Ke wehe neiʻo DNA mai E. Coli i ke kaʻina hana kālā ma Molecular Biology. E hele ana kēiaʻatikala iāʻoe ma waena o ke kaʻina holoʻokoʻa, e hāʻawi ana i nā hana kiko'ī a me nā wehewehe, e hōʻoiaʻiʻo ana i kaʻepekema a me nā mea kūpono o ke kaʻina hana. Inā paha he mea noiʻi āu e makemake ai a iʻole he mea hou i ka lab, e lilo kēia alakaʻi i kahi kumu waiwai nui.
ʻO ka hoʻomākaukauʻana i ka hoʻopauʻana o ke kelepona
● KOLOHE O E. COLI CERIT
ʻO ka hana mua i ka hoʻokaʻawaleʻana o DNA mai e. Coli e hōʻiliʻili i ka hōʻiliʻiliʻana i nā CHACTERER CRALLS. Pono kēia e koi i ka ulu uluʻana E. Coli ma kahiʻano kūpono kūpono kūpono a hiki i ka hōʻeaʻana o ka lāʻau lapaʻau lāʻau lāʻau. ʻO ka manawa nui ka nui o ka manawa no ka mea i loko o kēia phse he nui loa a maʻalahi hoʻi e lanakila ai i ka lyse, kahi e loaʻa ai i ke kiʻekiʻe o DNA.
● Hoʻomaka i nā cell resuspending i kahi buffer kūpono
E hōʻiliʻiliʻia nā cell i nā'āpana kūpono i loko o kahi mea kūpono kūpono. ʻO kahi koho maʻamau he TRIS - EDTA (Te) Buffer Mālama ka mea kanu i nā kumu he nui: ke kau nei i ka ph, collates i nā helu helu e hiki ai ke hōʻole i ka nui o nā mea hoʻohiwahiwa.
Centrugugation e hui pū ai
● Nā kohona no ka centrifugation (wikiwiki a me ka manawa)
Ma hope o ka hoʻihoʻiʻana i nā cell, ua kauʻia ka susperion i ka centrifugation e hoʻopili i nā cell. ʻO ka wikiwikiʻo Centrugugation a me ka manawa he mau hōʻailona koʻikoʻi. ʻO ka maʻamau,ʻo ka Centrifugugation e hanaʻia ma kahi o 4,000 - 6,000 g no 10 - 15 mau minuke ma 4 ° C. E hōʻoia kēia i ka hanaʻana o nā cell i kahi pākuʻi paʻa ma lalo o ka pahu centrifuge.
● koʻikoʻi o ka pelleting kūpono
He mea nui ka pelleting kūpono e hoʻokaʻawale i nā cell mai ka ulu ulu a me nā'āpana'ē aʻe. He maikaʻi -ʻO ka Pellet Pellet e hoʻolōʻihi i nā hana ma hope aku aʻoi aku ka maʻalahi, e hōʻoia i ka loaʻaʻana o ka liʻiliʻi o nā cell a me ka nui dna reield.
Ka hemoʻana o ka supernatant
● Nā mea hana no ka laweʻana i ka Supernatant
ʻO ka wā e kohoʻia ai nā cell,ʻo ka supernatant (ʻo ka wai ma luna o ka pellet) e mālama ponoʻole e hoʻokaʻawale i ka pellet. Hana pinepineʻia kēia me ka hoʻohanaʻana i kahi micropipette. He mea nui ia e hana i kēia hana meticloully e pale i ka nalowale i nā'āpana.
● E hōʻoia i ka loaʻaʻana o ka liʻiliʻi o ka pellet
E hōʻoia ana i ka liloʻana o ka minimal i ka pellet e pili ana i ka pipetting e nānā pono ai a, inā pono, he nui nā'āpana o ke kenekulia a me ka laweʻana. ʻO ka pahuhopu ke mālama e like me nā mea he nui e like me ka hiki ke hiki i ka pellet no ka hoʻihoʻiʻana o DNA.
Hoʻohuiʻia o nā maʻi lysis lysis
● Nā helu o nā hopena Lysis Video
ʻO ka hopena o ka nucci lysis e loaʻa ana i kahi decegent (e like me sds), he buffer (e like me TRIS - HCAL). Hoʻomoe ka manaʻo i ka membrane cell a me nulear envelope, e hoʻokuʻu ana i nāʻikepili, me ka dna, i loko o ka hopena.
● Role ma ka wāwahiʻana i nā paia o nā wahi
ʻO ka mea kōkuaʻo nuclei Lysis e hoʻololi wale i ka membrane cell akā hoʻopunipuni i nā protein a me nā lipids i lalo i nā pā o ka pā.
Resuspension of cell
●ʻO ke kīwīʻoluʻolu e pale ai i ka DNA eʻoki ana
Ke hoʻohuiʻia ka hopena o ka nuclei Lysis, pono e hoʻoukaʻia nā cella e pale mālie i ka paleʻana iā DNA. Hiki i nā kāmaʻa ke wāwahi i ka DNA i loko o nā'āpana liʻiliʻi liʻiliʻi, hiki ke pilikia no nā noi e pono ai ke kiʻekiʻe.
● E hōʻoia i ka hoʻoponopono pihaʻana
Mālama i nā resuspension e hōʻoia e like me nā cell cell e like me nā mea likeʻole, e hoʻonui i ka hoʻihoʻi dna. Hiki i kēia ke hoʻokōʻia e ka pipettingʻoluʻolu a iʻole ke hoʻololiʻana i ka hopena ma kahi haʻahaʻa haʻahaʻa.
