ઇ કોલીથી ડીએનએને અલગ પાડવું એ પરમાણુ જીવવિજ્ .ાનમાં મૂળભૂત પ્રક્રિયા છે. આ લેખ તમને આખી પ્રક્રિયામાં આગળ વધશે, વિગતવાર પગલાઓ અને ખુલાસો પ્રદાન કરશે, તમને વિજ્ and ાન અને પ્રક્રિયાના વ્યવહારિક પાસાઓ બંનેને સમજે છે તેની ખાતરી કરશે. પછી ભલે તમે અનુભવી સંશોધનકાર હોય અથવા લેબનો નવોદિત, આ માર્ગદર્શિકા મૂલ્યવાન સાધન હશે.
કોષ સસ્પેન્શનની તૈયારી
E. કોલી કોષોનો સંગ્રહ
ઇ.કોલીથી ડીએનએને અલગ પાડવાનું પ્રથમ પગલું બેક્ટેરિયલ કોષો એકત્રિત કરવાનો સમાવેશ કરે છે. આને સામાન્ય રીતે યોગ્ય પ્રવાહી માધ્યમમાં વધતી ઇ કોલીની જરૂર પડે છે જ્યાં સુધી તે લોગરીધમિક વૃદ્ધિના તબક્કે પહોંચે નહીં. સમય નિર્ણાયક છે કારણ કે આ તબક્કાના કોષો સૌથી વધુ વ્યવહારુ અને લીસ માટે સરળ છે, જેના પરિણામે ડીએનએ ઉપજ વધારે છે.
Former યોગ્ય બફરમાં પુનરાવર્તન કોષો
પછી એકત્રિત કોષો યોગ્ય બફરમાં ફરી વળ્યા છે. સામાન્ય પસંદગી એ ટ્રિસ - ઇડીટીએ (ટીઇ) બફર છે, જે નિષ્કર્ષણ પ્રક્રિયા દરમિયાન ડીએનએની અખંડિતતા જાળવવામાં મદદ કરે છે. બફર બહુવિધ હેતુઓને સેવા આપે છે: તે પીએચને સ્થિર કરે છે, ચેલેટ્સ ડિવલેન્ટ કેશન્સ જે અન્યથા ડીએનએને ડિગ્રેઝ કરી શકે છે, અને અનુગામી એન્ઝાઇમેટિક પ્રતિક્રિયાઓ માટે શ્રેષ્ઠ આયનીય વાતાવરણ પ્રદાન કરે છે.
પેલેટ કોષોને કેન્દ્રત્યાગી
Cen સેન્ટ્રિફ્યુગેશન (ગતિ અને સમય) માટેના પરિમાણો
કોષોને ફરીથી ગોઠવ્યા પછી, સસ્પેન્શન કોષોને છલકાવવા માટે કેન્દ્રત્યાગીનો આધિન છે. સેન્ટ્રિફ્યુગેશન ગતિ અને સમય એ નિર્ણાયક પરિમાણો છે. લાક્ષણિક રીતે, સેન્ટ્રીફ્યુગેશન લગભગ 4,000 - 6,000 ગ્રામ 10 - 15 મિનિટ માટે 4 ° સે. આ સુનિશ્ચિત કરે છે કે કોષો સેન્ટ્રીફ્યુજ ટ્યુબના તળિયે એક ચુસ્ત ગોળી બનાવે છે.
Fe યોગ્ય પેલેટીંગનું મહત્વ
કોષોને વૃદ્ધિના માધ્યમ અને અન્ય દ્રાવ્ય ઘટકોથી અલગ કરવા માટે યોગ્ય પેલેટીંગ આવશ્યક છે. એક કૂવો - રચાયેલ પેલેટ અનુગામી પગલાઓને સરળ અને વધુ કાર્યક્ષમ બનાવે છે, કોષોના ન્યૂનતમ નુકસાનને સુનિશ્ચિત કરે છે અને તેથી, મહત્તમ ડીએનએ ઉપજ.
