Э. Колинин ДНКсынан келип чыккан ДНК - бул молекулярдык биологиянын негизги тартиби болуп саналат. Бул макала сизди толугу менен жүрөт, бул илимдин жана жол-жобонун практикалык аспектилерин жана сизди түшүнүүнү камсыз кылат. Сиз тажрыйбалуу изилдөөчү же лабораторияга келбей калсаңыз, бул колдонмо баалуу ресурс болот.
Клетканын токтотулушун даярдоо
E. E. Coli клеткаларынын жыйнагы
ДНКны E. Колинин изоляциялоосунун биринчи кадамы бактериялык клеткаларды чогултууну камтыйт. Бул, адатта, Логарифмдик өсүү баскычына жеткенге чейин, Э. Колинин өсүп-өнүгүшүн талап кылат. Бул фазадагы клеткалар лифтейнерге эң көп жашоого жөндөмдүү жана жеңилирээк болгондуктан, убакыт талап кылынат.
● тиешелүү буфердеги клеткаларга туруштук берүү
Андан кийин чогултулган клеткалар ылайыктуу буферка жайланышкан. Жалпы тандоо болуп саналат, ал эми казып алуу процессинде ДНКнын бүтүндүгүн сактоого жардам берген Эдта (TE) буфер. Буфер бир нече максатты көздөйт: ДНКны буза турган дене-сентябрь айларын буза турган жана андан кийинки фнакматикалык реакциялар үчүн оптималдуу иондук чөйрөнү камсыз кылат.
Пеллет клеткаларына центрифтизация
Centrifugation үчүн параметрлер (ылдамдык жана убакыт)
Клеткаларды жардырбагандан кийин, токтото туруу клеткаларды пеллетке чейин центрифугалоодон өтөт. Центрифугалоо ылдамдыгы жана убакыт сынчыл параметрлер. Адатта, центрифугалоо 4000ге жакын жерде 4000ге чейин жүргүзүлөт - 6,000 гр 10го - Бул клеткалардын центрифуга түтүктүн түбүндө тыгыз пеллетти түзөрүн камсыз кылат.
Pull Пелелдин мааниси
Туура дүлөөсү өсүү орто жана башка эриген компоненттерден бөлүп-жаруу үчүн маанилүү. Жакшы - Пеллек, кийинки кадамдарды баса белгилеп, андан кийинки кадамдарды жеңилдетет жана натыйжалуу, ошондуктан клеткалардын минималдуу жоголушун жана эң көп максималдуу түшүмдүүлүктү камсыз кылат.
Супернатант кетиши
Supernatant under revoval үчүн техникалар
Клеткалар чочколор, ашкере (Пеллеттин үстүндөгү суюктук) клетка пеллетти бузбастан кылдаттык менен алынып салынышы керек. Бул, адатта, микропипттти колдонуу менен жасалат. Бул кадамды бир аз клеткаларды жоготпош үчүн кылдаттык менен аткаруу өтө маанилүү.
● Клетканын минималдуу жоголушун камсыз кылуу
Клетканын минималдуу жоголушун камсыз кылуу кылдат пеллектти, зарыл болсо, центрифугалия жана ашыкча алып салуу кирет. Максаты - ДНКны калыбына келтирүү үчүн пеллерге мүмкүн болушунча көп клеткаларды сактоо.
Нуклеи Лизис чечимин кошуу
Nuclei Lysis чечиминин компоненттери
Нукюмдун лицисинин чечими, адатта, жуугуч (SDS сыяктуу), буфер (мисалы, Tris - HCL) жана шелялык агент (EDTA). Жуунгуч клетка кабыкчасын жана ядролук конвертти бузуп, уюлдук конверттөөнү, анын ичинде ДНКны, анын ичинде ДНКны, чечимди чыгарат.
● Клетканын дубалын бузууда роль ойнойт
ДНК дубалдарын жана ядролук кабыкчаларды жана ядролук конверттерди жана өзөктүк конверттерди жана өзөктүк конверттерди бир-бирден бөлүп-жаруу үчүн эч клетка кабыкчасын гана эмес, ядролук мембрананын гана эмес, данатуризациялоонун, ошондой эле протеинддер менен липиддер, ДНКны бошотуу үчүн натыйжалуу бузулат.
Клеткалардын репсиясы
● ДНК кабыгынан алыс болуңуз үчүн, жумшак пипетинг
Днаны кыркуудан сактануу үчүн, ядролук лизис кошулган бирден кийин, клеткалар акырындык менен жесирлеп турушу керек. Кырсык, ДНКны кичинекей бөлүктөргө бөлүп салса болот, бул бийиктикти талап кылган төмөндөгүдөй доорностиканын төмөндүгү үчүн көйгөйлүү тиркемелер үчүн көйгөйлүү болот.
● Толук резезинди камсыз кылуу
Толугу менен жаңылануу бардык клеткалардын бир калыпты, ДНКны калыбына келтирүүнү максималдаштырат. Буга жумшак түтүкчөлөргө же андан жогорку ылдамдыкта чечим кабыл алууга болот.
