DNY DNA ji E. COLI di biyolojiya molekular de prosedurek bingehîn e. Vê gotarê dê bi tevahî pêvajoyê re bimeşe, gav û ravekirinên berfireh peyda dike, ku hûn zanist û aliyên pratîkî yên pêvajoyê fêm dikin. Ka hûn lêkolînerek demsalî an nûjenek ji kedê re ne, ev rêber dê çavkaniyek hêja be.
Amadekirina rawestandina hucreyê
● Collection of Hucreyên E. Coli
Cara yekem di DNA de ji DNA ji E. COLI tê berhevkirina hucreyên bakterî. Ev bi gelemperî hewce dike ku E. Coli di navbêna xwerû ya maqûl de mezin bibe heya ku ew bigihîje qonaxa mezinbûna logarithmîk. Demjimêr girîng e ji ber ku hucreyên di vê qonaxê de herî maqûl û hêsantir e ku Lyse, ku dê di encama DNA-ya bilindtir de encam bibe.
● Hucreyên nûvekirinê li bufferek maqûl
Hucre hucreyên berhevkirî piştre li bufferek maqûl têne nû kirin. Hilbijartinek hevpar TRIS-ê ye - EDTA (TE) Buffer, ku alîkariya domandina yekrêziya DNA di dema pêvajoya derxistinê de dike. Buffer gelek armancan xizmet dike: Ew ph-ê star dike, kationên dizalent ên ku dikarin DNA hilweşînin, û ji bo reaksiyonên enzymatîk ên paşîn ên ionîk peyda bikin.
Centrifugation to hucreyên pellet
● Parameter ji bo centrifugation (zû û dem)
Piştî ku hucreyan ji nû ve sazkirin, sekinîn ji hêla centrifugation ve tê girêdan. Leza centrifugation û dema pîvanên krîtîk in. Bi gelemperî, centrifugation li dora 4,000 - 6,000 g ji bo 10 - 15 hûrdeman li 4 ° C tê kirin. Ev piştrast dike ku hucre li binê tubê navendî pelletek hişk ava dike.
● Girîngiya pelleting rast
Pelên rastîn pêdivî ye ku hucreyên ji mezinbûna navîn û pêkhateyên din ên soluble veqetîne. Pelek baş - Peletek damezirandî gavên paşê hêsantir û hêsantir dike, ji bo windabûna kêmtirîn hucreyan û, ji ber vê yekê, hilberîna DNA ya herî zêde.
Rakirina supernatant
● Teknîkên ji bo rakirina supernatant
Piştî ku hucreyan pelçiqandî ne, supernatant (liquid li jor pellet) divê bi baldarî were rakirin bêyî ku pellet hucreyê teng bike. Ev bi gelemperî tête bikar anîn ku mîkrokêşek heye. Ew girîng e ku vê gavavêtinê bi rengek berbiçav biparêze da ku hûn hucreyan winda nekin.
● duristkirina windakirina kêmbûna pellet
Pêkirina windakirina mestir a pellet hucreyê di nav de pipetting hişyar û, heke pêwîst be, pir pêdivî ye ku piraniya centrifugasyon û rakirina supernatant. Armanc ev e ku meriv li ser pellet ji bo başkirina DNA ya herî zêde gengaz be.
Zêdekirina çareseriya lîseya nuclei
● pêkhatî çareseriya çareseriya Nuclei Lys
Solutionareseriya Nuclei Lys bi gelemperî vedigire (mîna SDS), buffer (wek tris - hcl), û ajokerek chelating (wek EDTA). Detergent membrana hucreyê û zerfê navokî hilweşîne, serbestberdana naverokên hucreyî, di nav de DNA jî di çareseriyê de.
● Di şikestina dîwarên hucreyê de rol
Solutionareseriya Nuclei Lys ne tenê Membrana hucreyê lê di heman demê de proteîn û lîpîdan jî dixapîne, bi rengek bi bandor hilweşîne dîwarên hucreyê û zerfên atomî da ku DNA di çareseriyê de azad bike.
Resuspension of hucreyan
● Pipetting nerm da ku DNA Shearing dûr bikin
Piştî ku çareseriya Lys-a Nuclei lê zêde bike, pêdivî ye ku hucre bi nermî were vesazkirin da ku ji DNA şilandî dûr bixin. Shearing dikare DNA di nav perçeyên piçûktir de hilweşîne, ku dikare ji bo serlêdanên jêrîn ên ku hewceyê bilind e - Molekular - Molekular - Wehd DNA.
● dabînkirina resuspension temam
Resuspensiona bêkêmasî piştrast dike ku hemî hucre bi yekdengî ve tê qewirandin, başkirina DNA ya herî zêde ye. Ev dikare bi pipetting nermî ve were bidestxistin an çareseriya çareseriyê bi leza kêm.
