ഇ. കോളിയിൽ നിന്നുള്ള ഡിഎൻഎ ഒറ്റപ്പെട്ട ഡിഎൻഐ തന്മാത്ര ബയോളജിയിലെ അടിസ്ഥാന നടപടിക്രമമാണ്. ഈ ലേഖനം മുഴുവൻ പ്രക്രിയയിലൂടെയും നടക്കും, വിശദമായ ഘട്ടങ്ങളും വിശദീകരണങ്ങളും നൽകിക്കൊണ്ട്, പ്രക്രിയയുടെ പ്രായോഗിക വശങ്ങളും നിങ്ങൾ മനസ്സിലാക്കുന്നു. നിങ്ങൾ ഒരു പരിചയ ഗവേഷണമോ ലാബിലേക്കുള്ള ഒരു പുതുമുഖമോ ആണെങ്കിലും, ഈ ഗൈഡ് വിലയേറിയ ഒരു വിഭവമായിരിക്കും.
സെൽ സസ്പെൻഷൻ തയ്യാറാക്കൽ
E.ലോ കോളി സെല്ലുകളുടെ ശേഖരം
E. കോളിയിൽ നിന്ന് ഡിഎൻഎ ഒറ്റപ്പെട്ട ഐസോൾറ്റിംഗിന്റെ ആദ്യപടി ബാക്ടീരിയ സെല്ലുകൾ ശേഖരിക്കുന്നതിൽ ഉൾപ്പെടുന്നു. ഇതിന് സാധാരണയായി ലോഗരിഥമിക് വളർച്ചാ ഘട്ടത്തിലെത്തുന്നതുവരെ അനുയോജ്യമായ ദ്രാവക മാധ്യമത്തിൽ വളരുന്ന ഇ. കോളി ആവശ്യമാണ്. സമയം നിർണായകമാണ്, കാരണം ഈ ഘട്ടത്തിലെ സെല്ലുകൾ ഏറ്റവും ലാഭകരവും എളുപ്പവുമാണ്, ഇത് ഉയർന്ന ഡിഎൻഎ വിളവിന് കാരണമാകും.
A ഉചിതമായ ബഫറിൽ സെല്ലുകൾ പുനർനിർമ്മിക്കുന്നു
ശേഖരിച്ച സെല്ലുകൾ അനുയോജ്യമായ ബഫറിൽ പുനർനിർമ്മിക്കുന്നു. എക്സ്ട്രാക്ഷൻ പ്രക്രിയയിൽ ഡിഎൻഎയുടെ സമഗ്രത നിലനിർത്താൻ സഹായിക്കുന്ന എടിടിഎ (ടെ) ബഫർ ഒരു ട്രൈസ് ആണ് ഒരു സാധാരണ തിരഞ്ഞെടുപ്പ്. ബഫർ ഒന്നിലധികം ആവശ്യങ്ങൾ സേവിക്കുന്നു: ഇതിന് പി.എച്ച് സ്ഥിരീകരിക്കുന്നു, ഡിഎൻഎ ഡിനെ ഡിഎൻഎ ഡിനയ്ക്ക് നൽകാനാകുന്ന ദിവറ്റീവ് കാറ്ററുകൾ പരിശോധിക്കുന്നു, തുടർന്നുള്ള എൻസൈമാറ്റിക് പ്രതികരണങ്ങൾക്കുള്ള ഒപ്റ്റിമൽ അയോണിക് പരിസ്ഥിതി നൽകുന്നു.
പെല്ലറ്റ് സെല്ലുകളിലേക്കുള്ള സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷൻ
Strifter കേന്ദ്രീകരണത്തിനുള്ള പാരാമീറ്ററുകൾ (വേഗതയും സമയവും)
സെല്ലുകൾ വീണ്ടും കുറച്ച ശേഷം, സസ്പെൻഷൻ സെല്ലുകൾ പെല്ലുചെയ്യാൻ കേന്ദ്രജ്യൂമേഷനിൽ വിധേയമാകുന്നു. ഗുരുതരമായ പാരാമീറ്ററുകളാണ് സെൻഷ്യേഷൻ വേഗതയും സമയവും. സാധാരണഗതിയിൽ, കേന്ദ്രീകൃതമായത് 4,000 - 6,000 ഗ്രാം 10 - 15 മിനിറ്റ് 4 ° C ന് നടക്കുന്നു. സെല്ലുകൾ സെൻട്രിഫ്യൂജ് ട്യൂബിന്റെ അടിയിൽ ഇറുകിയ പെല്ലെ ഉണ്ടാക്കുന്നുവെന്ന് ഇത് ഉറപ്പാക്കുന്നു.