અલૌકિકને દૂર કરવું તે
Upuput સુપરનેટન્ટ દૂર કરવાની તકનીકો
એકવાર કોષોને છીનવી લેવામાં આવે છે, ત્યારે સુપરનેટન્ટ (પેલેટની ઉપરના પ્રવાહી) સેલ પેલેટને ખલેલ પહોંચાડ્યા વિના કાળજીપૂર્વક દૂર કરવું આવશ્યક છે. આ સામાન્ય રીતે માઇક્રોપિપેટનો ઉપયોગ કરીને કરવામાં આવે છે. કોઈપણ કોષો ગુમાવવાનું ટાળવા માટે આ પગલું સાવચેતીપૂર્વક કરવું નિર્ણાયક છે.
Cell સેલ પેલેટની ન્યૂનતમ નુકસાનની ખાતરી કરવી
સેલ પેલેટના ન્યૂનતમ નુકસાનની ખાતરી કરવા માટે સાવચેતીપૂર્વક પાઇપિંગ શામેલ છે અને, જો જરૂરી હોય તો, સેન્ટ્રિફ્યુગેશનના બહુવિધ રાઉન્ડ અને સુપરનેટ ant ન્ટને દૂર કરવું. મહત્તમ ડીએનએ પુન recovery પ્રાપ્તિ માટે પેલેટમાં શક્ય તેટલા કોષો રાખવાનું લક્ષ્ય છે.
ન્યુક્લી લિસીસ સોલ્યુશનનો ઉમેરો
ન્યુક્લી લિસીસ સોલ્યુશનના ઘટકો
ન્યુક્લી લિસીસ સોલ્યુશનમાં સામાન્ય રીતે ડિટરજન્ટ (એસડીએસ જેવા), બફર (જેમ કે ટ્રિસ - એચસીએલ), અને ચેલેટીંગ એજન્ટ (ઇડીટીએ જેવા) હોય છે. ડિટરજન્ટ સેલ પટલ અને પરમાણુ પરબિડીયુંને વિક્ષેપિત કરે છે, ડીએનએ સહિતના સેલ્યુલર સમાવિષ્ટોને સોલ્યુશનમાં મુક્ત કરે છે.
Sell કોષની દિવાલો તોડવામાં ભૂમિકા
ન્યુક્લી લિસીસ સોલ્યુશન ફક્ત સેલ પટલને જ નહીં, પણ પ્રોટીન અને લિપિડ્સને ડિએટ્યુરાઇઝ કરે છે, સોલ્યુશનમાં ડીએનએને મુક્ત કરવા માટે કોષની દિવાલો અને પરમાણુ પરબિડીયાઓને અસરકારક રીતે તોડી નાખે છે.
કોષ -ફરી વળવું
DN ડીએનએ શિયરિંગ ટાળવા માટે નમ્ર પાઇપિંગ
એકવાર ન્યુક્લી લિસીસ સોલ્યુશન ઉમેર્યા પછી, કોષોને ડીએનએ શીયરિંગ ટાળવા માટે નરમાશથી ફરીથી ગોઠવવાની જરૂર છે. શીઅરિંગ ડીએનએને નાના ટુકડાઓમાં તોડી શકે છે, જે ડાઉનસ્ટ્રીમ એપ્લિકેશનો માટે સમસ્યારૂપ હોઈ શકે છે જેને ઉચ્ચ - મોલેક્યુલર - વજન ડીએનએની જરૂર હોય છે.
Resp સંપૂર્ણ ફરી વળવાની ખાતરી
સંપૂર્ણ પુનરુત્થાન સુનિશ્ચિત કરે છે કે બધા કોષો એકસરખી રીતે લિઝ કરવામાં આવે છે, જે ડીએનએ પુન recovery પ્રાપ્તિને મહત્તમ બનાવે છે. આ ઓછી ગતિએ સોલ્યુશનને નમ્ર પાઇપિંગ અથવા વમળ દ્વારા પ્રાપ્ત કરી શકાય છે.
