ই কোলি থেকে ডিএনএ বিচ্ছিন্ন করা আণবিক জীববিজ্ঞানের একটি মৌলিক পদ্ধতি। এই নিবন্ধটি আপনাকে পুরো প্রক্রিয়াটির মধ্য দিয়ে চলবে, বিস্তারিত পদক্ষেপ এবং ব্যাখ্যা সরবরাহ করবে, আপনি বিজ্ঞান এবং পদ্ধতির ব্যবহারিক দিক উভয়ই বুঝতে পেরেছেন তা নিশ্চিত করে। আপনি কোনও পাকা গবেষক বা ল্যাবটিতে নবাগত, এই গাইডটি একটি মূল্যবান সংস্থান হবে।
সেল সাসপেনশন প্রস্তুতি
E ই কোলি সেল সংগ্রহ
ই কোলি থেকে ডিএনএ বিচ্ছিন্ন করার প্রথম পদক্ষেপে ব্যাকটিরিয়া কোষ সংগ্রহ করা জড়িত। এটি সাধারণত লোগারিদমিক বৃদ্ধির পর্যায়ে পৌঁছানো পর্যন্ত উপযুক্ত তরল মাধ্যমের মধ্যে ই কোলি বাড়ানো প্রয়োজন। সময়টি অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ কারণ এই পর্যায়ে কোষগুলি সবচেয়ে কার্যকর এবং লাইসির পক্ষে সহজ, যার ফলে ডিএনএ উচ্চতর ফলন হবে।
A একটি উপযুক্ত বাফারে সেলগুলি পুনরায় জমা দেওয়া
সংগৃহীত কোষগুলি তখন উপযুক্ত বাফারে পুনরায় জমা দেওয়া হয়। একটি সাধারণ পছন্দ হ'ল একটি ট্রিস - ইডিটিএ (টিই) বাফার, যা নিষ্কাশন প্রক্রিয়া চলাকালীন ডিএনএর অখণ্ডতা বজায় রাখতে সহায়তা করে। বাফার একাধিক উদ্দেশ্যে পরিবেশন করে: এটি পিএইচ স্থিতিশীল করে, ডিভলেন্ট কেশনগুলি চ্লেট করে যা অন্যথায় ডিএনএকে হ্রাস করতে পারে এবং পরবর্তী এনজাইমেটিক প্রতিক্রিয়াগুলির জন্য একটি সর্বোত্তম আয়নিক পরিবেশ সরবরাহ করে।
পেলিট সেলগুলিতে সেন্ট্রিফিউগেশন
Recent সেন্ট্রিফিউগেশন (গতি এবং সময়) এর জন্য প্যারামিটারগুলি
কোষগুলি পুনরায় জমা দেওয়ার পরে, সাসপেনশনটি কোষগুলিকে পেলিট করার জন্য সেন্ট্রিফিউগেশন সাপেক্ষে। সেন্ট্রিফিউগেশন গতি এবং সময় সমালোচনামূলক পরামিতি। সাধারণত, সেন্ট্রিফিউগেশন প্রায় 4,000 - 6,000 গ্রাম 10 - 15 মিনিটের জন্য 4 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে সঞ্চালিত হয়। এটি নিশ্চিত করে যে কোষগুলি সেন্ট্রিফিউজ টিউবের নীচে একটি টাইট পেলেট গঠন করে।
Prick সঠিক পেলিটিংয়ের গুরুত্ব
কোষগুলিকে বৃদ্ধির মাধ্যম এবং অন্যান্য দ্রবণীয় উপাদানগুলি থেকে পৃথক করার জন্য যথাযথ পেলিটিং অপরিহার্য। একটি কূপ - গঠিত পেলেটটি পরবর্তী পদক্ষেপগুলি সহজ এবং আরও দক্ষ করে তোলে, কোষগুলির ন্যূনতম ক্ষতি নিশ্চিত করে এবং তাই সর্বাধিক ডিএনএ ফলন।
সুপারেনট্যান্ট অপসারণ
Operatant সুপারিনট্যান্ট অপসারণের জন্য কৌশলগুলি
একবার কোষগুলি ছোঁড়া হয়ে গেলে, সুপারেনট্যান্ট (পেলিটের উপরে তরল) অবশ্যই সেল পেলিটটি বিরক্ত না করে সাবধানতার সাথে অপসারণ করতে হবে। এটি সাধারণত একটি মাইক্রোপিপেট ব্যবহার করে করা হয়। কোনও কোষ হারাতে এড়াতে এই পদক্ষেপটি নিখুঁতভাবে সম্পাদন করা অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ।
Cell সেল পেলিটের ন্যূনতম ক্ষতি নিশ্চিতকরণ
সেল পেলিটের ন্যূনতম ক্ষতি নিশ্চিতকরণে সাবধানতার সাথে পাইপটিং এবং প্রয়োজনে একাধিক রাউন্ড সেন্ট্রিফিউগেশন এবং সুপারেনট্যান্ট অপসারণের সাথে জড়িত। লক্ষ্যটি হ'ল সর্বোচ্চ ডিএনএ পুনরুদ্ধারের জন্য পেলেটে যতটা সম্ভব কোষ রাখা।
