлох явцад ДНХ-ийн бүрэн бүтэн байдлыг хадгалахад тусалдаг. Буфер нь олон зорилгоор үйлчилдэг: энэ нь ДНХ-г доройтуулж, дараа нь dna-г гажуудуулж, дараагийн ферментийн урвалд хүргэдэг.
Pellet эсэд центрифугар
● Centrifugation-д зориулсан параметрүүд (хурд, цаг)
Нүднүүдийг дахин суулгасны дараа түдгэлзүүлэлт нь Centrifugation-ийг центрифугала руу шилжүүлнэ. Centrifugation хурд, цаг хугацаа нь чухал параметр юм. Ихэвчлэн, центрифугаци нь 4,000 орчим - 6,000 гр-ыг 10,000 гр-д хийдэг. Энэ нь эсүүд центрифугийн хоолойны ёроолд нягт үрэл үүсгэдэг.
● зохих үрэлтэй харьцах ач холбогдол
Тохиромжтой үрэл нь өсөлтийн дунд болон бусад уусмал бүрэлдэхүүн хэсгээс эсийг салгахад зайлшгүй шаардлагатай. Худаг - Гаргасан үрэл нь дараагийн алхамуудыг илүү хялбар, үр дүнтэй болгодог бөгөөд энэ нь эсийн хамгийн бага алдагдал бөгөөд энэ нь хамгийн бага үр дүнтэй бөгөөд
Supernatant-ийг арилгах
● Суперматант зайлуулах арга техник
Нүднүүд нь үрэл нь үр дүнтэй байдаг, хэт шингэн (үр дүнгээс дээгүүр шингэн) нь эсийн үрэлийг үймүүлэхгүйгээр сайтар арилгана. Энэ нь ихэвчлэн микропипет ашиглан хийдэг. Аливаа эсийг алдахаас зайлсхийхийн тулд энэ алхамыг нямбай хийх нь чухал юм.
● Нүдний үрийг хамгийн бага алдагдалд оруулах
Нүдний үрийг хамгийн бага алдагдалд оруулах нь болгоомжтой хоолойгоор дамжуулж, шаардлагатай бол болгоомжтой, шаардлагатай бол олон тооны центрифугуяци, хэт ягаан туяаны зайлуулах явдал юм. Зорилго нь ДНХ-ийн хамгийн их ДНХ-ийн сэргэжийн тулд аль болох олон эсийг хадгалах явдал юм.
BOCLEIE LISSISCE-ийн шийдэлээс гадна
● BueClei Lission шийдлийн бүрэлдэхүүн хэсэг
Бөөмийн лизисийн уусмал нь ихэвчлэн угаалгын нунтаг (SDS шиг), буфер агуулдаг (tris - hcl), ба chelating агент (edta шиг). Угаалгын нунтаг нь эсийн мембран, цөмийн дугтуйг үүрэн, үүнд шийдэлд оруулдаг.
● Нүдний ханыг задлах үүрэг
Бөөмийн лизисийн шийдэл нь зөвхөн эсийн мембраныг лизоноор л хийдэггүй.
Эсийн нөхөн сэргээлт
● ДНХ-ийн хяргахаас зайлсхийхийн тулд зөөлөн хоолой
Бөөмийн лизисийн уусмал нэмэгдсэний дараа ДНХ-ийн хяргахаас зайлсхийх хэрэгтэй. Хяргах нь ДНХ-ийг жижиг хэсгүүдэд хувааж авах боломжтой жижиг хэсгүүдийг жижиг хэсгүүдэд хувааж болно
● Бүрэн сэхээн амьдруулахыг баталгаажуулах
Бүрэн сэргэж буй нийт эсүүд нь бүх эсүүд нь бүхэлдээ хэвтэж байгаа бөгөөд ДНХ-ийг сэргээхэд хамгийн их хэмжээгээр нэмэгдүүлдэг. Үүнийг зөөлөн хоолойгоор зөөлөн хоолойгоор эсвэл эргүүлэн авах боломжтой.
LYSE COLLS-д өсгөвөрлөнө
● Инкубацийн температурын тохиргоо
Силогдсон эсүүд нь бүрэн лизисийг баталгаажуулахын тулд тодорхой температурт өсгөвөрлөнө. Энэ нь ихэвчлэн 37 ° C-ээс 55 ° C-ээс 55 ° C хийдэг. Яг температур ба үргэлжлэх хугацаа нь протоколаас хамаарч, ДНХ-ийн тусгаарлагч хэрэгслийг ашиглаж болно.
