Diftating DNA ពីអ៊ីអ៊ីកូលីគឺជានីតិវិធីគ្រឹះនៃជីវវិទ្យាម៉ូលេគុល។ អត្ថបទនេះនឹងដើរអ្នកតាមរយៈដំណើរការទាំងមូលដោយផ្តល់នូវជំហានលម្អិតនិងការពន្យល់ដោយធានាថាអ្នកយល់ទាំងវិទ្យាសាស្ត្រនិងទិដ្ឋភាពជាក់ស្តែងនៃនីតិវិធី។ មិនថាអ្នកជាអ្នកស្រាវជ្រាវដែលមានរដូវឬអ្នកចំណូលថ្មីចំពោះមន្ទីរពិសោធន៍ទេនោះមគ្គុទេសក៍នេះនឹងក្លាយជាធនធានដ៏មានតម្លៃ។
ការរៀបចំការព្យួរកោសិកា
●ការប្រមូលផ្តុំកោសិកាអេឡិចត្រូនិច
ជំហានដំបូងក្នុងការញែក DNA ពីអ៊ីអ៊ីកូលីពាក់ព័ន្ធនឹងការប្រមូលកោសិកាបាក់តេរី។ នេះជាធម្មតាតម្រូវឱ្យមានការរីកលូតលាស់ E. កូឡីនៅក្នុងមធ្យមភាគរាវដែលសមរម្យរហូតដល់វាឈានដល់ដំណាក់កាលលូតលាស់នៃលោការីត។ ពេលវេលាមានសារៈសំខាន់ណាស់ដោយសារតែកោសិកានៅក្នុងដំណាក់កាលនេះមានលទ្ធភាពបំផុតនិងងាយស្រួលជាងលីសដែលនឹងមានលទ្ធផលដូច DNA ទទួលបានទិន្នផល DNA ខ្ពស់ជាងនេះ។
●ដោះស្រាយកោសិកាឡើងវិញក្នុងសតិបណ្ដោះអាសន្នសមស្របមួយ
ក្រឡាដែលប្រមូលបានបន្ទាប់មកត្រូវបានកំណត់ឡើងវិញនៅក្នុងសតិបណ្ដោះអាសន្នដែលសមរម្យ។ ជម្រើសទូទៅគឺទ្រីស - សតិបណ្ដោះអាសន្ន EDTA ដែលជួយរក្សាភាពសុចរិតរបស់ឌីអិនអេក្នុងកំឡុងពេលដំណើរការទាញយក។ សតិបណ្ដោះអាសន្ននេះមានបម្រើគោលបំណងជាច្រើន: វាមានស្ថេរភាពរបស់អេសបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវទ្រនាប់ដែលអាចធ្វើឱ្យខូចដល់ឌីអិនអេនិងផ្តល់នូវបរិយាកាសអ៊ីយ៉ឺសល្អបំផុតសម្រាប់ប្រតិកម្មអង់ស៊ីមជាបន្តបន្ទាប់សម្រាប់ប្រតិកម្មអង់ស៊ីមជាបន្តបន្ទាប់។
centrifugation ទៅក្រឡា Pletet
●ប៉ារ៉ាម៉ែត្រសម្រាប់ការកណ្តាល (ល្បឿននិងពេលវេលា)
បន្ទាប់ពីដោះស្រាយកោសិកាឡើងវិញការផ្អាកនេះត្រូវបានទទួលរងនូវការកណ្តាលទៅនឹងកោសិកា។ ល្បឿននិងពេលវេលាគឺជាពេលវេលាដ៏សំខាន់។ ជាធម្មតាការដាំដុះកណ្ដុរត្រូវបានអនុវត្តនៅប្រមាណ 4000 - 6,000 ក្រាមសម្រាប់ 10 - 15 នាទី 4 អង្សាសេ។ នេះធានាថាកោសិកាបង្កើតជា pellet តឹងនៅផ្នែកខាងក្រោមនៃបំពង់ entriffuge ។
notow នៃសារៈសំខាន់នៃការ pelleting ត្រឹមត្រូវ
