ທ່ານແຍກ DNA ແນວໃດຈາກ E. coli?

ວິທີການທີ່ເບົາບາງລົງຈາກ E. coli: ຄູ່ມືທີ່ສົມບູນແບບ

ການໂດດດ່ຽວ DNA ຈາກ E. Coli ແມ່ນຂັ້ນຕອນພື້ນຖານໃນຊີວະສາດໂມເລກຸນ. ບົດຂຽນນີ້ຈະເຮັດໃຫ້ທ່ານຜ່ານຂະບວນການທັງຫມົດ, ໃຫ້ຂັ້ນຕອນແລະຄໍາອະທິບາຍລະອຽດ, ໃຫ້ຮັບປະກັນທັງວິທະຍາສາດແລະພາກປະຕິບັດຂອງຂັ້ນຕອນການດໍາເນີນງານ. ບໍ່ວ່າທ່ານຈະເປັນນັກຄົ້ນຄວ້າຕາມລະດູການຫຼືຜູ້ມາໃຫມ່ໃນຫ້ອງທົດລອງ, ຄໍາແນະນໍານີ້ຈະເປັນຊັບພະຍາກອນທີ່ມີຄ່າ.

ການກະກຽມຂອງ suspension ຫ້ອງ

●ການລວບລວມຈຸລັງ E. Coli

ຂັ້ນຕອນທໍາອິດໃນການໂດດດ່ຽວ DNA ຈາກ E. Coli ກ່ຽວຂ້ອງກັບການເກັບເອົາຈຸລັງແບັກທີເລຍ. ມັກຈະຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການຂະຫຍາຍຕົວຂອງ E. coli ໃນຂະຫນາດກາງທີ່ເຫມາະສົມຈົນກ່ວາໄລຍະການເຕີບໂຕຂອງ logarmithic. ໄລຍະເວລາແມ່ນສໍາຄັນເພາະວ່າຈຸລັງໃນໄລຍະນີ້ແມ່ນສາມາດໃຊ້ໄດ້ງ່າຍທີ່ສຸດແລະງ່າຍດາຍທີ່ສຸດ, ເຊິ່ງຈະສົ່ງຜົນໃຫ້ຜົນຜະລິດ DNA ສູງຂື້ນ.

●ຈຸລັງ resuspending ໃນ buffer ທີ່ເຫມາະສົມ

ຈຸລັງທີ່ເກັບໄດ້ແມ່ນຫຼັງຈາກນັ້ນໄດ້ຮັບການຟື້ນຟູໃນ buffer ທີ່ເຫມາະສົມ. ທາງເລືອກທົ່ວໄປແມ່ນ TRIS - OFTA (TE) buffer, ເຊິ່ງຊ່ວຍຮັກສາຄວາມສົມບູນຂອງ DNA ໃນລະຫວ່າງຂັ້ນຕອນການສະກັດ. The Buffer ໃຫ້ບໍລິການທີ່ຫຼາກຫຼາຍຈຸດປະສົງ: ມັນຄົງທີ່ສະດວກສະບາຍກ່ຽວກັບປະເທດທີ່ເປັນທີ່ພະແນກທີ່ສາມາດເຮັດໃຫ້ DNA ທີ່ເສີຍຫາຍໄດ້, ແລະໃຫ້ສະພາບແວດລ້ອມ ionic ທີ່ດີທີ່ສຸດສໍາລັບຕິກິລິຍາ enzymatent.

centrifugation ກັບຈຸລັງ peltet

●ພາລາມິເຕີສໍາລັບ Centrifugation (ຄວາມໄວແລະເວລາ)

ຫຼັງຈາກທີ່ resuspending ຂອງຈຸລັງ, suspension ແມ່ນຖືກຕ້ອງກັບ centrifugation ກັບ pellet ຈຸລັງ. ຄວາມໄວແລະເວລາຂອງສູນກາງແມ່ນພາລາມິເຕີທີ່ສໍາຄັນ. ໂດຍປົກກະຕິ, centrifugation ແມ່ນປະຕິບັດປະມານ 4,000 - 6,000 g ສໍາລັບ 10 - 15 ນາທີທີ່ 4 ° C ນີ້ຮັບປະກັນວ່າຈຸລັງປະກອບເປັນເມັດທີ່ແຫນ້ນຫນາຢູ່ດ້ານລຸ່ມຂອງທໍ່ centrifuge.

