Any amin'ny ADOLA dia avy amin'i E. Coli dia fomba fototra lehibe amin'ny biolojika molekiola. Ity lahatsoratra ity dia handehandeha aminao mandritra ny dingana rehetra, manome dingana sy fanazavana momba ny antsipirihany, ny fiantohana anao fa azonao ny siansa sy ny lafiny azo ampiharina amin'ny fomba fiasa. Na mpikaroka na mpikaroka efa za-draharaha ianao amin'ny laboratoara, ity torolàlana ity dia loharano sarobidy.
Fanomanana ny fampiatoana sela
● famoriam-bola E. Coli Colells
Ny dingana voalohany amin'ny fampahafantarana ny ADN avy amin'i E. Coli dia misy ny fanangonana ireo sela bakteria. Matetika izany dia mitaky ny fitomboana E. Coli amin'ny haingon-trano mety mandra-pahatongany amin'ny dingana logarithmic. Ny fotoam-potoana dia zava-dehibe satria ny sela ao amin'ity dingana ity dia tena tsara sy mora kokoa amin'ny Lyse, izay mety hiafara amin'ny fanomezana ADN avo kokoa.
● Ny sela mamoafady ao anaty buffer mety
Ny sela angonina avy eo dia voaheloka ao anaty sombin-tsofina mety. Ny safidy iraisana dia tris - edta (te) edta (te), izay manampy amin'ny fitazonana ny tsy fivadihan'ny ADN mandritra ny fizotry ny fitrandrahana. Manampy tanjona maro ny buffer: manamafy ny pH, Chelates Mahaliana izay mety hanimba ny ADN, ary manome tontolo iainana tsara indrindra ho an'ny fanehoan-kevitra an-keriny.
Centrifugation amin'ny sela pellet
● Ny tarehimarika ho an'ny centrifugation (haingam-pandeha sy fotoana)
Aorian'ny famerenany ireo sela, ny fampiatoana dia iharan'ny sofina sofina mba hamonoana ireo sela. Ny hafainganam-pandeha sy ny ora sivana dia marim-pototra. Matetika, ny centrifugation dia atao manodidina ny 4000 - 6,000 g mandritra ny 10 - 15 minitra amin'ny 4 ° C. Izany dia miantoka fa ny sela dia mamorona pellet tery eo am-pototry ny fantsona centrifuge.
● Ny maha zava-dehibe ny pelleting tsara
Ny pelleting mety dia ilaina mba hampisarahana ireo sela avy amin'ny antonony fitomboana sy ny singa hafa sigara hafa. Ny fantsakana tsara iray - Ny pellet dia mahatonga ny dingana ho mora kokoa sy mahomby, miantoka ny fahaverezan'ny sela kely ary noho izany, noho izany ny ADN ambony indrindra.
Fanesorana ny Supernatant
● Teknika momba ny fanesorana tsy manam-paharoa
Vantany vao voaroaka ny sela, ny supernatant (ny rano ambonin'ilay pellet) dia tsy maintsy esorina tsara raha tsy manelingelina ny pellet sela. Izany dia matetika atao amin'ny alàlan'ny micropipette. Zava-dehibe ny fanatanterahana ity dingana ity mba tsy hahavery sela.
● Fiantohana ny fahaverezan'ny pellet sela
Ny fiantohana ny fahaverezan'ny pelaka sela dia misy fantsom-bidy ary, raha ilaina, boribory marobe sy fanesorana ny supernatant. Ny tanjona dia ny hitazomana sela maro araka izay azo atao ao amin'ny pellet ho an'ny fanarenana farany DNA.
Fanampiana ny vahaolana lysis lysis
● Ny singa amin'ny vahaolana lysis nuclei
Ny vahaolana lysis noklei dia ahitana ny fanamboarana (toa ny sds), buffer (toy ny tris - hcl), ary agence chelating (toa an'i Edta). Ny mpanelingelina dia manakorontana ny membrane sela sy ny valopy niokleary, famoahana ny votoatiny sela, ao ny ADN, ao anaty vahaolana.
● Andraikitra amin'ny famotehana ny rindrin'ny sela
Ny vahaolana lysis dia tsy hoe lyses ny membrane sela fa ny proteinina sy ny lipids ihany koa, ary mandoto ny rindrin'ny sela sy ny valopy nokleary mba hamoahana ny ADN.
Resuspension ny sela
● Ny pipeting malefaka mba tsy hialanao ny ADN
Raha vao ampiana ny vahaolana lysis pressis, ny sela dia mila voadona moramora mba hialana amin'ny ADN. Ny fiompiana dia afaka manapaka ny ADN ho sombintsombiny kely kokoa, izay mety hanelingelina ny fampiharana ambany izay mitaky avo - Molecular - ADN.
● Fiantohana tanteraka ny resuspension
Ny resuspension tanteraka dia miantoka fa ny sela rehetra dia lyss lyssed, hampitombo ny fanarenana ny ADN. Izany dia azo tanterahina amin'ny alàlan'ny pipetting malefaka na vortexing ny vahaolana amin'ny hafainganam-pandeha ambany.