Play ശരിയായ പെല്ലറ്റിംഗിന്റെ പ്രാധാന്യം
വളർച്ചാ ഇടത്തരം, മറ്റ് ലയിക്കുന്ന ഘടകങ്ങളിൽ നിന്ന് കോശങ്ങളെ വേർതിരിക്കുന്നതിന് ശരിയായ ഉരുളകൾ അത്യാവശ്യമാണ്. ഒരു കിണർ രൂപീകരിച്ച പെല്ലറ്റ് തുടർന്നുള്ള കോശങ്ങളുടെ കുറഞ്ഞ നഷ്ടം ഉറപ്പുവരുത്തുന്നു, അതിനാൽ പരമാവധി ഡിഎൻഎ വിളവ്.
അമാനുഷികത നീക്കംചെയ്യൽ
Sop അപ്രതീക്ഷിത നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനുള്ള സാങ്കേതികതകൾ
സെല്ലുകൾ പെല്ലെറ്റ് ചെയ്തുകഴിഞ്ഞാൽ, സെൽ പെല്ലറ്റിനെ ശല്യപ്പെടുത്താതെ സൂപ്പർമാറ്റ് (പെല്ലറ്റിന് മുകളിലുള്ള ദ്രാവകം നീക്കംചെയ്യണം. ഇത് സാധാരണയായി ഒരു മൈക്രോപൈപ്പറ്റ് ഉപയോഗിച്ചാണ് ചെയ്യുന്നത്. ഏതെങ്കിലും സെല്ലുകൾ നഷ്ടപ്പെടുന്നത് ഒഴിവാക്കാൻ ഈ നടപടി സൂക്ഷ്മമായി നിർവഹിക്കുന്നത് നിർണായകമാണ്.
Cla സെൽ പെല്ലറ്റിന്റെ കുറഞ്ഞ നഷ്ടം ഉറപ്പാക്കുന്നു
സെൽ പെല്ലേറ്റിന്റെ കുറഞ്ഞ നഷ്ടം ഉറപ്പാക്കുന്നത് ശ്രദ്ധാപൂർവ്വം പൈപ്പ്റ്റിംഗും ആവശ്യമെങ്കിൽ, ഒന്നിലധികം റൗണ്ടുകൾ സെൻട്രേഷൻ, അമാനുഷിക നീക്കംചെയ്യൽ. പരമാവധി ഡിഎൻഎ വീണ്ടെടുക്കലിനായി പെല്ലറ്റിൽ കഴിയുന്നത്ര സെല്ലുകൾ സൂക്ഷിക്കുക എന്നതാണ് ലക്ഷ്യം.
ന്യൂക്ലി ലിസിസ് പരിഹാരത്തിന്റെ കൂട്ടിച്ചേർക്കൽ
Ne ന്യൂക്ലി ലിസിസ് പരിഹാരത്തിന്റെ ഘടകങ്ങൾ
ന്യൂക്ലി ലിസിസിസ് പരിഹാരം സാധാരണയായി ഒരു ഡിറ്റർജന്റ് (എസ്ഡിഎസ് പോലെ) അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു, ഒരു ബഫർ (ട്രൈസ് - എച്ച്.സി.എൽ), ചേലേറ്റിംഗ് ഏജന്റ് (ഇഡിടിഎ പോലുള്ള). ഡിഎൻഎ ഉൾപ്പെടെയുള്ള സെല്ലുലാർ ഉള്ളടക്കങ്ങൾ പുറത്തുവിട്ട സെൽ മെംബറേൻ, ന്യൂക്ലിയർ എൻവലപ്പ് ഡിറ്റർജന്റ് തടസ്സപ്പെടുത്തുന്നു.