Pelleting ត្រឹមត្រូវគឺចាំបាច់ដើម្បីបំបែកកោសិកាពីឧបករណ៍លូតលាស់មធ្យមនិងសមាសធាតុរលាយផ្សេងទៀត។ អណ្តូង - បានបង្កើតឡើងយ៉ាងខ្លាំងធ្វើឱ្យជំហានជាបន្តបន្ទាប់កាន់តែមានភាពងាយស្រួលនិងមានប្រសិទ្ធភាពជាងមុនដោយធានានូវការបាត់បង់កោសិកាអប្បបរមាហើយដូច្នេះទិន្នផលឌីអិនអេទទួលបានទិន្នផល DNA អតិបរមា។
ការយកចេញនៃអរុណសួស្តី
●បច្ចេកទេសសម្រាប់ការដកយកចេញរបស់អេឡិចត្រូនិច
នៅពេលដែលកោសិកាត្រូវបាន pelpeted, អរូបី, អរូបី (រាវខាងលើ pellet) ត្រូវតែត្រូវបានយកចេញដោយប្រុងប្រយ័ត្នដោយមិនរំខានដល់ក្រឡាក្រឡា។ នេះជាធម្មតាត្រូវបានធ្វើដោយប្រើ micropipette មួយ។ វាមានសារៈសំខាន់ណាស់ក្នុងការអនុវត្តជំហាននេះយ៉ាងម៉ត់ចត់ដើម្បីចៀសវាងការបាត់បង់កោសិកាណាមួយ។
●ធានានូវការបាត់បង់កោសិកាអប្បបរមាអប្បបរមា
ការធានាការខាតបង់កោសិកាអប្បបរមាពាក់ព័ន្ធនឹងបំពង់បង្ហូរទឹកប្រុងប្រយ័ត្នហើយបើចាំបាច់ជុំនៃការកណ្តាលនិងការដកយកចេញស្ត្រេត។ គោលដៅគឺរក្សាកោសិកាឱ្យបានច្រើនតាមដែលអាចធ្វើទៅបាននៅក្នុង Pellet សម្រាប់ការស្តារឌីអិនអេជ្ឈឹមឌីអេសអតិបរមា។
ការបន្ថែមដំណោះស្រាយលីសលីលី
●សមាសធាតុផ្សំនៃលីលីសូលុយស្យូស
សូលុយស្យុងនុយក្លេអ៊ែរជាធម្មតាមានសាប៊ូបោកខោអាវ (ដូចអេសឌីអេស) សតិបណ្ដោះអាសន្ន (ដូចជាទ្រីស - HCL) និងភ្នាក់ងារដែលមានក្បាល (ដូចអេឌីតា) ។ សាប៊ូបោកខោប្រាំការរំខានដល់ភ្នាសកោសិកានិងស្រោមសំបុត្រនុយក្លេអ៊ែរបញ្ចេញមាតិកាកោសិការួមទាំងឌីអិនអេទៅក្នុងដំណោះស្រាយ។
et តួនាទីក្នុងការបំបែកជញ្ជាំងក្រឡា
សារធាតុលីណូលីសសឺរសឺរមិនត្រឹមតែប្រើភ្នាសកោសិកាប៉ុណ្ណោះទេប៉ុន្តែថែមទាំងបដិសេធប្រូតេអ៊ីននិងជាតិខ្លាញ់ដែលបំបែកជញ្ជាំងកោសិកានិងស្រោមសំបុត្រនុយក្លេអ៊ែរដើម្បីបញ្ចេញ DNA ទៅក្នុងដំណោះស្រាយ DNA ទៅក្នុងដំណោះស្រាយ។
recuspension នៃកោសិកា
●បំពង់ធ្យូងថ្មសុភាពរាបសាដើម្បីចៀសវាងឌីអិនអេកាត់ឌីអិនអេ
នៅពេលដែលដំណោះស្រាយលីហ្សែលលីសស៊ីសត្រូវបានបន្ថែមក្រឡាចាំបាច់ត្រូវបានកំណត់ដោយថ្នមៗដើម្បីចៀសវាងឌីអិនអេកាត់ឌីអិនអេ។ ការកាត់អាចបំបែកឌីអិនអេទៅជាបំណែកតូចៗដែលអាចមានបញ្ហាសម្រាប់កម្មវិធីខ្សែទឹកខាងក្រោមដែលត្រូវការទឹកខ្ពស់ម៉ូលេគុល - ទំងន់ទំងន់។
●ធានាការលក់បន្តឡើងវិញពេញលេញ
ការរស់ឡើងវិញពេញលេញធានាថាកោសិកាទាំងអស់មានលក្ខណៈឯកសណ្ឋានឯកសណ្ឋាន DNA ស្តារឡើងវិញ។ នេះអាចត្រូវបានសម្រេចដោយបំពង់ខ្យល់ទន់ភ្លន់ឬការផ្តល់ដំណោះស្រាយក្នុងល្បឿនទាប។
