Tha e ag àrdachadh DNA bho E. Coli na mhodh-obrach bunaiteach ann am bith-eòlas moilecular. Coisichidh an artaigil seo riut tron phròiseas gu lèir, a 'toirt seachad ceumannan mionaideach agus mìneachadh, a' dèanamh cinnteach gu bheil thu a 'tuigsinn gach cuid an saidheans agus taobhan practaigeach den dòigh-obrach. Co-dhiù an e neach-rannsachaidh a th 'annad no neach ùr don Lab, bidh an stiùireadh seo na ghoireas luachmhor.
Ag ullachadh crochadh cealla
● Cruinneachadh de na ceallan E. coli
Bidh a 'chiad cheum ann a bhith a' fàs DNA bho E. Coli a 'toirt a-steach a bhith a' cruinneachadh na ceallan bacterial. Mar as trice bidh seo a 'fàs E. coli ann am meadhan leaghan freagarrach gus an ruig e an Ìre Prearitmic Ìre Fàs Preitlig. Tha an t-àm deatamach oir tha ceallan anns an ìre seo a tha comasach agus nas fhasa Lyse, a bheir sin gu Toradh DNA nas àirde.
● Ceallan ath-shuidheachadh ann am bufair iomchaidh
Tha ceallan cruinnichte an uairsin air an ath-shuidheachadh ann am bufair freagarrach. Tha roghainn cumanta na tris - Edta (Te) bufair, a chuidicheas le bhith a 'cumail suas ionracas an DNA rè a' phròiseas às-tharraing. Tha am bufair a 'frithealadh ioma-adhbhar: bidh e a' bun -ochdan a 'PhH, gu chaochail a chaochladh DNA, agus a' toirt seachad àrainneachd iomchaidh an dèidh sin.
Cealla-ceallan pellet
● Paramadairean airson centrifugation (astar agus ùine)
Às deidh dhaibh na ceallan a thoirt a-mach, tha an stad air a 'chasaid gu bheil iad fo choileanadh gus na ceallan a sgeileachadh. Tha astar centrifugtion agus ùine nam paramadairean deatamach. Mar as trice, tha centrifugation air a chluich aig timcheall air 4,000 - 6,000 g airson 10 - 15 mionaid aig 4 ° C. Bidh seo a 'dèanamh cinnteach gu bheil na ceallan a' cruthachadh peilt teann aig bonn an tiùb a 'chiad àireamh-ama.
● Cho cudromach sa tha peille ceart
Tha paille ceart riatanach gus na ceallan a sgaradh bho na co-phàirtean fàis agus na pàirtean soluble eile. Gu math - chruthaich pellet a 'dèanamh na ceumannan a dh' aindeas na ceumannan a dh 'aindeas na ceumannan a dh' aindeoin na ceumannan a dh 'aindeoin na ceumannan a dh' aindeoin agus nas èifeachdaiche, a 'dèanamh cinnteach gum bi àireamhan beag a' call cheallan agus, mar sin, toradh DNA as àirde.
Toirt air falbh superantant
● dòighean airson toirt air falbh superantt
Aon uair 's gu bheil na ceallan ann an seallan, feumar an supertant (an leaghte os cionn na pellet) a thoirt air falbh gu faiceallach gun a bhith a' cur dragh air peilear cealla. Mar as trice thèid seo a dhèanamh a 'cleachdadh micropette. Tha e deatamach gus an ceum seo a dhèanamh gu faiceallach gus nach cuir iad a-mach ceallan sam bith.
● A 'dèanamh cinnteach gum bi lughdachadh cuibhlichean cealla cealla
A 'dèanamh cinnteach gu bheil call beag air chall a' phellet cealla a 'toirt a-steach pìobeachd faiceallach agus, ma tha sin riatanach, ioma chuairt dheir de chèile agus toirt air falbh supertantt. Is e an amas a bhith a 'cumail uimhir de cheallan' s as urrainn anns a 'pheilear airson faighinn seachad air DNA as motha.
Fuasgladh lysis nuclasi a bharrachd
● pàirtean de fhuasgladh lysòidean nuclasi
Mar as trice tha inneal-glanaidh lyis niuclasach (mar SDS), bufair (mar tris - hcl), agus àidseant cala). Tha an neach-glanaidh a 'briseadh a' mhàl cealla agus cèis niùclasach, a 'leigeil às susbaint a' chilleil, a 'toirt a-steach DNA, a-steach don fhuasgladh.
● Dreuchd ann a bhith a 'briseadh ballachan cealla
Tha am fuasgladh lysis nuclasi chan ann a-mhàin a 'tionndadh membran cealla ach cuideachd a' briseadh sìos ballachan cealla agus na cnapan gu h-èifeachdach gus DNA a leigeil ma sgaoil don fhuasgladh a-steach don fhuasgladh.
Ath-stad cheallan
● Pìob socair gus an tiormachadh DNA a sheachnadh
Aon uair 's gu bheil am fuasgladh lysòs nucici air a chur ris, feumar na ceallan a chur air ais gu socair gus an tiormachadh DNA a sheachnadh. Faodaidh rùsgadh an DNA a bhriseadh ann am criomagan nas lugha, a dh 'fhaodadh a bhith nan duilgheadas airson tagraidhean sìos an abhainn - Molecular - cuideam DNA.
● A 'dèanamh cinnteach à ath-leasaiche iomlan
Bidh ath-chuir a-steach iomlan a 'dèanamh cinnteach gu bheil na ceallan uile air an lasadh gu èideadh, a' meudachadh d chànan. Faodar seo a choileanadh le pìob pìob socair no Vortexing am fuasgladh aig astar ìosal.