Sel സെൽ മതിലുകൾ തകർക്കുന്നതിൽ പങ്ക്
ന്യൂക്ലി ലിസിസ് പരിഹാരം സെൽ മെംബറേൻ മാത്രമല്ല, പ്രോട്ടീനുകളെയും ലിപിഡുകളെയും സൂചിപ്പിക്കുന്നു, ഇത് പ്രോട്ടീനുകളെയും ലിപിഡുകളെയും അപകീർത്തിപ്പെടുത്തുന്നു, ഇത് ഡിഎൻഎയെ പരിഹാരത്തിലേക്ക് റിലീസ് ചെയ്യുന്നതിന് ഫലപ്രദമായി തകർക്കുന്നു.
സെല്ലുകളുടെ പുനർനിർമ്മാണം
Can dnna ഷിയറിംഗ് ഒഴിവാക്കാൻ സ entle മ്യമായ പൈപെറ്റിംഗ്
ന്യൂക്ലി ലിസിസ് പരിഹാരം ചേർത്തുകഴിഞ്ഞാൽ, ഡിഎൻഎ ഷിയറിംഗ് ഒഴിവാക്കാൻ സെല്ലുകൾ രൂക്ഷമായി പുനർനിർമ്മിക്കേണ്ടതുണ്ട്. ഷിയറിംഗിന് ഡിഎൻഎയെ ചെറിയ ശകലങ്ങളായി തകർക്കാൻ കഴിയും, അത് താഴേക്ക് - തന്മാത്ര - ഭാരം DNA.
The പൂർണ്ണമായ പുനർനിർമ്മാണം ഉറപ്പാക്കുന്നു
പൂർണ്ണമായ പുനർനിർമ്മാണങ്ങൾ എല്ലാ സെല്ലുകളും ഒരേപോലെ പറയപ്പെടുന്നു, ഡിഎൻഎ വീണ്ടെടുക്കൽ പരമാവധി വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു. സ gentle മ്യമായ പൈപെറ്റിംഗ് അല്ലെങ്കിൽ പരിഹാരം കുറഞ്ഞ വേഗതയിൽ ഇത് നേടാനാകും.
ലിസ് സെല്ലുകളിലേക്ക് ഇൻകുബേഷൻ
● ഇൻകുബേഷനായുള്ള താപനില ക്രമീകരണങ്ങൾ
പൂർണ്ണ ലിസിസ് ഉറപ്പാക്കുന്നതിന് ഒരു പ്രത്യേക താപനിലയിൽ പുനർനിർമ്മിച്ച സെല്ലുകൾ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുന്നു. ഇത് സാധാരണയായി 37 ° C മുതൽ 55 ° C വരെയാണ്. പ്രോട്ടോക്കോളിനെ ആശ്രയിച്ച് കൃത്യമായ താപനിലയും ദൈർഘവും വ്യത്യാസപ്പെടാം, ഡിഎൻഎ ഒറ്റപ്പെടലിന്റെ പ്രത്യേകതയുടെ പ്രത്യേക ആവശ്യകതകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നു.
The ഫലപ്രദമായ ലിസിക്കുകൾക്ക് ദൈർഘ്യം ആവശ്യമാണ്
ഇൻകുബേഷനായുള്ള സാധാരണ ദൈർഘ്യം 20 മുതൽ 30 മിനിറ്റ് വരെയാണ്, പക്ഷേ സെൽ ലിസിസിന്റെ കാര്യക്ഷമതയെ അടിസ്ഥാനമാക്കി ഇത് ക്രമീകരിക്കാൻ കഴിയും. പൂർണ്ണമായ ലിസിസിന് നീണ്ടുനിൽക്കുന്ന ഇൻകുബേഷൻ ആവശ്യമായി വന്നേക്കാം, പക്ഷേ ഡിഎൻഎ തകർച്ചയുടെ അപകടസാധ്യതയ്ക്കെതിരെ സന്തുലിതമായിരിക്കണം.