ការភ្ញាស់នឹងលីត្រកោសិកាលីស
settings ការកំណត់សីតុណ្ហភាពសម្រាប់ការភ្ញាស់
កោសិការស់ឡើងវិញត្រូវបានដាក់នៅសីតុណ្ហភាពជាក់លាក់មួយដើម្បីធានាបាននូវលីសស៊ីសពេញលេញ។ នេះជាធម្មតាត្រូវបានធ្វើនៅ 37 អង្សាសេទៅ 55 អង្សាសេ។ សីតុណ្ហភាពនិងថិរវេលាពិតប្រាកដអាចប្រែប្រួលអាស្រ័យលើពិធីសារនិងតម្រូវការជាក់លាក់នៃឧបករណ៍ឯកោភាគតិចឌីអិនអេដែលត្រូវបានប្រើ។
●ថិរវេលាដែលត្រូវការសម្រាប់លីលីដែលមានប្រសិទ្ធភាព
រយៈពេលធម្មតាសម្រាប់ការភ្ញាស់នឹងការភ្ញាស់គឺមានចន្លោះពី 20 ទៅ 30 នាទីប៉ុន្តែវាអាចត្រូវបានកែតម្រូវដោយផ្អែកលើប្រសិទ្ធភាពនៃលីសស៊ីសដែលបានអង្កេត។ ការលេងសើចយូរអាចចាំបាច់សម្រាប់លីសស៊ីសពេញលេញប៉ុន្តែគួរតែមានតុល្យភាពប្រឆាំងនឹងហានិភ័យនៃការរិចរិលរបស់ឌីអិនអេ។
ត្រជាក់ដល់សីតុណ្ហភាពបន្ទប់
notowning សារៈសំខាន់នៃការត្រជាក់បន្តិចម្តង ៗ
បន្ទាប់ពីការភ្ញាស់កូនភ្លែតត្រូវបានធ្វើឱ្យត្រជាក់បន្តិចម្តង ៗ ចំពោះសីតុណ្ហភាពក្នុងបន្ទប់។ ការត្រជាក់ត្រជាក់បន្តិចជួយក្នុងស្ថេរភាពឌីអិនអេនិងកាត់បន្ថយហានិភ័យនៃការឆក់កម្ដៅដែលអាចធ្វើឱ្យខូចដល់ឌីអិនអេ។
●ផលប៉ះពាល់លើឌីអិនអេនិងកំទេចកំទីកោសិកា
ត្រជាក់ដល់សីតុណ្ហភាពក្នុងបន្ទប់អនុញ្ញាតឱ្យកំទេចកំទីចល័តទៅក្នុងទឹកភ្លៀងធ្វើឱ្យវាកាន់តែងាយស្រួលក្នុងការបែងចែកឌីអិនអេក្នុងជំហានបន្ទាប់។ នេះក៏ជួយជួយធ្វើឱ្យមានស្ថេរភាពសកម្មភាពអង់ស៊ីមនិងសម្របសម្រួលការដកយកចេញដោយការព្យាបាលដោយ RnaS ។
បន្ថែមដំណោះស្រាយ RNASE
●គោលបំណងនៃ RNASE ក្នុងនីតិវិធី
ដំណោះស្រាយ RNASS ត្រូវបានបន្ថែមដើម្បីធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវ RAN, ដែលអាចសហការបន្សុទ្ធជាមួយឌីអិនអេហើយជ្រៀតជ្រែកជាមួយកម្មវិធីខ្សែទឹកខាងក្រោម។ RNASNACE រំលាយដោយរំកិល RNA ដោយទុកឌីអិនអេនៅដដែល។
●ការពារការចម្លងរោគរបស់ RNA
ការការពារការចម្លងរោគ RNA គឺមានសារៈសំខាន់ណាស់សម្រាប់កម្មវិធីដែលត្រូវការឌីអិនអេសុទ្ធដូចជា PCR និងលំដាប់លំដោយ។ ការព្យាបាលបានបញ្ចប់ធានាថាឌីអិនអេដែលដាច់ស្រយាលគឺមិនមានភាពកខ្វក់ RNA ទេ។
ការបន្សុតឌីអិនអេ
●វិធីសាស្រ្តសម្រាប់បំបែកឌីអិនអេពីសមាសធាតុកោសិកាផ្សេងទៀត