Infeuradh air ceallan Lyse
● suidheachaidhean teòthachd airson incubation
Tha na ceallan ath-leasaichte air an toirt air falbh aig teòthachd sònraichte gus dèanamh cinnteach gu bheil lyis iomlan. Mar as trice bidh seo air a dhèanamh aig 37 ° C gu 55 ° C. Faodaidh an dearbh teòthachd is ùine atharrachadh a rèir a 'phròtacal agus na riatanasan sònraichte de phiteachas an DNA a chleachdadh.
● Ùine a dh 'fheumar airson Lyis èifeachdach
Tha an ùine àbhaisteach airson goir eadar 20 gu 30 mionaid, ach faodar a dhèanamh stèidhichte air èifeachdas lysis cealla a chaidh fhaicinn. Is dòcha gum feumar cleachdadh fada riatanach airson lyis a chrìochnachadh ach bu chòir a chothromachadh an aghaidh cunnart truailleadh DNA.
Fuarachadh ri teòthachd an t-seòmair
● cudromachd air fuarachadh mean air mhean
An dèidh gu bith, tha an Lysate air a fuarachadh gu tur mean air mhean gu teòthachd an t-seòmair. Bidh fuarachadh mean air mhean a 'cuideachadh le bhith a' cleachdadh an DNA agus a 'lughdachadh cunnart clisgeadh teirmeach, a dh' fhaodadh a bhith a 'lughdachadh an DNA.
● Buaidhean air sprùilleach DNA agus Cellular
Le bhith a 'fuarachadh ri teòthachd an t-seòmair leigidh an sprùilleach cealla a bhith a' cur stad air, ga dhèanamh nas fhasa an DNA a sgaradh anns na ceumannan às deidh sin. Bidh seo cuideachd a 'cuideachadh le bhith a' dèanamh coimeas eadar na gnìomhan enzyme agus a 'comasachadh RANNEVER RAN le làimhseachadh RNASE.
Fuasgladh rnase a bharrachd
● adhbhar ri RNASE anns a 'mhodh-obrach
Thèid fuasgladh RSSe a chur ris gus RNA a lughdachadh, a dh 'fhaodadh a bhith glanaidh leis an DNA agus cuir bacadh air tagraidhean sìos an abhainn. Bidh Rnease a 'cladhach Rna, a' fàgail an DNA gu h-iomlan.
● A 'cur casg air truailleadh RNA
Tha casg air truailleadh RNA a 'cur casg air truailleadh RNA airson tagraidhean a dh' fheumas DNA fìor, leithid PCR agus seiche. Bidh an làimhseachadh runase a 'dèanamh cinnteach gu bheil an DNA iomallach an-asgaidh bho RNA Trusalantants.
Purtification DNA
● Cothroman airson DNA a sgaradh bho phàirtean cealla eile
Faodar grunn dhòighean a chleachdadh gus DNA a ghlanadh bhon lysate. Tha iad sin a 'toirt a-steach phonel - an toirt air falbh cloolto, sileadh ethanol, agus a' cleachdadh a bhith a 'cleachdadh feabhas malairteach E. Coli Dna Kits. Tha a bhuannachdan agus nan co-dhùnaidhean aig gach dòigh, le pasgan malairteach a 'tabhann goireasachd agus toraidhean cunbhalach.
● Beachdachaidhean airson DNA Purity
Tha Purity na fheart deatamach airson soirbheachas tagraidhean sìos an abhainn. Tha Kits Malairteach, leithid a 'chille The Cell The Cell The Cenrapy E. Coli DNA, air a dhealbhadh gus toradh a thoirt air falbh pròtandairean, lipids, agus truaillearan eile.
Stòradh agus làimhseachadh DNA iomallach
● Cleachdaidhean as fheàrr airson DNA a stòradh
Nuair a bha iad air an glanadh, bu chòir DNA a bhith air a stòradh ann am bufair freagarrach, mar bufer, aig - 20 ° C no - 80 ° C airsonadh air a stòradh fada. Seachain reothadh gu tric - leaghadh mar as urrainn dhaibh truailleadh DNA adhbhrachadh.
● A 'cumail suas ionracas DNA airson tagraidhean sìos an abhainn
Gus ionracas DNA a chumail suas, cleachd steril, nuclease - tiùb an-asgaidh agus fhuasglaidhean. Bidh seo a 'dèanamh cinnteach gu bheil an DNA fhathast gun chothromachadh agus freagarrach airson tagraidhean leithid cladh, seiche, agus PCR.
Mu dheidhinnBluekit
Stèidhich Jiannsu Hillgene a phrìomh oifis (10,000㎡ planntrais GMP agus Ionad R & D) ann an Sgìre Wuzhog, a tha suidhichte ann an Shenzhe Senzhen agus Shanghai, a 'leudachadh a lìonra saothrachaidh air feadh na dùthcha. Tha làrach Carolina a Tuath anns na SA an-dràsta ga thogail an-dràsta, a 'sgaoileadh a làthaireachd na cruinne. Tha Hillgene air slighe a thogail a thogail airson a bhith a 'leasachadh bathar leigheis cealla, le àrd-chabhsairean airson saothrachadh niùclasach, serum - leasachadh pròiseas dùinte, leasachadh pròiseas dùinte, agus deuchainnean QC. Tha toraidhean gorm air a dhealbhadh airson smachd càileachd, a 'dèanamh cinnteach à soirbheachas Innealan Ar-Obrachaidh Cellular.
Ùine a 'phuist: 2024 - 09 - 05 14:47:03