নিউক্লিয়াস লিসিস সমাধান সংযোজন
New নিউক্লি লিসিস সমাধানের উপাদানগুলি
নিউক্লিয়াস লিসিস দ্রবণটিতে সাধারণত একটি ডিটারজেন্ট (এসডিএসের মতো), একটি বাফার (যেমন ট্রিস - এইচসিএল) এবং একটি চ্লেটিং এজেন্ট (ইডিটিএর মতো) থাকে। ডিটারজেন্টটি কোষের ঝিল্লি এবং পারমাণবিক খামকে ব্যাহত করে, ডিএনএ সহ সেলুলার সামগ্রীগুলি সমাধান করে।
Cell কোষের দেয়াল ভাঙতে ভূমিকা
নিউক্লিয়াস লিসিস দ্রবণটি কেবল কোষের ঝিল্লিকে লাইস করে না তবে প্রোটিন এবং লিপিডগুলিকেও অস্বীকার করে, কার্যকরভাবে কোষের দেয়াল এবং পারমাণবিক খামগুলি ভেঙে ডিএনএকে দ্রবণে ছেড়ে দেয়।
কোষের পুনঃস্থাপন
N ডিএনএ শিয়ারিং এড়াতে মৃদু পাইপটিং
একবার নিউক্লিয়াস লিসিস সমাধান যুক্ত হয়ে গেলে, ডিএনএ শিয়ারিং এড়াতে কোষগুলিকে আলতো করে পুনরায় জমা দেওয়া দরকার। শিয়ারিং ডিএনএকে আরও ছোট টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো টুকরো
Res সম্পূর্ণ পুনর্নির্মাণ নিশ্চিতকরণ
সম্পূর্ণ পুনর্নির্মাণ নিশ্চিত করে যে সমস্ত কোষকে সমানভাবে লিজ করা হয়েছে, ডিএনএ পুনরুদ্ধারকে সর্বাধিক করে তোলা। এটি স্বল্প গতিতে মৃদু পাইপটিং বা ঘূর্ণন করে সমাধানের মাধ্যমে অর্জন করা যেতে পারে।
লাইস সেলগুলিতে ইনকিউবেশন
In ইনকিউবেশন জন্য তাপমাত্রা সেটিংস
সম্পূর্ণ লিসিস নিশ্চিত করতে পুনরায় জমা দেওয়া কোষগুলি একটি নির্দিষ্ট তাপমাত্রায় সজ্জিত হয়। এটি সাধারণত 37 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেড থেকে 55 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেডে করা হয়। সঠিক তাপমাত্রা এবং সময়কাল প্রোটোকল এবং ডিএনএ বিচ্ছিন্নতা কিটের নির্দিষ্ট প্রয়োজনীয়তার উপর নির্ভর করে পরিবর্তিত হতে পারে।
L লিসিসের জন্য সময়কাল প্রয়োজন
ইনকিউবেশনটির জন্য সাধারণ সময়কাল 20 থেকে 30 মিনিটের মধ্যে থাকে তবে এটি পর্যবেক্ষণ করা সেল লিসিসের দক্ষতার ভিত্তিতে সামঞ্জস্য করা যেতে পারে। সম্পূর্ণ লিসিসের জন্য দীর্ঘায়িত ইনকিউবেশন প্রয়োজনীয় হতে পারে তবে ডিএনএ অবক্ষয়ের ঝুঁকির বিরুদ্ধে ভারসাম্যপূর্ণ হওয়া উচিত।
ঘরের তাপমাত্রায় শীতল হচ্ছে
Constance ধীরে ধীরে শীতল করার গুরুত্ব
ইনকিউবেশন পরে, লাইসেটটি ধীরে ধীরে ঘরের তাপমাত্রায় শীতল করা হয়। ধীরে ধীরে কুলিং ডিএনএকে স্থিতিশীল করতে সহায়তা করে এবং তাপীয় শকের ঝুঁকি হ্রাস করে, যা সম্ভাব্যভাবে ডিএনএকে হ্রাস করতে পারে।
D ডিএনএ এবং সেলুলার ধ্বংসাবশেষের উপর প্রভাব
ঘরের তাপমাত্রায় শীতল হওয়া সেলুলার ধ্বংসাবশেষকে বৃষ্টিপাতের অনুমতি দেয়, পরবর্তী পদক্ষেপগুলিতে ডিএনএকে আলাদা করা সহজ করে তোলে। এটি এনজাইম ক্রিয়াকলাপগুলি স্থিতিশীল করতে সহায়তা করে এবং আরএনএএস চিকিত্সার মাধ্যমে আরএনএ অপসারণের সুবিধার্থে।
আরএনএএস সমাধান সংযোজন
Re পদ্ধতিতে আরএনএজের উদ্দেশ্য