●ຄວາມສໍາຄັນຂອງການໃຊ້ເມັດທີ່ເຫມາະສົມ

ຂີ້ເຫຍື້ອທີ່ເຫມາະສົມແມ່ນສິ່ງທີ່ຈໍາເປັນເພື່ອແຍກຈຸລັງຈາກການເຕີບໃຫຍ່ຂະຫຍາຍຕົວແລະສ່ວນປະກອບທີ່ລະລາຍອື່ນໆ. ດີໄດ້ດີທີ່ສຸດ peltet ເຮັດໃຫ້ທຸກຂັ້ນຕໍ່ມາງ່າຍຂຶ້ນງ່າຍ, ມີປະສິດຕິພາບຫຼາຍ, ຮັບປະກັນຈຸລັງການສູນເສຍຫນ້ອຍທີ່ສຸດ, ເພາະສະນັ້ນ, ການໃຫ້ຜົນຜະລິດ DNA ສູງສຸດ.

ການໂຍກຍ້າຍຂອງ supernatant

ເຕັກນິກສໍາລັບການໂຍກຍ້າຍທີ່ບໍ່ມີປະໂຫຍດ

ເມື່ອຈຸລັງຢູ່ໃນຈຸລັງທີ່ມີ, ແຫຼວທີ່ຢູ່ຂ້າງເທິງຂອງເມັດ) ຕ້ອງໄດ້ຮັບການໂຍກຍ້າຍອອກຢ່າງລະມັດລະວັງໂດຍບໍ່ລົບກວນເມັດຈຸລັງ. ນີ້ແມ່ນປົກກະຕິແລ້ວເຮັດໂດຍໃຊ້ micropipette. ມັນເປັນສິ່ງທີ່ສໍາຄັນທີ່ຈະປະຕິບັດຂັ້ນຕອນນີ້ຢ່າງລະອຽດເພື່ອຫລີກລ້ຽງການສູນເສຍຈຸລັງໃດໆ.

●ຮັບປະກັນການສູນເສຍຂອງເມັດນ້ອຍທີ່ສຸດ

ຮັບປະກັນການສູນເສຍຂອງຈຸລັງຫນ້ອຍທີ່ສຸດກ່ຽວຂ້ອງກັບການວາງແຜນທີ່ລະມັດລະວັງແລະຖ້າຈໍາເປັນ, ຫຼາຍຮອບຂອງການກໍາຈັດຄວາມສາມາດແລະປະດັບປະດາ. ເປົ້າຫມາຍແມ່ນເພື່ອຮັກສາຈຸລັງໃຫ້ເປັນຈໍານວນຫຼາຍເທົ່າທີ່ເປັນໄປໄດ້ໃນເມັດສໍາລັບການຟື້ນຟູ DNA ສູງສຸດ.

ການແກ້ໄຂຂໍ້ມູນຂອງ Nuclei Lysis

●ສ່ວນປະກອບຂອງ Nuclei Lysis Solution

ການແກ້ໄຂບັນຫາຂອງ nuclei lysis ໂດຍປົກກະຕິມີເຄື່ອງຊັກຜ້າ (ຄືກັບ SDS), ເຄື່ອງປ້ອງກັນ (ເຊັ່ນ: sdis - hcl), ແລະຕົວແທນ chelating (ຄື EDTA). ຜົງຊັກຟອກທີ່ລົບກວນເຍື່ອຈຸລັງແລະຊອງຈົດຫມາຍນິວເຄຼຍ, ປ່ອຍເນື້ອທີ່ຂອງເຊນ, ລວມທັງ DNA, ເຂົ້າໄປໃນທາງອອກ.

