Na-ekewa site na e. coli bụ usoro dị mkpa na usoro ọmụmụ ihe ọmụmụ. Isiokwu a ga - eje ije gị niile, na-enye usoro zuru ezu na nkọwa zuru ezu, hụ na ị ghọtara ma akụkụ sayensị na uru nke usoro ahụ. Ma ị bụ onye nyocha nke oge ma ọ bụ onye bịara ọhụrụ na ụlọ nyocha ahụ, ntuziaka a ga-abụ ihe bara uru.
Nkwadebe nke nkwusioru Cell
Nchịkọta nke E. Mkpụrụ ndụ Col
Nzọụkwụ mbụ na DNA site na E. Cori na-agụnye ịnakọta mkpụrụ ndụ nje. Nke a na - achọkarị eto E. Claị na mmiri kwesịrị ekwesị ruo mgbe ọ ruru usoro ngeta Bagetrithmic. Oge a dị mkpa maka mkpụrụ ndụ na oge a bụ nke kachasị viable ma dị mfe karịa, nke ga-ebute mkpụrụ DNA dị elu.
● Mkpụrụ ndụ a na-eme ka ọ dị mma
A na-akpọkọta sel na-agbagha na ezigbo nchekwa. Nhọrọ a na-ahụkarị bụ tris - Edta (te) ihe na-enyere aka ịnọgide na-eguzosi ike n'ezi ihe nke DNA n'oge. Ihe nchekwa na-arụ ọrụ na-arụ ọrụ: ọ na-ekwusi ike na pH, chelos na-echekwa ebe ọzọ nwere ike ịdị na-arụ ọrụ DNA, ma na-enye ọnọdụ dị mma maka mmeghachi omume enzmatic.
Centrifugation na pellet sel
● paradaịs maka centrifugation (ọsọ na oge)
Mgbe etinyere mkpụrụ ndụ, a na - ekpuchi nkwụsi ike na Pellet The Cells. Oke ọsọ ọsọ na obere oge bụ parameters dị oke mkpa. A na-eme ọtụtụ centrifugation n'ihe dị ka puku 4,000 - 6,000 g maka 10 - 15 nkeji na 4 Celsius C. Nke a na - eme ka nke ahụ na sel ahụ na - etolite pellet siri ike na ala nke tube centrifuge.
Dị Mkpa Plelleting
Polletting kwesịrị ekwesị dị mkpa iji kewapụ mkpụrụ ndụ site na mmụba na-eto eto na ihe ndị ọzọ soluble. A nke ọma - kpụrụ pellet na-eme ka usoro ndị na-esote dị mfe ma rụọ ọrụ nke ọma, na-agbasi mbọ ike mfu nke mkpụrụ ndụ na, yabụ, mkpụrụ DNA.
Iwepụ nke oke
● Usoro maka iwepụ supernatunt
N'otu oge, a na-ete mkpụrụ ndụ, supernant (mmiri mmiri dị n'elu pellet) a ga-akpachara anya wepụrụ na-enweghị nsogbu pellet ahụ. A na-eme nke a na-eji micropipette. Ọ dị mkpa iji rụọ ọrụ a masisicallyly ka ị zere ịhapụ mkpụrụ ndụ ọ bụla.
● Na-agba mbọ na mfu pellet
Na-ejidelata mfu nke pellet nke cell pellet ahụ na-agụnye ọtụtụ pipetting na, ọ bụrụ na ọ dị mkpa, ọtụtụ akụkụ e centrifugation na mwepụ. Ebumnuche bụ idobe ọtụtụ sel dị ka o kwere mee na Plelet maka mgbake DNA kacha.
Mgbakwunye nke nuclei lysis Ngwọta
● Ngwakọta nke nuclei lysis Ngwọta
Ngwọta Nuclei gwọọ na-enwekarị ihe na-egbochi (SDS), dị ka Tris - HCL), na onye na-echekwa ihe (dị ka edta). Ihe mgbochi ahụ na-egbochi akpụkpọ ahụ akpụkpọ ahụ na envelopu nuklia, na-ahapụ mkpụrụ osisi cellular, gụnyere DNA, n'ime ihe ngwọta.
Whatrụ Ọrụ Na-emebi mgbidi
Ngwọta nuclei lysis ọ bụghị naanị lss the cell akpụkpọ ahụ kamakwa ịgọnarị proteins na lipids, na-agbaji na mgbidi nuklia iji wepụta DNA n'ime ihe ngwọta.
Ntugharị nke sel
● Dị nro iji zere iji
Ozugbo nuclei luclei lysis agbakwunyere, a ga-eme ka mkpụrụ ndụ gbatịrị nwayọ iji zere ịhapụ DN. Azụ nwere ike imebi DNA n'ime obere iberibe, nke nwere ike ịdị na-enwe nsogbu maka ngwa mgbada chọrọ elu - molecular - Ibu DNA.