Incubation to hucreyên Lyse
Settings Mîhengên Germê ji bo Incubation
Hucreyên nûvekirinê li germahiyek taybetî têne veqetandin da ku lîza bêkêmasî bicîh bikin. Ev bi gelemperî li 37 ° C heya 55 ° C tête çêkirin. Germahiya rastîn û dirêjahiya ku dikare li gorî protokola û daxwazên taybetî yên kîteya DNA ya ku tê bikar anîn cûda dibe.
● Demjimêra ku ji bo lîza bi bandor hewce dike
Demjimêra tîpîk a ji bo incubation di navbera 20 û 30 hûrdeman de ye, lê ew dikare li ser bingeha karîgeriya hucreyê were dîtin. Dibe ku incubation dirêjkirî ji bo lîza bêkêmasî hewce be lê divê li dijî xetera hilweşîna DNA were hevseng kirin.
Germbûna germahiya odeyê
● Girîngiya germbûna hêdî
Piştî incubation, Lysate hêdî hêdî li germahiya odeyê germ dibe. Rewşa hêdî hêdî di stabîlkirina DNA de alîkar dike û xetera şokê germê kêm dike, ku dikare potansiyel DNA hilweşîne.
● bandorên li ser DNA û Kevirên Cellular
Cooling to germahiya odeyê dihêle ku çirûskên hucreyî bişewitîne, ew hêsantir dike ku DNA di gavên paşê de veqetîne. Ev jî ji bo aramkirina çalakiyên enzîmê dibe alîkar û hêsankirina rakirina RNA bi dermankirina rnase.
Zêdekirina çareseriya rnase
● Armanca rnase di prosedûrê de
Solutionareseriya Rnase ji DNA-yê din re tê zêdekirin Rnase bijare RNA-ê RNA, DNA bêserûber hiştin.
● Pêşîlêgirtina têkçûna RNA
Pêşîlêgirtina têkçûna RNA ji bo serlêdanên ku DNA paqij, wekî PCR û rêziknameyê hewce dike girîng e. Tedawiya rnase piştrast dike ku DNA ya tecrîd ji rna konteyniran azad e.
Paqijkirina DNA
● Rêbazên ji bo veqetandina DNA ji pêkhateyên din ên hucreyî
Gelek rêbaz dikarin werin bikar anîn da ku DNA ji Lysate paqij bikin. Vana ev in Phenol - Extractionlasyona kloroform, etanol barîna etanol, û karanîna Bazirganî E. Coli DNA Kits. Her rêbazek xwedî prose û konsên xwe, bi kîtên bazirganî re tê pêşkêşkirin û encamên domdar.
● Fightions for purity DNA
Paqijker ji bo serfiraziya serlêdanên li jêrzemînê faktorek krîtîk e. Kîtekên bazirganî, wek nîgara hucreyê E. coli DNA Kit, ji bo bidestxistina bilind kirin - Paqijkirina DNA bi bandorkirina proteînan, lipîdan, û konteynerên din.
Stargeh û birêvebirina DNA ya Isolated
● Kiryarên çêtirîn ji bo hilanîna DNA
Carekê PURIFIED, DNA divê di bufferek guncan de were hilanîn, mîna buffer, li - 20 ° C an - 80 ° C an ji bo dirêj - termê hilanînê. Frequent Freeze dûr bikin - Cycles Thaw wekî ku ew dikarin bibin sedema DNA.
● Yekbûna DNA-yê ji bo serlêdanên li jêrzemînê dom dike
Ji bo domandina yekrêziya DNA, sterile, nuclease bikar bînin - tubes û çareseriyên belaş. Ev piştrast dike ku DNA ji bo serlêdanên wekî cloning, rêzikname, û pcr.
Ji dorBluKit
Jiangsu Hillgene navenda xwe saz kir (10,000) Navenda GMP û navenda R & D) li navçeya Wuzhou, Suzhou, bajarokê Lakeshore yê li Shenzhen û Shanghai, û tora çêkirina neteweyî ya neteweyî dirêj kir. Malpera Karolînaya Bakur niha di binê avahiyê de ye, pêşiya hebûna xwe ya global belav dike. Hillgene rêyek eşkere ji bo pêşxistina hilberên dermankirina hucreyî, bi platformên ji bo çêkirina nukleîk a asîdê, serum - pêşkeftina çandî, pêşkeftina pêvajoya girtî, û ceribandina QC. Berhemên bluekit ji bo kontrola kalîteyê hatine sêwirandin, serkeftina nûbûnên hucreyên hucreyî.
Demjimêra paşîn: 2024 - 09 - 05 14:47:03
