Melemo ea ho sebelisa enke ea BCA ke efe?

Selelekela ho BCA Protein Assay

BCA (Bicinchonic acid) protheine ea protheine ea protheine ke mokhoa oa bohlokoa oa tlhahlobo ea biochemical le kalafo ea cepy. E nolofalletsa ho khetholla liprotheine tse felletseng tsa protheine ka mohlala. Mokhoa ona o sebetsa ka molao-motheo oa protheine - Phello ea koporo, e lateloang ke ho khesoa ha mebala ea li-Ions tsa koporo tse fokotsehileng. Ho tsebahala ha eona ho tsoa mosebetsing oa ona o pharalletseng ho feta tekanyetso e ngata ea protheine, ho kenyelletsa le likarolo tse eketsang joalo ka litlolo tsa lihlahisoa le barekisi ba tšimong.

Ho lumellana le li-setunte

Ho sebetsana le sampole tse rarahaneng

E 'ngoe ea melemo ea profein ea BCA Assay e amanang le li-sesifa. Ho fapana le mekhoa e mengata ea protheine e ngata, 'mino oa BCA o ka amohela ho fihlela ho 5% Surfactats ka sampole. Karolo ena e molemo haholo ho bafuputsi le batho bahlahisi ba sebetsanang le mehlala e rarahaneng, moo li-detergents li neng li sebelisoa hangata ho soela liprotheine. Bakeng sa lits'ebetso tsa kalafo ea kalafo ea 'mele, ho etsa eka ho netefatsa hore ho tiea hoa prosen le lula le le teng ho ba teng ha lintho tsena tse tsamaeang le tsona tse kenang.

Ts'ebetso maemong a thata

Ho nahana ka BCa ho fana ka litholoana tse tšepahalang le maemong a liteko. Ho bakoa ke boea ba protheine, joalo ka amino acid e fapaneng le liketane, e fokotsa protheine ea protheine - ea liprotheine. Ntho ena e sa nepahalang e bohlokoa bakeng sa barekisi ba hlokang liphetho tse feto-fetohang le tse khothatsang ba ho boloka le ho phela 26 ho protein ea protein.

Nako e fokotsehileng ea ho thibela

Katleho ka thipa - Melao ea mahala

Kenyelletso ea boiphetetso - Litekanyetso tsa protheine tsa mahala ho The BCA Assay Kit Litekanyetso tsena tse reretsoeng libui li entsoe ka ho hokahanngoa le ma-multichanlen, li lumella bafuputsi, le bahlahisi ba ho potlakisa ts'ebetso ntle le ho sekisetsa ho nepahala. Bakeng sa likopo tsa kalafo ea lingaka tsa kalafo, moo ho leng teng - litereke tse hlokometsoeng li tloaelehile, ts'ebetso ena e bohlokoa haholo.

TLHOKOMELISO E FUMANANG

Tsela ena e ileng ea thatha e fokotsa tlhokahalo ea mehato ea ho phomola, e seng nako eo re eang ho eona empa e boetse e amohela liphoso. Ka ho tlosa mehato ena, The BCA APANYS E TLOTLISITSOETSOE HANGATA, E lumella barekisi hore ba kopane le li-ramiqules tsa tright tsa tlhahiso le ho ntlafatsa litlhophisong tsa laboratoring.

Ntlafatso ea protheine e unngoang

Tekanyo e nepahetseng ho feta mefuta ea protheine

Assance Assay e bonts'a karabo e tšoanang ho profesheneng e fapaneng ha e bapisoa le Dye - Basa Boiketsetso ea Bradford. Ntho ena e sa tloaelehang e fumaneha ka bongata ho palo ea litlamo tsa Pepside, fokotsa kelello ea Assay ho fapana meralo ea liprotheine. Bakeng sa bahlahisi ba kenyang pele ho hlahisa lingaka tsa lingaka tsa lingaka, sena se etsa hore tekanyo e nepahetseng ea li-protheine e fapaneng ea naha, e khothaletse boitshwarong ho dipolwa.

Ntlafatso ea Assages

Ka ho fana ka liphetho tse sa feleng Ho sa tsotelehe litheolelo, BCA Assay e bohlokoa haholo bakeng sa barekisi ba nang le lithupelo le Melao ea Lihlahisoa. Dissionceton ena e fetolela ho data e tšepahalang, e bohlokoa bakeng sa lipatlisiso tsa ho hlapaola le masimo a amanang.

Sensitivity le ho lemoha sebaka sa ho lemoha

Khopolo e phahameng ea hore e be le likotsi tse tlase

Assawas ea BCA e fana ka maikutlo a phahameng a kelello, e khonang ho bona liprofinse tsa protheine ka tlase ho 0.5 μg / ml. Boemo bona bo phahameng bo pharalletseng bo etsa hore e tšoanele bakeng sa mefuta e fapaneng ea lits'ebetso, ho tsoa ho lipatlisiso tsa mantlha ho nts'etsopele ea mantlha ea kalafo. Boikutlo bo joalo bo bohlokoa ha bo sebetsana le bongata ba liprotheine tse nang le kalafo ea liofisi tsa lisele le lipatlisiso tsa pharma.

Lipara tsa ho lemoha ka botlalo

Sekhahla sa mebala-bala ho 562 nm e netefatsa tahlehelo e nyane (e ka tlase ho 10%), e lumella barekisi le barekisi ho fihlela lipalo tsa pele. Ho nepahala hore ho bohlokoa bakeng sa ho nts'etsapele lihlahisoa tsa kalafo tse sebetsang tsa Cell Phihlela, moo ho sebetsa protheine e nepahetseng ka kotloloho e ka ama katleho ea kalafo.