Room ഷ്മാവിൽ തണുപ്പ്
C ക്രമേണ തണുപ്പിക്കുന്നതിന്റെ പ്രാധാന്യം
ഇൻകുബേഷനുശേഷം, ലൈസേറ്റ് ക്രമേണ മുറിയിലെ താപനിലയിലേക്ക് തണുപ്പിക്കുന്നു. ക്രമേണ തണുപ്പിക്കൽ ഡിഎൻഎ സുബ്ലിംഗ് ചെയ്യുന്നതിനും താപ ഞെട്ടലിന്റെ അപകടസാധ്യത കുറയ്ക്കുന്നതിനും സഹായിക്കുന്നു, അത് ഡിഎൻഎയെ തരംതാഴ്ത്താൻ സാധ്യതയുണ്ട്.
Cld ഡിഎൻഎയിലും സെല്ലുലാർ അവശിഷ്ടങ്ങളിലും ഇഫക്റ്റുകൾ
Room ഷ്മാസ താപനിലയിലേക്ക് തണുപ്പിക്കുന്നത് സെല്ലുലാർ അവശിഷ്ടങ്ങളെ ഭരിക്കാൻ അനുവദിക്കുന്നു, തുടർന്നുള്ള ഘട്ടങ്ങളിൽ ഡിഎൻഎയെ വേർതിരിക്കുന്നത് എളുപ്പമാക്കുന്നു. ഇത് എൻസൈം പ്രവർത്തനങ്ങൾ സ്ഥിരീകരിക്കാനും ആർഎൻഎ ചികിത്സയിലൂടെ ആർഎൻ നീക്കം ചെയ്യാനും സഹായിക്കുന്നു.
RNASE പരിഹാരത്തെ കൂട്ടിച്ചേർക്കൽ
Process നടപടിക്രമത്തിൽ ആർഎൻഎസിന്റെ ഉദ്ദേശ്യം
ആർഎൻഎയെ തരംതാഴ്ത്താൻ RNASE പരിഹാരം ചേർത്തു, അത് ca - ഡിഎൻഎ ഉപയോഗിച്ച് ശുദ്ധീകരിക്കുകയും താഴേക്കുള്ള അപ്ലിക്കേഷനുകളിൽ ഇടപെടുകയും ചെയ്യുക. ഡിഎൻഎ കേടാക്കുന്നത് തിരഞ്ഞെടുക്കുക
Knny rna മലിനീകരണം തടയുന്നു
പിസിആർ, സീക്വൻസിംഗ് പോലുള്ള ശുദ്ധമായ ഡിഎൻഎ ആവശ്യമുള്ള ആപ്ലിക്കേഷനുകൾക്ക് ആർഎൻഎ മലിനീകരണം നിർണ്ണായകമാണ്. ആർഎൻഎ മലിനീകരണങ്ങളിൽ നിന്ന് ഒറ്റപ്പെട്ട ഡിഎൻഎ സ free ജന്യമാണെന്ന് rnase ചികിത്സ ഉറപ്പാക്കുന്നു.
ഡിഎൻഎ ശുദ്ധീകരണം
Other മറ്റ് സെല്ലുലാർ ഘടകങ്ങളിൽ നിന്ന് ഡിഎൻഎയെ വേർതിരിക്കുന്ന രീതികൾ
ലിസറ്റിൽ നിന്ന് ഡിഎൻഎ ശുദ്ധീകരിക്കാൻ നിരവധി രീതികൾ ഉപയോഗിക്കാം. ഇതിൽ ഫിനോൾ - ക്ലോറോഫോം വേർതിരിച്ചെടുക്കൽ, എത്തനോൾ മഴ, വാണിജ്യ ഇ. കോളി ഡിഎൻഎ കിറ്റുകൾ എന്നിവ ഉൾപ്പെടുന്നു. ഓരോ രീതിയിലും അതിന്റെ ഗുണവും ബാധകവുമുണ്ട്, വാണിജ്യ കിറ്റുകൾ സൗകര്യവും സ്ഥിരമായ ഫലങ്ങളും വാഗ്ദാനം ചെയ്യുന്നു.