● үр дүнтэй лизисэд шаардагдах хугацаа
Инкубацийн ердийн хугацаа нь 20-30 минутын хооронд байдаг боловч эсийн лизийн үр ашиг нь ажиглагдсан. Урьдчилан бэлтгэсэн инкубация нь бүрэн лизис хийхэд шаардлагатай байж болох ч ДНХ-ийн доройтлын эрсдэлтэй холбоотой байх ёстой.
Өрөөний температурт хөргөх
● аажмаар хөргөхийн ач холбогдол
Инкубацийн дараа инкубацийн дараа өрөөний температурт аажмаар хөргөнө. Аажмаар хөргөх нь ДНХ-ийг тогтворжуулахад тусалдаг бөгөөд ДНХ-ийг доройтуулж болзошгүй дулааны цочролыг багасгадаг.
● ДНХ, үүрэн эд эсийн нөлөө
Өрөөний температурт хөргөх нь эсийн эвдрэлийг хур тунадасны хог хаягдлыг хураахад хүргэдэг. Энэ нь ферментийн үйл ажиллагааг тогтворжуулахад тусалдаг бөгөөд RNA-г Rnase эмчилгээг арилгахад тусалдаг.
Rnase шийдлийн нэмэлт
● Процедур дахь Rnase-ийн зорилго
RNASE шийдэл нь RNA-г доройтуулж болох rna-г доройтуулж байна. RNASE нь RNA-ийг сонгон шалгаруулж, ДНХ-ийг бүрэн бүтэн орхино уу.
● РНХ-ийн бохирдлыг урьдчилан сэргийлэх
РНХ-ийн бохирдлыг урьдчилан сэргийлэх нь PCCR, дараалал гэх мэт цэвэр ДНХ-ийн зайлшгүй шаардлагатай програмууд юм. RNASE эмчилгээ нь тусгаарлагдсан ДНХ нь РНХ-ийн бохирдуулагчаас ангид байгаа эсэхийг баталгаажуулдаг.
ДНХ-ийн цэвэрлэгээ
● ДНХ-ийг бусад үүрэн хэсгээс тусгаарлах арга
Хэд хэдэн аргыг лизатороос цэвэршүүлэхэд ашиглаж болно. Эдгээр нь phion - Хлороформыг агуулдаг, icloroform of and sthanol хур тунадас, арилжааны E. Coli dna иж бүрдлийг ашиглах. Арга бүр нь давуу болон сул тал, тохь тухтай, тууштай үр дүнг санал болгодог.
● ДНХ цэвэр байдлын талаархи анхаарал хандуулах
Цэвэрлэгээ бол буулгах өргөдлийн амжилтанд хүрэх чухал хүчин зүйл юм. Эсийн эмчилгээний иж бүрдэл, жишээ нь E. Coli dna иж бүрдэл нь өндөр ургац авах зорилготой.
Тусгаарлагдсан ДНХ-ийг хадгалах, зохицуулах
● ДНХ-ийг хадгалах хамгийн сайн туршлага
Цэвэршүүлдэг, ДНХ нь Te буфер шиг тохиромжтой буферт хадгалагдах ёстой. - 20 ° C эсвэл - 80 ° c Байнга хөлдөхөөс зайлсхий. - ДНХ-ийн доройтлыг үүсгэж болох мөчлөгийг гэсгээх.
● ДНХ-ийн аргыг арчлахын тулд ДНХ-ийн шударга байдлыг хангах
ДНХ-ийн шударга байдлыг хадгалах, ариутгасан, нумаа ашиглах - Үнэгүй хоолой, шийдэл. Энэ нь ДНХ нь бохирдоогүй бөгөөд клонинг, дараалал, PCR, PCR-д ашиглахад тохиромжтой гэдгийг баталж байна.
ТухайХөхний харц
Jiangsu Hillgene (Suzhon Road, Suzheo Dailouch, Suzhen Dake, Shenzhe, Shanzhore City нь Shenzhe, Shanghe болон Shandai Coption нь үйлдвэрлэлийн сүлжээнд хадгалагдана. АНУ-ын Хойд Каролина сайт нь одоо баригдаж байгаа бөгөөд энэ нь одоо баригдаж байна. Хильбетен нь үүрэн холбоог хадгалах, Утасны хэмжээний эмийн багаж хэрэгсэл боловсруулах, тэжээмэл хэрэглэх, Serange болон QC тест боловсруулах. Bluekit бүтээгдэхүүн нь чанарын хяналтанд зориулагдсан бөгөөд эсийн эмчилгээний амжилтыг сайжруулах зориулалттай.
Бичлэг: 2024 - 2024 - 09 - 05 14:47:03