Ho fokotsa ts'ebeliso lits'ebetsong tsa Assay

LITLHAKISO TSE KHOLO

BCA Una ka mekhoa e nolofalitsoeng, e na le molemo bakeng sa basebelisi ba bacha le litsebi tsa ntoa. Re Loketsee - Sebelisa Reages le Protocol e otlolohileng e fokotsa liphoso tse ka bang teng, ho kenyeletsoa le baetsi ba liprothekeng.

Mosebelisi - moralo o botsoalle

E etselitsoe ka boiketlo ba ho sebelisoa kelellong, The BCA Assais e fokotsa mathata a mahlale, e nolofalletsang boikoetliso ba bo-motheo le ho amoheloa ka potlako kahare ho litlhophiso tsa laboratoring. Ho fumaneha hoa sena ho thusa ho hlahisa tšebetso bakeng sa barekisi ba hlokang ho ba le tlhahiso e phahameng ntle le ho sekisetsa ho nepahala.

Ho nepahala le ho Tšoanela

Liphetho tse tšepahalang ho liteko

BCA A mangeloi a fumana litholoana tse tšepahalang, o ne a tšoantšoa ke protheine e tlase - ho - protheine ea protheine. Ho lumellana hona hoa bohlokoa bakeng sa liteko tse hlokang ho phetoa khafetsa ha nako e ntse e le ka pherekano ea selefouno bakeng sa tlhahiso le netefatso ea liphetho.

Tekano le calibration

Tloaelo e khahlanong le BSA e hloekisitsoeng BSA e tsoang ho Setsi sa Melao le Theknoloji (NIS) e tiisa hore li-curve tse tloaelehileng tse hlakileng le tse sebelisitsoeng hantle. Khanyetsana ena e bohlokoa bakeng sa bahlahisi le barekisi ba ikemiselitseng ho fana ka Phahami -

Likarolo tsa mahlale a mokhoa oa BCa

Mochine oa Boachemical

Mokhoa oa BCA o thehiloe ho phokotso ea Cu²⁺ho cu⁺Ke protheine e mahareng a alkaline, e lateloang ke ho theha mohatelli oa bopherese le BCa, e sebetsang le pontšo ea mebala. Ena - ona ke karabelo e fana ka motheo oa ho ts'epahala bakeng sa proppications ea protein, ho kenyelletsa le nts'etsopele ea sehlahisoa sa cell.

Melemo e fetang likatse tse ling

Ha e bapisoa le mekhoa e kang Bradford Assastiay, mokhoa oa BCA o fana ka phapang e kholo ka lebaka la ho lumellana ha eona ka mefuta ea liprotheine tse fapaneng. Sena se e khetholla khetho e ratoang bakeng sa bahlahisi le barekisi ba hlokang ho feto-fetoha le litekanyetso tse feto-fetohang le tse tšepahalang.

Ho bapisoa le Bradford Assay

Phapang ea Bohlokoa Bophelong

Le ha ka bobeli BCA le Bradford Asways e sebelisoa haholo bakeng sa palo ea protheine e fumanehang habonolo ea lichelete. Bradford Assay e itšetleha ka dae - Prothen e tlamang, e ka fokolisang mefuta e fapaneng ea protheine ea protheine. Ho fapana le moo, Tlamo ea Peptide ea Pepside e tsamaisoa ka mokhoa o ts'oanang le ho ts'epahala, haholo-holo ho baetsi ba Baetsi le barekisi ba litaba tse amanang le bona.

Melemo ea BCA Assay

Khokahano ea BCA Assatanning e nang le libaka tse matla, tse pharaletseng le ho sebetsa ka mokhoa o nolofalitsoeng, le ho sebetsa ka mokhoa o nolofalitsoeng ho li fana ka matla bakeng sa likopo tse hlokang likopo tsena. Ho feto-fetoha ha eona ho etsa hore e tšoanelehe mekhoa e mengata ea liteko, e be le ntho e bohlokoa bakeng sa barekisi ba fanang ka lihlahisoa bakeng sa litlhoko tse fapaneng tsa lipatlisiso.

Phetha le likhothaletso

Hobaneng BCA e ratoa

BCA Estein e mabapi le ho lumellana ha eona le nako e hlophisitsoeng, e fokotsoeng nako e hlophisitsoeng, e ntlafalitsoeng ea protheine e ntlafalitsoeng le ho nepahala. Litšobotsi tsena li etsa hore e tšoanele bohlokoa haholo bakeng sa lits'ebeliso ho kalafo ea sele ea sele, e fana ka litholoana tse tšepahalang le tse sa fetoheng. Bakeng sa bahlahisi le barekisi, BCA Assawas e fana ka mokhoa o ts'epahalang oa ho bolela Phahameng ea boleng, e bohlokoa bakeng sa ho boloka litekanyetso tsa indasteri le ho tšehetsa nts'etsopele ea lihlahisoa.

Bluekit Fana ka litharollo

Bluekit e sebetsa e fana ka Tharollo ea BCA Protein Assation, e tsamaisa ho fihlela litlhoko tse itseng tsa bafuputsi, bahlahisi le barekisi. Li-kite tsa rona tse etselitsoeng ts'ebetso e ntlafalitsoeng, ho fana ka profeshe e tšepahalang le e sa fetoheng ea profeshetso e tšepahalang le e fetohileng ea likopo tse fapaneng. Ka Bluekit, o ka ntlafatsa ts'ebetso ea hau ea ho sebetsa le katleho, e netefatsa hore u kopana le litekanyetso tse phahameng ka ho fetisisa lipatlisisong tsa kalafo ea sele ea sele ea sele ea sele ea sele ea sele. Lumella Blukit e le molekane oa hau ka seo u se tšepang bakeng sa litlhoko tsohle tsa hau tsa prothein.