Dna ഡിഎൻഎ വിശുദ്ധിക്കുള്ള പരിഗണനകൾ
ഡ st ൺസ്ട്രീം അപ്ലിക്കേഷനുകളുടെ വിജയത്തിന്റെ നിർണായക ഘടകമാണ് പരിശുദ്ധി. വാണിജ്യ കിറ്റുകൾ, സെൽ തെറാപ്പി ഇ. കോളി ഡിഎൻഎ കിറ്റ് എന്ന പോലുള്ളത്, പ്രോട്ടീൻ, ലിപിഡുകൾ, മറ്റ് മലിനീകരണം എന്നിവ ഫലപ്രദമായി നീക്കം ചെയ്യുന്നതിലൂടെ ഉയർന്ന - പ്യൂരിറ്റി ഡിഎൻഎ.
ഇൻസുലേറ്റഡ് ഡിഎൻഎയുടെ സംഭരണവും കൈകാര്യം ചെയ്യൽ
Dna സംഭരിക്കുന്നതിനുള്ള മികച്ച പരിശീലനങ്ങൾ
ശുദ്ധീകരിച്ചുകഴിഞ്ഞാൽ, ഡിഎൻഎ അനുയോജ്യമായ ഒരു ബഫറിൽ, ഡിഎൻഎ അനുയോജ്യമായ ഒരു ബഫറിൽ സൂക്ഷിക്കണം, അതിൽ 20 ° C അല്ലെങ്കിൽ - 80 ° C ദീർഘകാല സംഭരണം. ഇടയ്ക്കിടെ മരവിപ്പിക്കൽ ഒഴിവാക്കുക - അവ ഡിഎൻഎ തകർച്ചയ്ക്ക് കാരണമാകുന്നു.
Da ഡാൻസ്ട്രീമ ആപ്ലിക്കേഷനുകൾക്കായി ഡിഎൻഎ സമഗ്രത നിലനിർത്തുന്നു
ഡിഎൻഎ സമഗ്രത നിലനിർത്താൻ, അണുവിമുക്തമായ ന്യൂക്ലേസ് ഉപയോഗിക്കുക - സ the ജന്യ ട്യൂബുകളും പരിഹാരങ്ങളും. ക്ലോണിംഗ്, സീക്വൻസിംഗ്, പിസിആർ തുടങ്ങിയ ആപ്ലിക്കേഷനുകൾക്ക് ഡിഎൻഎ അനന്തവും അനുയോജ്യവുമാണെന്ന് ഇത് ഉറപ്പാക്കുന്നു.
കുറിച്ച്ബ്ലൂകിറ്റ്
വുസോംഗ് ജില്ലയിൽ സ്ഥിതി ചെയ്യുന്ന സുഷോ, മനോഹരമായ തായ് തടാകം, ഷാങ്ഹായ് എന്നിവിടങ്ങളിലെ രണ്ട് നിർമാണ സൈറ്റുകളും ജിയാങ്സു ഹിൽവ് സ്ഥാപിച്ചു. യുഎസിലെ നോർത്ത് കരോലിന സൈറ്റ് നിലവിൽ ആഗോള സാന്നിധ്യത്തെ വ്യാപിപ്പിച്ച് നിർമാണത്തിലാണ്. കണ്ടെത്തൽ മുതൽ ഡെലിവറി, സെറം എന്നിവയ്ക്കുള്ള പ്ലാറ്റ്ഫോമുകൾ, സെറം - ഫ്രീ സസ്പെൻഷൻ കൾച്ചറിംഗ്, അടച്ച പ്രക്രിയ, ക്യുസി പരിശോധന എന്നിവയുള്ള സെല്ലുലാർ തെറാപ്പി ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ വികസിപ്പിക്കുന്നതിന് ഹിൽഗീൻ ഒരു എക്സ്പ്രസ് പാത നിർമ്മിച്ചു. സെല്ലുലാർ തെറാപ്പി പുതുമകളുടെ വിജയം ഉറപ്പാക്കുന്നതിന് ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണത്തിനായി ബ്ലൂകിറ്റ് ഉൽപ്പന്നങ്ങൾ രൂപകൽപ്പന ചെയ്തിരിക്കുന്നു.
പോസ്റ്റ് സമയം: 2024 - 09 - 05 14:47:03