● Na-agbaso ntụrụndụ zuru oke
Zuru ezu na-emegharị ahụ na-adakwasị na mkpụrụ ndụ niile na-ahụ igwe niile na-egbu egbu, na-agbake DNA. Enwere ike nweta nke a site na nwayọ nwayọ ma ọ bụ vorlexing ya na obere ọsọ.
Ngwunye na Cells Lyse
Ọnọdụ okpomọkụ maka incubation
A na-asụgharị mkpụrụ ndụ a recusped na otu okpomọkụ iji hụ na lysis zuru ezu. A na-eme nke a na 37 Celsius C ka 55 Celsius C. Okpomoku di iche na oge puru iche nwere ike di iche na usoro a choro nke DNA.
● Oge achọrọ maka lysis dị irè
Oge a na-ahụkarị maka incubation dị n'agbata nkeji iri abụọ ruo iri abụọ, mana enwere ike idozigharị dabere na arụmọrụ nke cell les. Ntinye ogologo oge nwere ike ịdị mkpa maka lysis zuru ezu ma ọ ga-edozi echiche megide ihe ize ndụ nke DNA mmebi.
Na-ajụ oyi n'ime ụlọ okpomọkụ
● Dị mkpa nke nwayọ nwayọ
Mgbe nsị, igwe na-eji nwayọọ nwayọọ na-ajụ oyi. Ike nwayọ na-enyere aka na-akwado DNA ma belata ihe ize ndụ nke ujo ọkụ, nke nwere ike imebi DNA.
● Mmetụta na DNA na irighiri akwara cell
Jụ na-ajụ oyi okpomọkụ na-enye ohere cellular na-eme ka ọ dịkwuo mma, na-eme ka ọ dịrị ya mfe ikewapụ DNA na usoro ndị sochirinụ. Nke a na - enyere aka idozi ihe omume enzyme ma na - eme ka mwepụ nke rna site na ọgwụgwọ rnase.
Mgbakwunye nke ngwọta rnase
● Nzube nke rnase na usoro
A na-agbakwunye ngbanwe RNA iji mebie RNA, nke nwere ike ọ bụghị COM - SIME NA DNA na iji ngwa ahụ dị ala. Rnase na-agbake RNA, na-ahapụ DNA.
● na-egbochi mmerụ ahụ RANA
Na - egbochi mmerụ ahụ dị oke mkpa maka ngwa ndị chọrọ ka ọ dị ọcha dna, dịka pcr na usoro. Ọgwụ rnase na-elekwasị anya na DNA dịpụrụ adịpụ nwere mmerụ ahụ RNA.
Ọcha nke DNA
● Esemokwu maka ikewapụ DNA site na akụrụngwa ndị ọzọ
Enwere ike iji ọtụtụ usoro mee ka DNA mee ihe site na LYSATE. Ndị a gụnyere phenol - mmịpụta chloroform, ọdịda ethanol, na iji azụmahịa E. Clọ azụmahịa. Usoro nke ọ bụla nwere uru na ọghọm ya, yana ngwa ahịa azụmahịa na-enye ihe dị mma na nsonaazụ na-agbanwe agbanwe.
● Tụlee echiche maka ịdị ọcha DNA
Ịdị ọcha bụ ihe dị mkpa maka ihe ịga nke ọma ngwa nke ngwa dị ala. Azụmaahịa, dị ka usoro ọgwụgwọ sel e. COI DNA KIT, a na-eme ka mkpụrụ dị elu - ịdị ọcha DNA site na iwepu protein, lipids na ndị ọzọ.
Nchekwa na iji DNAAED dịpụrụ adịpụ
● Omume kachasị mma maka ịchekwa DNA
Ozugbo emere, a ga-echekwa DNA na igbe kwesịrị ekwesị, dịka teruf, na - 20 Celsius C ma ọ bụ - 80 Celsius C ruo ogologo - Nchekwa. Zere freenụ ugboro ugboro - Trath cycles dịka ha nwere ike ibute mmebi DNA.
● Nọgide na-eguzosi ike n'ihe maka ngwa ndadata
Iji nọgide na-eguzosi ike n'ezi ihe, jiri ndị na-enweghị atụ, nuclease - Tube na ngwọta. Nke a na - eme ka nke a na DNA dị mma maka ngwa ndị dị ka cloning, sequencing, na pcr.
MakaBykit
Jiangsu Hillgene guzobere isi ụlọ ọrụ ya (D 10,000 gmp na RUZHOOU, SUZHOG, SUZHOR na Shenghai, na Shanghai, na-agbatị ya na ntanetị. Ebe a na-arụ North Carolina na US, a na-arụ ọrụ ugbu a, na-aga n'ihu ịgbasa ọnụnọ zuru ụwa ọnụ. Hillgene arụpụtala ụzọ ụda olu maka mmepe ngwaahịa coulkalar, site na Nchọpụta Nchọpụta maka Ngwongwo Acid, Serrom - Emechiela mmepe, na Nnwale QC. Ezubere ngwaahịa maka njikwa dị mma, na-enyere ihe ịga nke ọma nke usoro ọgwụgwọ ikuku.
Oge post: 2024 - 09 - 05 14:47:03