Incubation e lyse cells
● nā hoʻonohonoho mahana no ka incubation
ʻO nā cells resusphended i hōʻoiaʻia ma kahi wela kūikawā e hōʻoia ai i ka lysis piha. Hanaʻia kēia ma 37 ° C i 55 ° C. Hiki i keʻano kūpono a me ka lōʻihi ke hoʻololi i keʻano o ka protocol a me nā koi kiko'ī o ka dna i hoʻohanaʻia.
● Pono ka lōʻihi o ka lōʻihi no ka lysis maikaʻi
ʻO ka lōʻihi maʻamau no ka incubation ma waena o 20 a 30 mau minuke, akā hiki ke hoʻoponoponoʻia ma muli o ka maikaʻi o ka lysis colsis i nānāʻia. Pono e pono ai ke hōʻoiaʻiʻo no ka lysis i piha akā pono ke kaulikeʻia e kū'ē i ka hopena o ka DNA degradation.
ʻOluʻolu i ka mahana o ka lumi
● koʻikoʻi o ka hoʻomaha hoʻomahaʻana
Ma hope o ka hōʻoiaʻana, e hoʻokaʻawaleʻia ka lssate i ka mahana o ka lumi. Kōkuaʻo Furnoll e kōkua ana i ka hoʻopiliʻana i ka DNA a hōʻemi i ka hopena o ka pīhoihoi o ka thermal, e hiki ke hoʻonui i ka dna.
● Nā hopena ma DNA a me Celbular Darris
E hoʻolōʻihi i ka maluhia i ka lumi o ka lumi i nā lepo lepo e hoʻopili pono ai, eʻoi aku ka maʻalahi e hoʻokaʻawale i ka DNA i nā hana ma hope. Kōkua kēia i ka hoʻokūkūʻana i nā hana enzyme a e hoʻomaʻamaʻa i ka laweʻana i ka hoʻoneʻeʻana o RNA ma ka mālamaʻana i ka hana Rnase.
Ka hoʻohuiʻana o ka hopena rnase
● kumu o ka rnase i ke kaʻina hana
Hoʻohuiʻiaʻo RNase REMADE e hōʻole iā RNA, kahi e hiki ai iā Chana ke hiki ke hoʻomaʻemaʻeʻia me ka DNA a me ka hoʻopiliʻana me ka DNA a me nā noi Rnase spillly digiess rna, haʻalele i ka dna intact.
● pale aku i ka pale rna
Pale aku i ka rna conciation he mea nui no nā noi e koi ai i ka dna, e like me ka pcr a me ka seequing. E hōʻoiaʻia ka hana RNase e hōʻoia i ka DNA FREE FREE mai RNA.
Hoʻomaʻemaʻe o dna
● Nā Kūlana no ka hoʻokaʻawaleʻana i ka DNA mai nā'āpana kelepona'ē aʻe
Hiki ke hoʻohanaʻia kekahi mau ala e hoʻomaʻemaʻe iā DNA mai ka lysate. ʻO kēia nā mea e komo ai i ka phenol - clloroform extraction, ethanol ite, a me ka hoʻohanaʻana i kaʻoihana e. coli dna kit. Loaʻa i kēlā me kēiaʻano kāna hana a me kāna cons, me nā mea kūʻai aku e kali nei i ka hāʻawiʻana i kaʻoluʻolu a me nā hopena kūlike.
● mau noʻonoʻo no DNAʻo ka maʻemaʻe
ʻO ka hoʻomaʻemaʻe kahi mea koʻikoʻi koʻikoʻi no ka kūleʻa o nā noi i lalo. Nā Kahu Kūʻai, e like me ka cell Therapy E. Coli Dna Tna Tna ma ke kiʻekiʻe o nā profile.
Waiho ana a me ka mālamaʻana o ka dna
● Hana maikaʻi loa no ka mālamaʻana iā DNA
Mālamaʻia, e mālamaʻiaʻo DNA i kahi kumukūʻai kūpono, e like me ka buffer, ma - 20 ° C no ka lōʻihi - Hōʻalo pinepineʻia nā kiʻi manuahi
● Ke mālama nei iā DNA i kahi kūpono no nā noi noi
E mālama i ka dena integrity, e hoʻohana i ka sterile, nuclese - nā'ūlū manuahi a me nā hopena. Mālama kēia i ka mea i koe a me ka ponoʻole a kūpono i nā noi e like me ka cloning, a me ka scr.
E pili anaUliuli
Ua hoʻokūpaʻaʻo Jiangsur i kāna mau poʻo inoa (10,000㎡㎡ GMP i nā wahi āpau o Taujhoung, a me nā Shazhou, kahi papa hana o ka'āinaʻo Suzhou ʻO ke kahua pūnaewele ma mua o ka US i kēia manawa ma lalo o ke kūkuluʻana, e hoʻolaha hou ana i kona'āina honua. Ua kūkuluʻo Hillgene i kahi ala hōʻike lapaʻau no ka hoʻomohalaʻana i nā huahana kelepona, mai nā'ōnaehana loiloi, me nā papa hana manuahi. Hoʻolālāʻia nā huahana Bluekit no ka mana o ka maikaʻi, e hōʻoia ana i ka kūleʻa o nā mea hana lapaʻau cellular.
Nā WES Titter: 2024 - 209 - 05 14:47:07
