Isolating DNA vun E.comi ass eng fundamental Prozedur zu Molekulär Biologie. Dësen Artikel gëtt du de ganzt e komplette Prozess dowonnt, a wäerte et spenden besserem Aspekter, a Reaktiv Archiounen vun der Prozedut. Egal ob Dir e Saisonsfuerscher sidd oder en Newcomer an de Labo, dëse Guide gëtt eng wäertvoll Ressource.
Virbereedung vun der Zell Suspension
● Sammlung vun E. Coli Zellen
Den éischte Schrëtt an isoléierend DNA vun E. Coli involvéiert d'Bakteriellen Zellen ze sammelen. Dëst erfuerdert normalerweis d'E. Korel ze wuessen an eng gëeegent Flëssegkeet Medium bis et den logarithmesche Wuesstumsphas erreecht gëtt. Den Taart gëtt, well den Zellen an dëser Phili deiolleken a méi wäert leien, déi an enger méi héije Dong fonctionnéiert gëtt.
● resetpending Zellen an engem passenden Puffer
Gesammelt Zellen ginn dann an engem passenden Puffer resüpp. Eng gemeinsam Wiel ass en Tris - Dokter (TE) Puoking, deen hëlleft d'Integritéit vun der DNA während der DNA wärend dem DNA Erfolleg ze halen. The Bucken srecklech futtizechtesch Zweckten: Et huet d'Phil erstallt unzeschaffen, déi anescht seelen Don hunn an entvisem on monicrati gi soncic Ëmstänn näischt kolléieren, an en opzraden iwwerdennt Uegenmatsch.
Zentrifugatioun fir Pelletszellen
● Parameter fir Zentrifugatioun (Geschwindegkeet an Zäit)
Nodeems d'Zellen op der Sekter virfallten erëmfallten op der Susiglug vum Pell erëmfrol ginn. Zentrifugéierunggeschwindegkeet an Zäit si kritesch Parameteren. TZUZENT CENTR IFGugatioun gëtt op ongeféier 4000 - 6.000 g fir 10 Minutten um 4 ° C. Dëst garantéiert datt d'Zellen eng décke Pellets um Enn vum Zentrifuge Rouer bilden.
● Wichtegkeet vun enger richteger Pelling
Richteg Pelling ass wesentlech fir d'Zellen aus dem Wuestum mëttel- an aner schluellen Komponenten ze trennen. Eng Main - geformt Pellet maachen déi weiderfollegt Schrëtt, a méi effizient, garantéiert minimal Verloscht vun den Zellen. Do, huet en aneren Dënschden.
Entfernung vum Supernatant
● Techniken fir iwwernatierlech Entfernung
Wann d'Zellen pelléiert sinn, ass de Supernatant (d'Flëssegkeet iwwer dem Pellet) muss suergfälteg geläscht ginn ouni d'Zellpellet ze stéieren. Dëst gëtt normalerweis mat Hëllef vun engem Mikropipette gemaach. Et ass entscheedend fir dëse Schrëtt virsiichteg ze maachen fir all Zellen ze verléieren.
● Garantéiere minimal Verloscht vun der Zellpellet
Sécheren minimale Verloscht vun der Zellpelleten ëmfaasst virsiichteg Pipeting an, wann néideg, multiple Ronne vun der Zentrifugatioun an iwwernünfteg Entfernung. D'Zil ass sou vill Zellen wéi méiglech an der Pellet fir maximal DNA Erhuelung ze halen.
Zousatz vun Atomklies Léisung
● Komponenten vun der Nuklei Lysis Léisung
D'Nuclei Lysis-Léisung enthält normalerweis eng Spettung (wéi SDS), e Puffer (wéi tris - hcl), an e chelatative Agent). Den Detitergent stéiert déi Appstuf a nuklearen Envoderen, déi d'DNA an d'Léisung bréngen.
● Roll fir Zellmaueren ze briechen
D'Nuclei Lisile-Léisung liese sech net nëmme just déi Zellmassen, awer och denaturriede Proteins a Louche an nuklearenden DNA an nuklearenden DNA an nuklearenen DNA AN DER Léisung.
Resuspension vun Zellen
● Sankt Pipets fir DNA ze vermeiden
Wann d'Nuclei-Lyse Léisung derbäi gëtt, musse d'Zellen retpending resetpended inn opgedeelt fir DNA ze vermeiden. Deckel kann d'Dann an méi kleng Fragmenter briechen, déi problematesch Uwendungen sinn, déi héich sinn, déi héich sinn - Molekular - Molekular -
● Stellt komplett Resuspensioun
Komplett Resuspension Assuréiere datt all Zellen déi uniforméiert ginn, maximal DNA Erhuelung. Dëst kann duerch sanft Pipeting erreecht ginn oder d'Léisung d'Léisung op enger gerénger Geschwindegkeet.