Fanafihana amin'ny sela lyse
● Fikirana amin'ny hafanana ho an'ny fanodinana
Ny sela resy lahatra dia ampidirina amin'ny mari-pana manokana hiantohana ny lysis tanteraka. Izany dia matetika atao amin'ny 37 ° C ka hatramin'ny 55 ° C. Ny mari-pana sy ny faharetany dia afaka miovaova arakaraka ny protocol sy ny fepetra takian'ny filokana an'ny DNA.
● Ny faharetana dia ilaina amin'ny lysis mahomby
Ny faharetan'ny mahazatra ho an'ny fanodinana dia eo anelanelan'ny 20 ka hatramin'ny 30 minitra, fa azo ovaina miankina amin'ny fahombiazan'ny lysis cell lysis. Ny fanodinana maharitra maharitra dia mety ilaina amin'ny fandanjalanjana tanteraka fa tokony handanjalanja amin'ny loza ateraky ny fampihenana ny ADN.
Mangatsiaka amin'ny mari-pana amin'ny efitrano
● Ny maha zava-dehibe ny hatsiaka tsikelikely
Aorian'ny fandikan-dalàna dia mihena tsikelikely ny lysate amin'ny mari-pana. Ny hatsiaka tsikelikely dia manampy amin'ny fanamafisana ny ADN ary hanamaivana ny loza ateraky ny fahatafintohinana feno hafanana, izay mety hanimba ny ADN.
● Ny fiantraikan'ny ADN sy ny sela sela
Ny hatsiaka amin'ny mari-pana amin'ny efitrano dia mamela ny setroka finday hanorotoro, manamora ny fanavahana ny ADN amin'ny dingana manaraka. Manampy amin'ny fanamafisana ny hetsika an-tranomaizina ihany koa izany ary hanamora ny fanesorana ny RNA amin'ny fitsaboana rnase.
Fanampiana ny vahaolana Rnase
● tanjon'ny rnase amin'ny fomba fiasa
Ny vahaolana RNase dia ampiana amin'ny fanalavirana ny RNA, izay mety amin'ny Co - Madio amin'ny ADN ary manelingelina ny fampiharana ambany. Rnase voafantina dia mandoto rna, ka tsy mivadika ny ADN.
● Misoroka ny fandotoana ny RNA
Ny fisorohana ny fandotoana ny RNA dia zava-dehibe amin'ny fampiharana izay mitaky ADC madio, toy ny PCR sy ny SEQUMINCCING. Ny fitsaboana rnase dia miantoka fa ny ADN mitokana dia tsy misy kamboty ao amin'ny RNA.
Fanadiovana ny ADN
● Fomba hahasarahana ny ADN avy amin'ny singa sela hafa
Ny fomba maro dia azo ampiasaina hanadio ny ADN avy amin'ny Lysate. Anisan'izany ny phenol - fitrandrahana chloroform, ethanol prepipitation, ary mampiasa ny varotra ara-barotra E. Coli Dna Kits. Ny fomba tsirairay dia manana ny fananany sy ny cons, miaraka amin'ny kitapo ara-barotra manome alalana sy vokatra tsy miova.
● Ny fiheverana ny fahadiovana ADN
Ny fahadiovana dia antony manakiana ny fahombiazan'ny fampiharana ambany. Kitapo ara-barotra, toy ny fitsaboana sela E. Coli DNA Kitapo, natao hanomezana avo - Fahadiovana ny ADN amin'ny fanesorana am-pahombiazana ny proteinina, ny lipida ary ny voaloto hafa.
Fitehirizana sy fitantanana ny ADN mitokana
● Fomba fanao tsara indrindra amin'ny fitahirizana ny ADN
Raha voadio indray mandeha, ny ADN dia tokony hotehirizina ao anaty buffer mety, toa ny mpanapaka, - 20 ° C na - 80 ° C ho an'ny Long - Fitehirizana teny Halaviro ny freeze matetika - tsingerin'ny tadiny rehefa mety hitarika ny DNA Degradation izy ireo.
● Mihazona ny tsy fivadihan'ny DNA ho an'ny fampiharana ambany
Mba hitazonana ny tsy fivadihan'ny ADN, dia miorena, miorim-paka - fantsona sy vahaolana maimaimpoana. Izany dia miantoka fa ny ADN dia mijanona ho tsy mamitaka ary mety amin'ny fampiharana toy ny cloning, sonia ary pcr.
AboutBluekit
Jiangsu Hillgene dia nametraka ny lohany (10 000 000 ny zavamaniry sy ny R & D Center) ao amin'ny distrikan'i Wuzhou, Suzhou, tanàna lakhore ao amin'ny farihy Taihu sy roa ao Shenzhen sy Shanghai, manitatra ny tambajotra manorim-pirenena. Ny tranonkala Carolina avaratra any Etazonia dia eo am-panorenana ankehitriny, manaparitaka bebe kokoa ny fanatrehany izao tontolo izao. Ny Hillgene dia nanamboatra ny làlan-kaleha ho an'ny fampandrosoana ny vokatra fitsaboana sela, avy amin'ny fanaterana ny fandefasana, miaraka amin'ny sehatra ho an'ny fanamboarana asidra, serum Ny vokatra Bluekit dia natao ho an'ny fifehezana kalitao, miantoka ny fahombiazan'ny fanavaozana fitsaboana sela.
Post Fotoana: 2024 - 09 - 09 - 05 14:47:03