લીસ કોષો માટે સેવન
સેવન માટે તાપમાન સેટિંગ્સ
સંપૂર્ણ લિસીસને સુનિશ્ચિત કરવા માટે ફરીથી ગોઠવાયેલા કોષો ચોક્કસ તાપમાને સેવામાં આવે છે. આ સામાન્ય રીતે 37 ° સે થી 55 ° સે પર કરવામાં આવે છે. ચોક્કસ તાપમાન અને અવધિ પ્રોટોકોલ અને ડીએનએ આઇસોલેશન કીટનો ઉપયોગ કરવામાં આવતી વિશિષ્ટ આવશ્યકતાઓને આધારે બદલાઈ શકે છે.
Effective અસરકારક લિસીસ માટે જરૂરી અવધિ
સેવન માટે લાક્ષણિક અવધિ 20 થી 30 મિનિટની વચ્ચે હોય છે, પરંતુ તે નિરીક્ષણ કરેલ સેલ લિસીસની કાર્યક્ષમતાના આધારે ગોઠવી શકાય છે. સંપૂર્ણ લિસીસ માટે લાંબા સમય સુધી સેવન જરૂરી હોઈ શકે છે પરંતુ ડીએનએ અધોગતિના જોખમ સામે સંતુલિત હોવું જોઈએ.
ઓરડાના તાપમાને ઠંડક
Ulation ધીમે ધીમે ઠંડકનું મહત્વ
સેવન પછી, લાઇસેટ ધીમે ધીમે ઓરડાના તાપમાને ઠંડુ થાય છે. ક્રમિક ઠંડક ડીએનએને સ્થિર કરવામાં મદદ કરે છે અને થર્મલ આંચકાના જોખમને ઘટાડે છે, જે ડીએનએને સંભવિત રીતે અધોગતિ કરી શકે છે.
DN ડીએનએ અને સેલ્યુલર કાટમાળ પરની અસરો
ઓરડાના તાપમાને ઠંડકથી સેલ્યુલર કાટમાળને વરસાદની મંજૂરી મળે છે, ત્યારબાદના પગલાઓમાં ડીએનએને અલગ કરવાનું સરળ બનાવે છે. આ એન્ઝાઇમ પ્રવૃત્તિઓને સ્થિર કરવામાં પણ મદદ કરે છે અને આરએનએએસઇ સારવાર દ્વારા આરએનએને દૂર કરવાની સુવિધા આપે છે.
આર.એન.એ.એસ.
Procedure પ્રક્રિયામાં આરએનએસઇનો હેતુ
આરએનએઝ સોલ્યુશન આરએનએને ડિગ્રેઝ કરવા માટે ઉમેરવામાં આવે છે, જે અન્યથા ડીએનએ સાથે શુદ્ધ થઈ શકે છે અને ડાઉનસ્ટ્રીમ એપ્લિકેશનમાં દખલ કરી શકે છે. Rnase પસંદગીયુક્ત રીતે આરએનએ ડાયજેસ્ટ કરે છે, ડીએનએને અકબંધ છોડીને.
R આરએનએ દૂષણ અટકાવવું
પીસીઆર અને સિક્વન્સિંગ જેવા શુદ્ધ ડીએનએની જરૂર હોય તેવા એપ્લિકેશનો માટે આરએનએ દૂષણને અટકાવવું નિર્ણાયક છે. આરએનએએસઇ સારવાર સુનિશ્ચિત કરે છે કે અલગ ડીએનએ આરએનએ દૂષણોથી મુક્ત છે.
ડી.એન.એ.