ing ບົດບາດໃນການທໍາລາຍຝາຫ້ອງ

ການແກ້ໄຂບັນຫາຂອງ Nuclei Lysis ບໍ່ພຽງແຕ່ເອົານ້ໍາທາດແລະ lipids, ທໍາລາຍຝາເຮືອນແລະຊອງຈົດຫມາຍທີ່ມີປະສິດຕິຜົນທີ່ຈະປ່ອຍ DNA ເຂົ້າໃນການແກ້ໄຂບັນຫາ.

ການຕໍ່ຕ້ານຂອງຈຸລັງ

ant ທີ່ມີທໍ່ສົ່ງທີ່ອ່ອນໂຍນເພື່ອຫລີກລ້ຽງການຕັດ DNA

ເມື່ອວິທີແກ້ໄຂ Lysi Lysis ຖືກເພີ່ມແລ້ວ, ຈຸລັງຕ້ອງໄດ້ຮັບການຍົກສູງຂື້ນຄ່ອຍໆເພື່ອຫລີກລ້ຽງການຕັດ DNA. ການຕັດສາມາດທໍາລາຍ DNA ເຂົ້າໄປໃນຊິ້ນສ່ວນນ້ອຍ, ເຊິ່ງສາມາດເປັນບັນຫາສໍາລັບຄໍາຮ້ອງສະຫມັກລຸ່ມນ້ໍາທີ່ຕ້ອງການສູງ - ນ້ໍາຫນັກ - ນ້ໍາຫນັກ DNA.

●ຮັບປະກັນຜົນສະທ້ອນທີ່ສົມບູນ

ຜົນສໍາເລັດໃນການຮັບປະກັນຮັບປະກັນວ່າຈຸລັງທັງຫມົດຖືກຮ້ອງຟ້ອງ, ການຟື້ນຕົວຂອງ DNA ທີ່ມີປະໂຫຍດສູງສຸດ. ນີ້ສາມາດບັນລຸໄດ້ໂດຍການເປັນທໍ່ທີ່ອ່ອນໂຍນຫຼື vortexing ວິທີແກ້ໄຂທີ່ມີຄວາມໄວຕ່ໍາ.

ບ່ອນຢູ່ໃນຈຸລັງ lyne

●ການຕັ້ງຄ່າອຸນຫະພູມສໍາລັບບ່ອນ

ຈຸລັງ resuspended ແມ່ນ incubated ໃນອຸນຫະພູມສະເພາະເພື່ອຮັບປະກັນ lysis ຄົບຖ້ວນ. ນີ້ມັກຈະເຮັດຢູ່ທີ່ 37 ° C ເຖິງ 55 ° C. ອຸນຫະພູມແລະໄລຍະເວລາທີ່ແນ່ນອນສາມາດແຕກຕ່າງກັນໄປຕາມອະນຸສັນຍາແລະຄວາມຕ້ອງການສະເພາະຂອງຊຸດສະແດງ DNA ທີ່ຖືກນໍາໃຊ້.

●ໄລຍະເວລາທີ່ຕ້ອງການສໍາລັບ lysis ທີ່ມີປະສິດຕິພາບ

ໄລຍະເວລາປົກກະຕິສໍາລັບບ່ອນທີ່ຢູ່ໃນລະຫວ່າງ 20 ຫາ 30 ນາທີ, ແຕ່ວ່າມັນສາມາດປັບໂດຍອີງໃສ່ປະສິດທິພາບຂອງຈຸລັງ lysis ທີ່ສັງເກດເຫັນ. ບ່ອນທີ່ຍາວນານອາດຈະມີຄວາມຈໍາເປັນສໍາລັບ lysis ທີ່ສົມບູນແຕ່ຄວນມີຄວາມສົມດຸນກັບຄວາມສ່ຽງຂອງ DNA ການເຊື່ອມໂຊມຂອງ DNA.