Лизис клеткаларына инкубация
● Инкубация үчүн температура жөндөөлөрү
Везенцияланган клеткалар толук лизаны камсыз кылуу үчүн белгилүү бир температурада инкубацияланат. Бул, адатта, 37 ° C чейин 55 ° C чейин жасалат. Төшөктүн так жана узактыгы протоколго жана ДНК изоляциялык топтомунун конкреттүү талаптарына жараша өзгөрүшү мүмкүн.
● Натыйжалуу лезис үчүн талап кылынган узактыгы
Инкубациянын типтүү узактыгы 20дан 30га чейин, бирок байкалган клетка лизисинин натыйжалуулугунун негизинде аны тууралоого болот. Толук лазалар үчүн узакка созулган инкубация керек, бирок ДНК деградация тобокелдигине каршы тең салмактуу болушу керек.
Бөлмө температурасына муздатуу
● акырындык менен муздатуунун мааниси
Инкубациядан кийин, лизат бара-бара бөлмө температурасына чейин муздайт. Акырындык менен муздатуу ДНКны турукташтырууга жардам берет жана ДНКны бузуп кетиши мүмкүн болгон жылуулук шок коркунучу минималдаштырууга жардам берет.
Dna жана уюлдук таштандыларга эффекттер
Бөлмө температурасына муздатуу уюлдук таштандыларга чейин ДНКны кийинки кадамдарга бөлүп коюу оңойго турууга мүмкүнчүлүк берет. Бул дагы бир ферменттин иш-аракеттерин турукташтырууга жардам берет жана RNAны RNASE дарылоосуна көмөктөшөт.
Rnase чечимин кошуу
Rnase Rnase тартиби
RNase Solution Rna RNAга кошулат, башкача co - ДНК менен тазалап, төмөндөгүдөй дранттык тиркемелерге тоскоол болот. Rnase Тандалган РНКны сиңирип, ДНКны бузуп таштоо.
Rna булгануунун алдын алуу
RNA булганышына жол бербөө ПКО жана ырааттуулук сыяктуу таза ДНК талап кылган өтүнмөлөр үчүн өтө маанилүү. Рнесаны дарылоо обочолонгон ДНК RNA булгоочу заттардан бошотулгандыгын камсыз кылат.
ДНКны тазалоо
Dna ДНКны башка уюлдук компоненттерден бөлүү ыкмалары
ДНКдан лизаттын днасын тазалоо үчүн бир нече ыкмаларды колдонсо болот. Буларга фенол кирет - Ар бир ыкма өзүнө ыңгайлуулукту жана ырааттуу натыйжаларды сунуш кылган коммерциялык комплекттерди сунуш кылат.
Dna DNA тазалыгын карап чыгуу
Тазалык - бул ылдый жагындардын ийгилиги үчүн критикалык фактор. Коммерциялык комплекттер, мисалы, клетка терапиясы, мисалы, клетка ДНК тобу сыяктуу, белокторду, липиддерди жана башка булгоочу заттарды натыйжалуу алып салуу менен, тазалыктын натыйжасында иштелип чыккан.
Сактоо жана обочолонгон ДНКны сактоо
● ДНК сактоого мыкты тажрыйбалар
ДНКны тазалоо үчүн, ДНКга ылайыктуу буферге, 20 ° C же - 80 ° C Long - Мөөнөтү сактоочу жай үчүн сакталышы керек. Тез-тез тоңдургула - ДНК деградациясына алып келиши мүмкүн.
Dnonstream колдонмолоруна DNA бүтүндүгүн сактоо
ДНКнын кынтыксыздыгын сактоо үчүн, стерилденген, нуклеаз - Эркин түтүктөрдү жана чечимдерди колдонуу. Бул ДНКнын булганбаган жана клондоштуруу, ырааттуулуктар жана ПКК сыяктуу колдонмолорго ылайыктуу деп эсептейт.
ЖөнүндөBluekit
Цзянсу Хиллжен Сучжоу районунда, Сучжоу районунда жайгашкан Шенже Лакух көлүнүн жээгиндеги Шенжен шаарындагы жана Шанхай шаарындагы эки өндүрүш жайлары, анын өндүрүш тармагындагы эки өндүрүш жайлары, анын шаңдуу жайларда жайгашкан. АКШдагы Түндүк Каролина сайты учурда курулуп жатат, анын глобалдык катышуусун андан ары жайылтууда. Хиллжене уюлдук терапия өнүмдөрүн, табылгыс продуктуларын, табылгысына, нуклеин кислоталык өндүрүшкө, сыворстивдик сыворстивдик мажбурлоо, жабык процесстерди өнүктүрүүгө жана QC тестирлөөгө көмөктөшүү үчүн экспресс жолду курду. Bluekit өнүмдөрү целлюлдук терапия инновацияларынын ийгилигин камсыз кылуу үчүн сапатты контролдоо үчүн иштелип чыккан.
Пост убактысы: 2024 - 09 - 05 14:47:03