Other અન્ય સેલ્યુલર ઘટકોથી ડીએનએને અલગ કરવાની પદ્ધતિઓ
લાઇસેટથી ડીએનએ શુદ્ધ કરવા માટે ઘણી પદ્ધતિઓનો ઉપયોગ કરી શકાય છે. આમાં ફેનોલ - ક્લોરોફોર્મ નિષ્કર્ષણ, ઇથેનોલ વરસાદ અને વ્યાપારી ઇ. કોલી ડીએનએ કિટ્સનો ઉપયોગ શામેલ છે. દરેક પદ્ધતિમાં તેના ગુણદોષ હોય છે, જેમાં વ્યવસાયિક કીટ સુવિધા અને સતત પરિણામો આપે છે.
DN ડીએનએ શુદ્ધતા માટે વિચારણા
ડાઉનસ્ટ્રીમ એપ્લિકેશનની સફળતા માટે શુદ્ધતા એ એક મહત્વપૂર્ણ પરિબળ છે. સેલ થેરેપી ઇ. કોલી ડીએનએ કીટ જેવી વાણિજ્યિક કીટ, પ્રોટીન, લિપિડ્સ અને અન્ય દૂષણોને અસરકારક રીતે દૂર કરીને ઉચ્ચ - શુદ્ધતા ડીએનએ પ્રાપ્ત કરવા માટે રચાયેલ છે.
અલગ ડીએનએ સંગ્રહ અને સંચાલન
DN ડીએનએ સ્ટોર કરવા માટે શ્રેષ્ઠ પ્રયાસો
એકવાર શુદ્ધ થઈ ગયા પછી, ડીએનએ લાંબા - ટર્મ સ્ટોરેજ માટે - 20 ° સે અથવા - 80 ° સે પર, તે બફરની જેમ યોગ્ય બફરમાં સંગ્રહિત થવો જોઈએ. વારંવાર સ્થિર થવાના ચક્રને ટાળો કારણ કે તેઓ ડીએનએ અધોગતિનું કારણ બની શકે છે.
Down ડાઉનસ્ટ્રીમ એપ્લિકેશન માટે ડીએનએ અખંડિતતા જાળવી રાખવી
ડીએનએ અખંડિતતા જાળવવા માટે, જંતુરહિત, ન્યુક્લીઝ - મફત નળીઓ અને ઉકેલોનો ઉપયોગ કરો. આ સુનિશ્ચિત કરે છે કે ડીએનએ અનિયંત્રિત અને ક્લોનીંગ, સિક્વન્સીંગ અને પીસીઆર જેવી એપ્લિકેશનો માટે યોગ્ય રહે છે.
લગભગવાદળી
જિઆંગસુ હિલજેને સુઝહોમાં તેનું મુખ્ય મથક (10,000㎡ જીએમપી પ્લાન્ટ્સ અને આર એન્ડ ડી સેન્ટર) સ્થાપિત કર્યું, જે સુંદર તાઇહુ તળાવનું એક લેકેશોર શહેર સુઝોહૂ, અને શેનઝેન અને શાંઘાઈમાં બે મેન્યુફેક્ચરિંગ સાઇટ્સ છે, જે તેના ઉત્પાદક નેટવર્કના દેશભરમાં વિસ્તરે છે. યુ.એસ. માં નોર્થ કેરોલિના સાઇટ હાલમાં નિર્માણાધીન છે, જે તેની વૈશ્વિક હાજરીને વધુ ફેલાવે છે. હિલજેને સેલ્યુલર થેરેપી ઉત્પાદનોના વિકાસ માટે, શોધથી લઈને ડિલિવરી સુધી, ન્યુક્લિક એસિડ મેન્યુફેક્ચરિંગ માટેના પ્લેટફોર્મ્સ, સીરમ - મફત સસ્પેન્શન સંસ્કૃતિ, બંધ પ્રક્રિયા વિકાસ અને ક્યુસી પરીક્ષણ માટે એક સ્પષ્ટ માર્ગ બનાવ્યો છે. બ્લુકીટ ઉત્પાદનો ગુણવત્તા નિયંત્રણ માટે રચાયેલ છે, સેલ્યુલર થેરેપી નવીનતાઓની સફળતાની ખાતરી આપે છે.
પોસ્ટ સમય: 2024 - 09 - 05 14:47:03