আরএনএর সমাধান আরএনএতে যুক্ত করা হয়, যা অন্যথায় ডিএনএ দিয়ে শুদ্ধ করতে পারে এবং ডাউন স্ট্রিম অ্যাপ্লিকেশনগুলিতে হস্তক্ষেপ করতে পারে। আরএনএএস নির্বাচন করে ডিএনএ অক্ষত রেখে আরএনএ হজম করে।
R আরএনএ দূষণ রোধ করা
আরএনএ দূষণ রোধ করা এমন অ্যাপ্লিকেশনগুলির জন্য গুরুত্বপূর্ণ যা খাঁটি ডিএনএ, যেমন পিসিআর এবং সিকোয়েন্সিংয়ের প্রয়োজন। আরএনএএস চিকিত্সা নিশ্চিত করে যে বিচ্ছিন্ন ডিএনএ আরএনএ দূষক থেকে মুক্ত।
ডিএনএ শুদ্ধকরণ
Cet অন্যান্য সেলুলার উপাদানগুলি থেকে ডিএনএকে পৃথক করার পদ্ধতিগুলি
লাইসেট থেকে ডিএনএ শুদ্ধ করতে বেশ কয়েকটি পদ্ধতি ব্যবহার করা যেতে পারে। এর মধ্যে রয়েছে ফেনল - ক্লোরোফর্ম এক্সট্রাকশন, ইথানল বৃষ্টিপাত এবং বাণিজ্যিক ই কোলি ডিএনএ কিট ব্যবহার করে। প্রতিটি পদ্ধতির বাণিজ্যিক কিটগুলি সুবিধার্থে এবং ধারাবাহিক ফলাফলের সাথে এর উপকারিতা এবং কনস রয়েছে।
D ডিএনএ বিশুদ্ধতার জন্য বিবেচনা
বিশুদ্ধতা ডাউন স্ট্রিম অ্যাপ্লিকেশনগুলির সাফল্যের জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ কারণ। বাণিজ্যিক কিটস, যেমন সেল থেরাপি ই। কোলি ডিএনএ কিট, কার্যকরভাবে প্রোটিন, লিপিড এবং অন্যান্য দূষকগুলি সরিয়ে দিয়ে উচ্চতর - বিশুদ্ধতা ডিএনএ উত্পাদন করার জন্য ডিজাইন করা হয়েছে।
বিচ্ছিন্ন ডিএনএ স্টোরেজ এবং পরিচালনা
D ডিএনএ সংরক্ষণের জন্য সেরা অনুশীলন
একবার পরিশোধিত হয়ে গেলে, ডিএনএ দীর্ঘকাল - টার্ম স্টোরেজের জন্য - 20 ডিগ্রি সেন্টিগ্রেড বা - 80 ° C এ তে বাফারের মতো উপযুক্ত বাফারে সংরক্ষণ করা উচিত। ঘন ঘন ফ্রিজ এড়িয়ে চলুন - গলা চক্রগুলি কারণ তারা ডিএনএ অবক্ষয়ের কারণ হতে পারে।
Down ডাউন স্ট্রিম অ্যাপ্লিকেশনগুলির জন্য ডিএনএ অখণ্ডতা বজায় রাখা
ডিএনএ অখণ্ডতা বজায় রাখতে, জীবাণুমুক্ত, নিউক্লিজ - ফ্রি টিউব এবং সমাধানগুলি ব্যবহার করুন। এটি নিশ্চিত করে যে ডিএনএ অনিয়ন্ত্রিত এবং ক্লোনিং, সিকোয়েন্সিং এবং পিসিআর এর মতো অ্যাপ্লিকেশনগুলির জন্য উপযুক্ত।
সম্পর্কেব্লুবকিট
জিয়াংসু হিলজেন তার সদর দফতর (10,000㎡ জিএমপি প্ল্যান্টস এবং আর অ্যান্ড ডি সেন্টার) প্রতিষ্ঠা করেছেন, সুজুং জেলায় অবস্থিত সুজহু, সুন্দর তাইহু হ্রদের একটি লক্ষেশোর শহর সুজহু এবং শেনজেন এবং সাংহাইয়ের দুটি উত্পাদন সাইট, যা তার উত্পাদনশীল নেটওয়ার্ক নেশনওয়েডকে প্রসারিত করে। মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রে উত্তর ক্যারোলিনা সাইটটি বর্তমানে নির্মাণাধীন রয়েছে, এটি আরও বিশ্বব্যাপী উপস্থিতি ছড়িয়ে দিয়েছে। হিলজিন নিউক্লিক অ্যাসিড উত্পাদন, সিরাম - ফ্রি সাসপেনশন সংস্কৃতি, বন্ধ প্রক্রিয়া বিকাশ এবং কিউসি পরীক্ষার জন্য প্ল্যাটফর্ম সহ আবিষ্কার থেকে বিতরণ পর্যন্ত সেলুলার থেরাপি পণ্যগুলি বিকাশের জন্য একটি এক্সপ্রেস পথ তৈরি করেছে। ব্লুবকিট পণ্যগুলি সেলুলার থেরাপি উদ্ভাবনের সাফল্য নিশ্চিত করে গুণমান নিয়ন্ত্রণের জন্য ডিজাইন করা হয়েছে।
পোস্ট সময়: 2024 - 09 - 05 14:47:03