Inkubatioun op Lyse Zellen
● Temperatur Astellunge fir Inkubatioun
Déi resuspended Zellen sinn op enger spezifescher Temperatur incubéiert fir komplett Lysis ze garantéieren. Dëst gëtt normalerweis op 37 ° C bis 55 ° C gemaach. Déi genau Tematur an Dauer kënnen ofhängeg vun der Pr1.eg- an déi speziell Ufeschter vun der Dna-Isoléierungsfiter benotzt ginn.
● Durratioun erfuerderlech fir effektiv Lysis
Dat typeschen Dauer fir Inububatioun ass tëscht 20 bis 30 Minutte, awer et kann op d'Effizis ugeet sinn. Verlängerung Inkubatioun kann noutwendeg sinn fir komplett Lysis ze sinn, awer sollt géint d'Risiko vun der DNA Degradatioun sinn.
Killt op Raumtemperatur
● Wichtegkeet vu graduellen Ofkillung
No Inkubatioun, de Lysate gëtt lues a lues a Raumtemperatur gekillt. Gradum Centring hëlleft Iech an der Taardancéieren an en net ze stabiliséieren an d'Risiken vum Rass vum Trammatio deen d'Dran verfolg.
● Effekter op DNA an Cellular Dreck
Ofkillen an Raumtemperatur erlaabt d'Cellular Dreck zu Nidderschlag ze maachen, et méi einfach ze trennen fir d'DNA an der spéiderer Schrëtt ze trennen. Dëst hëlleft dat dacks fir déi Erwegitiounen ze stabiliséieren an d'Tournois vum RNASE Banke vu RNasation.
Zousatz vun rnase Léisung
● Zweck fir rnase an der Prozedur
RNYS-Léisung gëtt bäi der Vegrade RNA bäigefüügt, déi anescht co - purifify mat der DNAstrees mat Downstreams Uwendungen. RNASE OFACTIOUN OVERESSIVE RNA, HUN DER DNA intakt.
● Vermeit RNA Kontaminatioun
Verhale RNA Kontaminatioun ass déi ursprénglech fir d'Applikatiounen, déi net reng Dna erfëllen, sou wéi PCR a Sequencing. D'RNNEY Verwaltungsgesellschaften datt déi isoléiert DNA fräi vu RNA kontaminanten ass.
Rengheet vun DNA
● Methoden fir DNA vun aneren Cellular Komponenten trenne
Verschidde Methode kënne benotzt gi fir DNA aus dem Lysate ze puréieren. Dëst bréngt Phhoml - Groussproduktioun, Etai nach eng Commitiko Nidderschléi an zu eisem kommerziell E. Kënschtméiert. All Method huet seng Pros a Cons, mat kommerziellen Kits accessibelst a konsequent Resultater.
● Begrëfferungen fir DNA Pwederzwüken
Rengheet ass e kritesche Faktor fir den Erfolleg vun der Downstream Uwendungen. Kommeits sinn esou wéi d'Zellterrace E.roni Dumcait gehitéiert, goufen dëst konsuméiert fir eist Woch Panifer ze gesinn.
Späichere an Ëmgang mat isoléiert DNA
● Bescht Praktiken fir DNA ze späicheren
Soubal'6Rannen, denen, sollen an engem geschëcht oder einfach Puppel geleng ginn, wéi en Puffer, am - 80 ° CRPASEEN. Vermeit heefeg Freeze - Thaw Zyklen wéi se DNA Degradatioun verursaachen.
● Erhalen DNA Integritéit fir Downstream Uwendungen
Den DNA Integritéit z'erhalen, notzen, Culee, Canle Frey Free Tubes a Léisungen. Dëst ass et zu datt d'Uwendunge bleift bleift bleift wéi d'Ustrentninéiert bleiwen a gëminellte bis zu gratis fir Uwendunge wéi se préparar.
IwwerBluekit
Am Leschte Netzwierk Land huet de Sëtz op "GGP Planzen an RP Kierfänn, eng Langhourifferen an Ëmfroebuerg an hir Fabrikhi, an där Drawath. An de Wiichenhoule a Shrakhi, an der Wuhhhai a Gühourg an de Wueder vum Jueghou, an der Wierfehand, an der Wierfehand, an der Wollekhoubesurs, an der Wollekhouofrees a Quakhi, an der Wierfelstau, an der Wäisshehai, an der Wuhhi ... an der Wierfel, an der Wollekhoubesursaach, an der Wollekhoubesursaach, an der Wäisshahi, an der Wäisshehehrees an der Wäisshehen. De Norde Carrodina Site an der US ass de B. un iwwerrag. Nach weider Schwiereg. Hillgeene huet en ausdrécklechen Wee gebaut fir Mellular Therapie Produkter ze entwéckelen, aus Entdeckung fir d'Liwwerung, mat der Plattformen fir Kultcoriséierung, Zousaz, Susrel, zougemaach, zougemaach, zougemaach fir d'Hillgeene huet en ausdrécken en ausdrécken Luucht Produkter sinn fir Qualitéits Kontroll entworf, garantéiert den Erfolleg vun derellter Theruler Therptionen Innovatiounen ze garantéieren.
Postzäit: 2024 - 09 - 05 14:47:03