ຄວາມເຢັນໃຫ້ອຸນຫະພູມຫ້ອງ

●ຄວາມສໍາຄັນຂອງຄວາມເຢັນຄ່ອຍໆ

ຫຼັງຈາກບ່ອນ, lysate ແມ່ນຄ່ອຍໆເຢັນລົງກັບອຸນຫະພູມຫ້ອງ. ຄວາມເຢັນຂອງຄ່ອຍໆຊ່ວຍໃນການສະຖຽນລະພາບຂອງ DNA ແລະຫຼຸດຜ່ອນຄວາມສ່ຽງຂອງຄວາມຮ້ອນຂອງອາການຊືມເສົ້າ, ເຊິ່ງອາດຈະເຮັດໃຫ້ DNA dna.

●ຜົນກະທົບຕໍ່ DNA ແລະ debris cellular

ຄວາມເຢັນໃຫ້ອຸນຫະພູມຫ້ອງອະນຸຍາດໃຫ້ມີເສດເຫຼືອຂອງຈຸລັງໃນການສະແດງ, ເຮັດໃຫ້ມັນງ່າຍທີ່ຈະແຍກ DNA ໃນຂັ້ນຕອນຕໍ່ໄປ. ສິ່ງນີ້ຍັງຊ່ວຍໃຫ້ມີຄວາມສະຖຽນລະພາບຂອງ anzyme ແລະອໍານວຍຄວາມສະດວກໃນການກໍາຈັດ RNA ໂດຍການຮັກສາ rnase.

ການເພີ່ມຂອງວິທີແກ້ໄຂ Rnas

●ຈຸດປະສົງຂອງ Rnase ໃນຂັ້ນຕອນ

ການແກ້ໄຂ Rnase ແມ່ນຖືກເພີ່ມເຂົ້າໃນ degrade rna, ເຊິ່ງສາມາດເປັນລະບຽບຖ້າບໍ່ດັ່ງນັ້ນແມ່ນບໍລິສຸດກັບ DNA ແລະແຊກແຊງການນໍາໃຊ້ລຸ່ມ. Rnes ເລືອກ Digests Dignests, ເຮັດໃຫ້ DNA ຢູ່ໃນໄລຍະ.

●ປ້ອງກັນການປົນເປື້ອນ RNA

ການປ້ອງກັນການປົນເປື້ອນຂອງ RNA ແມ່ນມີຄວາມສໍາຄັນສໍາລັບການສະຫມັກທີ່ຕ້ອງການ DNA ບໍລິສຸດ, ເຊັ່ນ PCR ແລະ Cenevennes. ການປິ່ນປົວທີ່ບໍ່ມີປະໂຫຍດຮັບປະກັນວ່າ DNA ທີ່ໂດດດ່ຽວແມ່ນບໍ່ເສຍຄ່າຈາກສິ່ງປົນເປື້ອນ RSNA.

ການຊໍາລະລ້າງຂອງ DNA

●ວິທີການສໍາລັບແຍກ DNA ຈາກສ່ວນປະກອບຂອງຈຸລັງອື່ນໆ

ມີຫລາຍວິທີທີ່ສາມາດນໍາໃຊ້ເພື່ອເຮັດຄວາມຊໍາລະລ້າງ DNA ຈາກ lysate. ເຫຼົ່ານີ້ປະກອບມີ phenol - ການຂຸດຄົ້ນ chloroform, prezaol precipitation, ແລະການນໍາໃຊ້ຖົງ E. coli DNA KITs. ແຕ່ລະວິທີການມີຂໍ້ດີແລະຂໍ້ເສຍໃຈຂອງມັນ, ພ້ອມດ້ວຍຖົງມືການຄ້າທີ່ສະເຫນີຄວາມສະດວກສະບາຍແລະມີຜົນໄດ້ຮັບທີ່ສອດຄ່ອງ.