វិធីសាស្រ្តមួយចំនួនអាចត្រូវបានប្រើដើម្បីបន្សុទ្ធ DNA ពី Lysate ។ ទាំងនេះរួមមាន Phenol - ការស្រង់ចេញជាតិទឹកក្លូហ្វូល, ទឹកភ្លៀងអេតាណុលនិងការប្រើប្រាស់ពាណិជ្ជកម្មអ៊ីអ៊ី។ វិធីសាស្រ្តនីមួយៗមានគុណសម្បត្តិនិងគុណវិបត្តិរបស់វាដោយប្រើឧបករណ៍ពាណិជ្ជកម្មដែលផ្តល់នូវភាពងាយស្រួលនិងលទ្ធផលជាប់លាប់។
●ការពិចារណាសម្រាប់ភាពបរិសុទ្ធឌីអិនអេ
ភាពបរិសុទ្ធគឺជាកត្តាសំខាន់សម្រាប់ជោគជ័យនៃការដាក់ពាក្យនៅខ្សែទឹកខាងក្រោម។ ឧបករណ៍ពាណិជ្ជកម្មដូចជាការព្យាបាលដោយការព្យាបាលដោយកោសិកាអេ។ អេ។ អេ។ អេ។ អេ។ អេ
ការផ្ទុកនិងការដោះស្រាយឌីអិនអេដែលដាច់ឆ្ងាយ
propections ការអនុវត្តល្អបំផុតសម្រាប់រក្សាទុកឌីអិនអេ
នៅពេលដែលបានបន្សុត, ឌីអិនអេគួរតែត្រូវបានរក្សាទុកនៅក្នុងសតិបណ្ដោះអាសន្នដែលសមរម្យដូចជា Te Buffer, នៅ - 20 អង្សាសេឬ - 80 អង្សាសេសម្រាប់ការផ្ទុករយៈពេលវែង។ ជៀសវាងការបង្កកញឹកញាប់ - វដ្តមន្ដហោះនៅពេលពួកគេអាចបង្កការចុះខ្សោយនៃឌីអិនអេ។
●ថែរក្សាភាពស្មោះត្រង់ឌីអិនអេសម្រាប់កម្មវិធីខ្សែទឹកខាងក្រោម
ដើម្បីថែរក្សាឌីអិនអេរបស់ឌីអិនអេប្រើមាប់មគការរុំព័ទ្ធ - បំពង់ឥតគិតថ្លៃនិងដំណោះស្រាយ។ នេះធានាថាឌីអិនអេនៅតែមិនមានភាពមិនស្អាតនិងសមស្របសម្រាប់កម្មវិធីដូចជាក្លូនលំដាប់លេខនិង PCR ។
អមបីខៀវ
Hailgene Jiangsu បានបង្កើតទីស្នាក់ការកណ្តាលរបស់ខ្លួន (10.000 am2 រុក្ខជាតិនិងមជ្ឈមណ្ឌលស្រាវជ្រាវនិងអភិវឌ្ឍន៍) នៅស្រុកវូហ៊ូដែលមានទីតាំងស្ថិតនៅក្នុងតំបន់បឹងតៃហួនិងសៀងហៃដែលពង្រីកបណ្តាញផលិតកម្មទូទាំងប្រទេស។ តំបន់បណ្តាញរដ្ឋ North Carolina នៅសហរដ្ឋអាមេរិកកំពុងសាងសង់កំពុងរីករាលដាលនៅលើវត្តមានសកលរបស់ខ្លួនបន្ថែមទៀត។ Hillgene បានសាងសង់ថ្ពាល់បង្ហាញពីការអភិវឌ្ឍផលិតផលព្យាបាលកោសិកាពីការដឹកជញ្ជូនរហូតដល់ការផលិតអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ែរ - ការដាំដុះដោយឥតគិតថ្លៃការអភិវឌ្ឍដំណើរការបានបិទដំណើរការបិទដំណើរការនិងការធ្វើតេស្ត QC ។ ផលិតផល BlueKit ត្រូវបានរចនាឡើងសម្រាប់ការគ្រប់គ្រងគុណភាពដោយធានាបាននូវភាពជោគជ័យនៃការច្នៃប្រឌិតព្យាបាលចល័ត។
ម៉ោងក្រោយ: 20 - 5 ៈ 05 ៈ 47:03