●ການພິຈາລະນາສໍາລັບຄວາມບໍລິສຸດ DNA

ຄວາມບໍລິສຸດແມ່ນປັດໃຈທີ່ສໍາຄັນສໍາລັບຄວາມສໍາເລັດຂອງການນໍາໃຊ້ຕອນລຸ່ມ. ເຄື່ອງມືການຄ້າ, ເຊັ່ນ: ຊຸດການປິ່ນປົວດ້ວຍຈຸລັງ E. Coli DNA Kit, ຖືກອອກແບບມາເພື່ອໃຫ້ຜົນຜະລິດສູງ - dna ທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດ - ການກໍາຈັດໂປຣຕີນ, lipids, ແລະສິ່ງປົນເປື້ອນອື່ນໆ.

ການເກັບຮັກສາແລະການຈັດການຂອງ DNA ທີ່ໂດດດ່ຽວ

ant ການປະຕິບັດທີ່ດີທີ່ສຸດສໍາລັບການເກັບຮັກສາ DNA

ເມື່ອບໍລິສຸດ, DNA ຄວນເກັບໄວ້ໃນ buffer ທີ່ເຫມາະສົມ, ຄືກັບ te buffer, ທີ່ - 20 ° C ຫຼື - 80 ° C ຫຼື Long Long. ຫລີກລ້ຽງການແຊ່ແຂງເລື້ອຍໆ - ຮອບວຽນທີ່ລະບຶກທີ່ມັນສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດການເຊື່ອມໂຊມຂອງ DNA.

●ຮັກສາຄວາມສົມບູນຂອງ DNA ສໍາລັບການນໍາໃຊ້ໃຕ້ຕອນລຸ່ມ

ເພື່ອຮັກສາຄວາມສົມບູນຂອງ DNA, ໃຫ້ໃຊ້ຢາທີ່ເປັນຫມັນ, nuclease - ທໍ່ແລະວິທີແກ້ໄຂຟຣີ. ນີ້ຮັບປະກັນວ່າ DNA ຍັງບໍ່ທັນໄດ້ໃຊ້ງານແລະເຫມາະສົມກັບການສະຫມັກເຊັ່ນ: ການປິດ, ລໍາດັບ, ແລະ PCR.

ກ່ຽວກັບສີຟ້າ

Jiangsu Hillgene ໄດ້ສ້າງຕັ້ງສໍານັກງານໃຫຍ່ຂອງຕົນ (10,000㎡ GMP Bills ແລະ R & D) ໃນເມືອງຫາດ, ແລະ Shanghai, ການຂະຫຍາຍເຄືອຂ່າຍການຜະລິດຂອງມັນ. ສະຖານທີ່ North Carolina ໃນສະຫະລັດກໍາລັງກໍ່ສ້າງຢູ່ໃນປະຈຸບັນແມ່ນກໍາລັງກໍ່ສ້າງ, ແຜ່ຂະຫຍາຍໄປຍັງມີທົ່ວໂລກຂອງມັນ. Hillgene ໄດ້ສ້າງເສັ້ນທາງດ່ວນສໍາລັບການພັດທະນາຜະລິດຕະພັນບໍາບັດຈາກຈຸລັງ, ດ້ວຍການຈັດສົ່ງຂອງອາຊິດ nucleic, ການພັດທະນາໂດຍການພັດທະນາຟຣີ, ແລະການທົດສອບໃນຂະບວນການປິດ. ຜະລິດຕະພັນ BlueKit ຖືກອອກແບບມາເພື່ອຄວບຄຸມຄຸນະພາບ, ຮັບປະກັນຄວາມສໍາເລັດຂອງການປະດິດສ້າງແບບປິ່ນປົວດ້ວຍຈຸລັງ. How do you isolate DNA from E. coli?